本发明涉及一种中药提取工艺，具体涉及一种超临界提取华蟾素的方法。
背景技术：
华蟾素来源于中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)的皮经过提取分离得到，是我国自行研制的二类新药和国家中药保护品种，具有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖、抗乙肝病毒的药理作用，在抗肿瘤、治疗慢性乙型肝炎以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。
华蟾素注射液、口服液、片剂均为我国自行研制、独家生产的国家中药保护品种。在多年的研究和生产经验积累中发现，华蟾素的提取工艺对临床疗效的影响起着至关重要的作用。
近年来，超临界技术在中药提取中应用越来越广泛，主要原因是超临界流体技术具有以下优势：1、超临界流体技术萃取工艺简单，操作方便，能耗物耗小；2、萃取率较传统试剂强；3、提取时间快，生产周期短；4、有效成分不易破坏；5、安全性更高，无溶剂残留。因此，超临界流体技术在中药行业有效成分提取方面具有积极的意义。
技术实现要素：
针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种超临界提取华蟾素的方法，其实现了对有效物质的快速提取，减少溶剂使用，缩短提取时间，满足工业化生产的需要，为超临界技术在华蟾素生产中的应用打下基础。
本发明的技术方案概述如下：
一种超临界提取华蟾素的方法，其包括以下步骤：
S1：取干蟾皮，粉碎过筛，得蟾皮干粉；
S2：将蟾皮干粉经脱脂处理，去除蟾皮中的动物油脂，得脱脂蟾皮干粉；
S3：将脱脂蟾皮干粉采用超临界萃取法进行提取，得华蟾素浸膏；
S4：将华蟾素浸膏经减压干燥后，得到华蟾素提取物。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，S1中经粉碎过筛后的蟾皮干粉的粒度为10-30目。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，S2中脱脂处理采用有机溶剂萃取法或超临界二氧化碳萃取法。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，所述有机溶剂萃取法是采用正己烷或环己烷进行萃取脱脂，脱脂温度为60-80℃，脱脂时间为1-5小时。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，所述超临界二氧化碳萃取法的萃取条件为：以二氧化碳为萃取剂；在萃取釜内进行萃取，所述萃取釜内的压力为20-30MPa，在所述萃取釜内通入二氧化碳的流量为4-10BV/h，所述萃取釜内的萃取温度为40-80℃，萃取时间为0.5-2小时；与所述萃取釜相连通的用于收集脱脂处理中分离出的油脂的分离釜，所述分离釜内的压力为5-10MPa，所述分离釜内的分离温度为35-50℃。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，S3中所述的超临界萃取法的萃取条件为：
萃取剂选自二氧化碳、低碳醇、三乙胺或其组合；
在萃取釜内进行萃取，所述萃取釜内的压力为20-40MPa，在所述萃取釜内通入的萃取剂流量为4-10BV/h，所述萃取釜内的萃取温度为40-80℃，萃取时间为0.5-2小时；
与所述萃取釜相连通的用于收集萃取中分离出的二氧化碳的分离釜，所述分离釜内的压力为5-10MPa，所述分离釜内的分离温度为35-60℃。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，所述低碳醇为甲醇或乙醇。
优选的是，所述的超临界提取华蟾素的方法，其中，所述萃取剂中，二氧化碳、低碳醇和三乙胺三者的体积比为80-90∶10-20∶0-2。
本发明的有益效果是：本案通过对现有华蟾素的提取工艺的改进，引入了超临界二氧化碳萃取技术，实现了对有效物质的快速提取，减少了溶剂的用量，缩短了提取时间，满足工业化生产的需要，为超临界技术在华蟾素生产中的应用打下基础。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
(1)华蟾素提取
实施例1
准确称取干蟾皮550g，放入粉碎机中粉碎至全部通过10目药典筛。称取粉碎后的蟾皮干粉500g置入10L提取釜中，加入5L环己烷，80℃加热回流脱脂提取1h。脱脂后过滤环己烷，烘干滤饼，得脱脂蟾皮干粉。
将脱脂蟾皮干粉加入到萃取釜中，调节萃取釜压力为34MPa，萃取剂为：二氧化碳∶乙醇∶三乙胺＝80∶19∶1；向萃取釜中通入的萃取剂流量为4BV/h，萃取温度为80℃。调节与萃取釜相通的分离釜温度为60℃，压力为5MPa，萃取时间1小时，得华蟾素浸膏，浸膏经减压干燥，去除乙醇和三乙胺，得华蟾素提取物。
实施例2
准确称取干蟾皮550g，放入粉碎机中粉碎至全部通过10目药典筛。称取粉碎后的蟾皮干粉500g加到萃取釜中，以二氧化碳为萃取剂，调节萃取釜压力为20MPa，萃取剂流量为5BV/h，所述萃取釜内的萃取温度为60℃，萃取时间为0.5小时；与所述萃取釜相连通的有用于收集脱脂处理中分离出来的油脂的分离釜，所述分离釜内的压力为10MPa，所述分离釜内的分离温度为50℃，得脱脂蟾皮干粉。
将脱脂蟾皮干粉加入到萃取釜中，调节萃取釜压力为30MPa，萃取剂为∶二氧化碳：甲醇＝85∶15；向萃取釜中通入的萃取剂流量为6BV/h，萃取温度为70℃。调节与萃取釜相通的分离釜温度为50℃，压力为5MPa，萃取时间1.5小时，得华蟾素浸膏，浸膏经减压干燥，去除甲醇，得华蟾素提取物。
(2)有效成分含量的检测
按照国家药品标准WS3-B-3045-98进行检测。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加水使成5.0ml，摇匀，加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液(2→3)至刻度，摇匀，放置30分钟，照分光光度法，以水作空白，在555nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法：将所得的华蟾素提取物，用1000ml水溶解，得华蟾素溶液，备用。
精密量取华蟾素5ml，置10ml量瓶中，按标准曲线制备项下规定的方法,自“加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液(2→3)……”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中5-羟色胺的量，计算，即得。
经检测：
实施例1中华蟾素提取物溶液含吲哚类总生物碱(以5-羟色胺计)为15.6μg/mL；实施例2中华蟾素提取物溶液含吲哚类总生物碱(以5-羟色胺计)为18.2μg/mL，均高于国家标准。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。