一种总蟾毒内酯脂质体注射液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物制剂领域，具体涉及天然活性成分总蟾毒内酯脂质体注射液及制 备方法。
【背景技术】
[0002] 华蟾素提取自中药中华大蟾蜍皮，系采用传统方法水提醇沉法值得的中药注射 液，华蟾素注射液抗肿瘤疗效显著。经研宄发现，华蟾素注射液中富含水溶性吲哚类生物碱 (如5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黄等）类、氨基酸等成分，而具抗肿瘤活性的总 蟾毒内酯类（蟾毒配基类、蟾蜍毒素类）含量却极低。临床认为华蟾素局部静脉刺激反应、 心律失常、皮肤反应、哮喘等均为水溶性吲哚类生物碱成分的药理作用所致，且目前尚无生 物碱类具有抗肿瘤活性的研宄报道，因此，提取富集华蟾素中的内酯类成分和去除生物碱 及其他杂质成分成了研宄的重点。
[0003] 对华蟾素提取液进行分离纯化，得华蟾素有效部位一一总蟾毒内酯，主要含有 蟾毒配基（resibufogenin)、华蟾酥毒基（cinobufagin)、蟾毒灵（bufalin)、蟾毒它灵 (Bufotalin)、日蟾毒它灵 _3_ 半辛二酸醋（Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾餘 灵-3-丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精-3-丁二酰精氨酸酯等内酯类成分。研宄表明，总蟾毒内 脂具有明显的抗肿瘤作用，而且还能将肿瘤细胞转化为正常细胞（诱导肿瘤细胞分化）、诱 导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移等作用。目前，临床上已有类 似总蟾毒内脂类注射剂且已广泛应用于中晚期肿瘤和慢性乙型肝炎病人。但在临床应用过 程中常出现静脉输注不畅、输液部位红肿、静脉内疼痛等血管刺激性不良反应，最终制约了 其进一步发展。
[0004] 脂质体（Lipsome)是磷脂、胆固醇等两性物质分散于水中形成的内部为水相的脂 质双分子层闭合囊泡。作为抗癌药物的载体，可以提高药物治疗指数，降低抗癌药物毒性和 减少抗癌药物副作用。由于它的组成是细胞膜的成分，因此可以体内正常代谢和消除。脂质 体的靶向性可显著降低药物对非靶器官的毒副作用从而增强疗效。因此，脂质体载药有明 显的优越性，成为药剂研宄的重点和热点。但是脂质体性质不稳定，易受周围环境的影响， 并且在储存的过程中，容易发生药物的渗漏现象。而脂质体注射液的应用，大大提高了制剂 的稳定性和生物利用度，提高了产品的质量，减少了毒副反应，适合于工业化大生产。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了以总蟾毒内酯为模型药物，采用脂质体包裹的办法将其制成注射 液。以期改善总蟾毒内酯毒性强、半衰期短等缺陷；此外，本发明的另一目的在于提供一种 总蟾毒内酯脂质体注射液的制备方法。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
[0007] 本发明首先公开了一种总蟾毒内酯脂质体注射液，它包括有效量的总蟾毒内酯、 磷脂、胆固醇、抗氧化剂、PBS液、有机溶剂和等渗注射用水。
[0008] 各组分的用量为：总蟾毒内酯500mg - 5g，磷脂2. 5g-200g，胆固醇IOOmg - 50g， 抗氧化剂Img - 10g，注射用水适量。同时满足总蟾毒内酯、磷脂、胆固醇三者的重量比为 1 : 5 ~40 : 1 ~10〇
[0009] 优选的组分用量配比为总蟾毒内酯、磷脂、胆固醇三者的重量比为1 : 20 : 5。
[0010] 其中所述的磷脂为天然磷脂中的大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、氢化大豆 磷脂中的一种或多种；合成磷脂中的二月桂酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰 磷脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂磷脂酰甘油的一种或多种。优选为大豆磷脂。
