一种总蟾毒内脂plga纳米微球冻干制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及冻干制剂，尤其涉及总蟾毒内酯PLGA纳米微球冻干制剂，本发明还涉及所述总蟾毒内酯PLGA纳米微球冻干制剂的制备方法，属于PLGA纳米微球冻干制剂及其制备领域。
【背景技术】
[0002]取自中药中华大蟾蜍皮部的华蟾素能解毒，消肿，止痛。适用于中、晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等的治疗。但经研究发现，华蟾素注射液中具抗肿瘤活性的总蟾毒内酯类(蟾毒配基类、蟾蜍毒素类)成分含量极低，主要为水溶性吲哚类生物碱(如5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黄等)类、氨基酸等成分，而大量的内酯类有效成分损失殆尽，目前尚未有生物碱成分有抗肿瘤活性的研究报道，且临床研究认为华蟾素不良反应心律失常、局部静脉刺激反应、皮肤反应、哮喘、超敏反应等均为水溶性吲哚类生物碱成分的药理作用所致。综上，华蟾素存在有效成分含量低，杂质多，质量及临床疗效不稳定、毒副作用大等严重缺陷，因此，富集发挥抗肿瘤活性的内酯类成分、去除生物碱及其他杂质成了我们研究的重心。
[0003]对华蟾素提取液进行分离纯化，得华蟾素有效部位一一总蟾毒内酯，主要含有蟾毒配基(resibufogenin)、华蟾醉毒基(cinobufagin)、蟾毒灵(bufalin)、蟾毒它灵(Bufotalin)、日蟾毒它灵-3-半辛二酸酯(Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾餘灵-3- 丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精-3- 丁二酰精氨酸酯等内酯类成分。针对市场上中药注射液普遍存在的诸多问题，开发出工艺先进、质量稳定、疗效高、毒副作用少的中药注射制剂是十分必要的，鉴于总蟾毒内酯具有独特的技术优势，我们对华蟾素注射液进行二次深度开发，研制了总蟾毒内酯冻干制剂一一 “注射用华蟾内酯”。
[0004]PLGA具有良好的生物相容性、缓释特性、可降解性，已被广泛用于微球的制备，该微球体系具有保护药物免遭破坏，靶向药物到某些特殊组织，延缓/控制药物释放，延长药物作用时间，降低药物毒性和刺激性等优点。FDA批准用作药物载体的材料，使其成为一种正在被广泛应用的抗肿瘤药物的载体，较传统化疗制剂相比具有抗肿瘤新生血管生成等多方面优势。并且我们可以根据临床需求具体调整合适的粒径，利用静脉注射、间质给药、口服给药等多种方式。
[0005]纳米微球(nanospheres, NSs)是20世纪70年代兴起的一种新型的给药系统，它是利用适宜的天然或者合成的高分子材料将载体包裹或者药物吸附而形成的球形或者是类球形的微粒。纳米微球制剂的主要优点:(I)解决口服水解药物的给药途径。(2)选择适宜的载体材料并优化制备工艺，可实现药物在体内几周或几个月缓慢释放，减少或者给药次数。(3)实现靶向给药，如微球修饰，药物作用于靶部位。(4)提高难溶性药物的溶解度和溶出度，发挥缓释作用。(5)纳米微球以一定速率释放，以维持有效血药浓度微球可以包载很多种药物，如化学类药物、蛋白类药物、多肽、DNA、RNA、天然药物，而且微球可以使帮助药物实现给药方式的多元化，可以通过口服、肺部、鼻腔给药。因此纳米微球是一种非常有前景的载体形式，值得我们进一步的研究与推广。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是提供一种总蟾毒内酯PLGA纳米微球；
[0007]本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种总蟾毒内酯PLGA纳米微球冻干制剂；
[0008]本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种总蟾毒内酯PLGA纳米微球及总蟾毒内酯PLGA纳米微球冻干制剂的制备方法。