[0011] 所述的抗氧化剂可以是维生素 E，其与磷脂的重量比为1 : 1000~1 : 10,优选 为 1:100〇
[0012] 本发明提供的总蟾毒内酯脂质体注射液，具有以下优点：
[0013] 1.本发明提供的总蟾毒内酯脂质体注射液降低总蟾毒内酯的毒性、延长药物在体 内的作用时间以及局部聚集量，进而提高药物在体内的生物利用度；
[0014] 2.本发明还公开了一种总蟾毒内酯脂质体注射液的制备方法，包括以下步骤：
[0015] (1)备置下述重量或体积的原料：
[0016]
[0017] (2)将总蟾毒内醋、磷脂、胆固醇、维生素 E溶于有机溶剂中并混合均匀；用旋转蒸 发仪将溶液中的有机溶剂减压除去，在玻璃壁上形成脂质薄膜；
[0018] (3)加入磷酸缓冲液，搅拌30min，在室温下放置2h，使薄膜吸胀；再在室温下搅拌 2h，得到脂质体混悬液；得到的脂质体混悬液经过高压乳匀或者超声波分散处理，均化脂质 体；
[0019] (4)将得到的总蟾毒内醋脂质体在4000r/min离心15min，收集上清液加等渗注射 用水溶液至1000 mL ;
[0020] (5)经超滤膜除去细菌和热源、灌封，每支2mL，流通蒸汽消毒30min，即得总蟾毒 内酯脂质体注射液，在〇- 4°C储存。
[0021] 上述脂质体的磷酸缓冲液的pH为6- 8。
[0022] 上述制备脂质体的有机溶剂可以是氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚中的一种或多种， 优选为丙酮。
[0023] 本发明的总蟾毒内酯脂质体注射液，既能显著提高总蟾毒内酯的水溶性，又能降 低其血管刺激性，减少它的毒副作用。并且脂质体制成注射剂后，大大提高了制剂的稳定性 和生物利用度，提高了产品质量。
[0024] 本发明所制备的蟾毒内酯脂质体注射液用反透析法检测，以包封率做质量评价， 所测得的总蟾毒内酯脂质体注射液的包封率为59. 85% -88. 99%;最优的，所测得的蟾毒内 酯非离子表面活性剂泡囊包封率为88. 99%。
[0025] 本发明中所述磷脂、胆固醇、抗氧化剂及有机溶剂的不同种类及其不同用量对蟾 毒内酯脂质体注射液的包封率、载药量起重要影响作用。其中，总蟾毒内酯、磷脂、胆固醇、 抗氧化剂三者的重量比为1 : 20 : 5 :0. 2,且磷脂为大豆磷脂，抗氧化剂为维生素 E，制备 过程中所用有机溶剂为乙醚，以上所制备的总蟾毒脂质体注射液质量评价较好；优选的制 备方法和工艺所制得的总蟾毒内酯脂质体注射液包封率为88. 99%，质量评价最好。因为， 总蟾毒内酯脂质体注射液的包封率越大，载药量越大，其药物的靶向性越好；单位投药量包 封率越大，其可作用于病灶的药量越大，效果越好。
[0026] 改变磷脂、抗氧化剂等的种类或用量，或者改变有机溶剂种类，所制备的蟾毒内酯 脂质体注射液的包封率显著降低。例如，在其他条件均一致的情况下，仅改变磷脂的种类， 磷脂分别为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂磷脂酰甘油，所制得的蟾毒内酯脂质体注射液的 质量评价存在明显差异，包封率为68. 98% -88. 99%。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领 域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节 和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
[0028] 实施例1总蟾毒内酯固体脂质体注射液的制备
[0029] 将总蟾毒内酯lg、大豆磷脂20g、胆固醇5g、维生素 E0. 2g溶于适量丙酮中并混合 均匀；用旋转蒸发仪将溶液中的有机溶剂减压除去，在玻璃壁上形成脂质薄膜；加入PH7.4 磷酸缓冲液，搅拌30min，在室温下放置2h，使薄膜吸胀；再在