[0009]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是:
[0010]本发明首先公开了一种总蟾毒内酯PLGA纳米微球，包括以下各组分:总蟾毒内酯、PLGA、冻干保护剂。
[0011]各组分的重量为:总蟾毒内酯I?5份，PLGA 5?50份，冻干保护剂0.5-5份
[0012]优选的，各组分的重量为:总蟾毒内酯I份，PLGA 10份，冻干保护剂0.5份。
[0013]其中，所述高分子聚合物PLGA的分子量为0.5-50000，其乳酸:羟基乙酸单体的摩尔比例为75:25、50:50、25:75中的一种或者几种材料混合。
[0014]本发明还公开了一种所述总蟾毒内酯PLGA纳米微球的制备方法，包括以下步骤:
[0015](I)按照所述配比称取各组分，将总蟾毒内酯、PLGA加入有机溶剂中，作为分散相；
[0016](2) F68水溶液为连续相；
[0017](3)超声环境下将分散相缓慢注入连续相中，形成0/W乳剂，
[0018](4)随即转移至磁力搅拌器上搅拌，使有机溶剂充分挥发后，冰浴条件下搅拌得纳米微球溶液，离心处理，即得总蟾毒内脂PLGA纳米微球。
[0019](5)将总蟾毒内脂PLGA纳米微球加入F68水中，加入冻干保护剂，冷冻干燥得到总蟾毒内酯PLGA纳米微球冻干制剂。
[0020]其中，步骤⑴所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮或无水乙醇中任意一种或两种以上按照任意比例组成的混合物；优选为二氯甲烷和乙酸乙酯按照任意比例组成的混合物；最优选为，二氯甲烷和乙酸乙酯按照体积比1:1组成的混合物；
[0021]步骤(4)的溶剂挥发过程中的搅拌速率为300?15000rpm，温度控制在4°C?40°C，溶剂挥发采用室温蒸发；冰浴条件下搅拌得到纳米微球溶液后，离心，离心速度为3000 ?12000rpm。
[0022]步骤(5)冻干保护剂选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、氯化钠、乳糖、山梨醇、木糖醇、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、甘油或甘氨酸的任意一种或两种以上按照任意比例组成的混合物
[0023]本发明所制备的总蟾毒内酯PLGA纳米微球粒径为150-210nm，包封率为50% -90%。
[0024]本发明中所述高分子聚合物PLGA不同分子量、其乳酸:羟基乙酸单体的不同摩尔比、有机溶剂的不同种类及其不同用量对总蟾毒内酯PLGA纳米微球平均粒径、包封率起重要影响作用。其中，高分子聚合物PLGA分子量40000，其乳酸:羟基乙酸单体的摩尔比75:25、有机溶剂为二氯甲烷和乙酸乙酯1:1所制得的总蟾毒内酯PLGA纳米微球平均粒径为168.5nm，包封率为89.8%，质量评价最好。因为，总蟾毒内酯PLGA纳米微球的粒径越小，其制得的冻干粉制剂药物的靶向性越好；单位投药量包封率越大，其可作用于肿瘤细胞的药量越大，效果越好。
[0025]本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果:
[0026]1.使用本方法制备的一种总蟾毒内脂PLGA纳米微球在保证总蟾毒内脂稳定性的条件下具有较高的包封率，可以保持体内最佳的药物浓度，并且延长药物作用的时间。因此，可实现药物的缓释、靶向给药，具有重要的理论价值和实际应用前景。
[0027]2.该制备方法具有工艺简便、制备成本低、工艺重现性好、样品需要量少，试验筛选的处方和工艺也可放大到生产应用，因而对产业化的应用具有指导意义。
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
[0029]实施例1总蟾毒内酯PLGA纳米微球的制备
[0030]将2mg总蟾毒内酯、20mgPLGA(高分子聚合物PLGA分子量40000，其乳酸:轻基乙酸单体的摩尔比75:25)溶于2mL 二氯甲烷和乙酸乙酯(体积比1:1)混合溶液中，作为分散相(油相)，F68水溶液为连续相(水相)，在800rpm室温搅拌下将