一种奥拉西坦脂质微泡及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及奥拉西坦，具体涉及奥拉西坦脂质微泡及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 奥拉西坦是由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成的促智药，是由两种异 构体（S)-奥拉西坦（(s)-oxiracetam)和（R)-奥拉西坦（(R)-oxiracetam)组成的消旋 体。益智药奥拉西坦是一种合成的羟基氨基丁酸（GABOB)衍生物，它是一种能促进学习，增 强记忆力，保护受损神经细胞的中枢神经系统药物。
[0003] 专利CN102525899A公布了一种奥拉西坦注射液，CN1555794A公布了一种奥拉西 坦分散片，CN102579386A公布了一种奥拉西坦胶囊及薄膜衣片，CN101732251A公布了一种 奥拉西坦脂质体注射液；这些制剂均存在药物靶位作用时间不长，药物稳定性不够好，药物 降解速度较快等问题。
[0004] 寻找高效、低毒且具有良好生物相容性的药物载体是靶向给药的关键所在。靶向 给药系统发展的趋势是利用脂质体、微球等作为药物载体，其中脂质体由于可体内降解、无 毒、无免疫抑制作用等特点，作为药物载体越来越受到人们的重视。但是脂质体也存在很多 的局限性，如靶向性不明显，包封率较低，易渗透。尤其是到达靶位后释药缓慢，往往很难达 到有效治疗浓度。
[0005] 随着超声显影技术的发展，人们发现微泡能够显著改善超声图像的对比质量，由 此发展出中间含气的超声微泡作为超声造影剂。超声造影剂作为增强心肌、肝、脑等实质器 官的二维超声显像和血流多普勒效应，明显提高超声对于病变区形态的分辨能力。
[0006] 尽管微泡在造影剂方面的研究日趋成熟，但是将微泡作为一种新型的药物载体来 研究并不多见。尽管微泡在靶向给药及促进药物在靶部位的吸收具有独特的优势，但存在 很多目前无法克服的技术难题：如微泡作为药物载体，其载药量较低，造成输送到靶位的药 物浓度较低，对大多数药物来说不足以产生有效的药理作用等。目前载药微泡仅适用于少 量药效较强的药物，如重组人血管内皮抑制素，布舍瑞林、紫杉醇等。
【发明内容】
[0007] 针对现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供一种奥拉西坦脂质微泡。
[0008] 本发明的另一目的是提供一种奥拉西坦脂质微泡的制备方法。
[0009] 本发明的目的是这样实现的： 一种奥拉西坦脂质微泡，其特征在于：所述脂质微泡包括磷脂双分子层膜、气体和载奥 拉西坦的白蛋白纳米粒；所述气体和载奥拉西坦的白蛋白纳米粒均包裹在磷脂双分子层膜 内部。
[0010] 所述白蛋白为牛血清白蛋白。
[0011] 所述气体可以为氮气、全氟丙烷、全氟丁烷、六氟化硫中的一种或几种混合。
[0012] 发明人在研究中发现，制备的奥拉西坦脂质微泡，容易出现外壳较硬，弹性相对 差，在超声时空化作用效应弱，不能被低能量超声所击碎，倘若加大超声能量又会造成正常 组织损伤。
[0013] 上述磷脂优选天然磷脂。
[0014] 在满足脂质微泡容易被超声击破的情况下，发明人在研究中还发现，奥拉西坦脂 质微泡中气体的选择有很大的讲究，一旦控制不好就容易出现：微泡里的气体扩散很快，球 壁塌陷而迅速失去声反射性，并且不能随血液分布全身，从而一定程度上影响奥拉西坦的 治疗效果。
[0015] 上述气体以全氟丙烷为佳。
[0016] 在满足脂质微泡容易被超声击破的情况下，发明人还发现，若控制不好，制得的奥 拉西坦脂质微泡在体内的传输效率缓慢，药物起效时间相对较慢，从而一定程度上影响奥 拉西坦的用药。
[0017] 进一步，天然磷脂优选蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和磷脂酰乙醇胺中的一种或几种 混合。
[0018] 所述的白蛋白纳米粒包括表面有修饰叶酸、甘草次酸的载奥拉西坦白蛋白纳米 粒，或表面没有修饰的载奥拉西坦白蛋白纳米粒。
[0019] 上述奥拉西坦脂质微泡的制备方法，包括载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的制备 和包裹载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的制备。
[0020] 载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的制备： 分别配制白蛋白水溶液和奥拉西坦的乙醇溶液，然后将奥拉西坦乙醇溶液缓慢滴加到 白蛋白水溶液中，然后加入戊二醛，搅拌固化，旋转蒸发除去乙醇，即得载药白蛋白纳米粒 混悬液。
[0021] 包裹载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的制备： 将磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液混合，再加入步骤1中制得的白蛋白纳米粒混悬液并加 热，然后充入气体振荡，制得包裹载药白蛋白纳米粒的脂质微泡。
[0022] 上述奥拉西坦的用量为临床处方量。本发明使用的固化剂为戊二醛，其用量为本 领域人员根据实际情况确定。
[0023] 发明人在实际过程中发现，在采用上述制备方法制备脂质微泡过程中，若控制不 好，易使得制得的奥拉西坦脂质微泡易渗漏，稳定性差，保存时间短，从而严重影响奥拉西 坦脂质微泡的用药效果。
[0024] 优选地，上述白蛋白水溶液的浓度为0. 8%~5% ;戊二醛的浓度为0. 2%~0. 3% ;磷 月旨、甘油和磷酸盐缓冲液的比例为55~60:5~8:100。
[0025] 进一步，在保证制得的奥拉西坦脂质微泡不易渗漏，稳定性好的情况下，发明人在 研究中还发现，若控制不好，易出现制得的脂质微泡包封率低的技术问题。
[0026] 更优选地，上述戊二醛的浓度为0. 23%~0. 28% ;奥拉西坦的乙醇溶液加入到白蛋 白水溶液中的滴速控制在〇. 1~6 mL/min。
[0027] 上述百分比为重量百分比。磷脂、甘油与磷酸盐缓冲液的比例为质量比。
[0028] 在保证包封效率的基础上，发明人在研究中发现，震荡时间与加热时间控制不好 会带来制得的奥拉西坦脂质微泡的粒径不均匀，从而一定程度上影响脂质微泡透过体内膜 的比例及效率。
[0029] 最优选地，上述白蛋白水溶液的浓度为1%~3% ;戊二醛的浓度为0. 25% ;磷脂、甘 油和磷酸盐缓冲液的比例为55~60:5~8:100 ;奥拉西坦的乙醇溶液加入到白蛋白水溶 液中的滴速控制在〇. 5~3 mL/min，充入气体后震荡的时间为5-300 s ;加热时间为2~ 3h〇
[0030] 具体的说，一种奥拉西坦脂质微泡的制备方法，包括如下步骤： 1)载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的制备： 配制浓度为0. 8%~5%白蛋白水溶液和奥拉西坦的乙醇溶液，然后将奥拉西坦乙醇溶 液以0. 5~3 mL/min滴加到白蛋白水溶液中，然后加入浓度为0. 25%的戊二醛，搅拌固化， 旋转蒸发除去乙醇，即得载药白蛋白纳米粒混悬液。
[0031] 2)包裹载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的制备： 将磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液按55~60:5~8:100的比例混合制得磷脂混合液，再加 入适量步骤1中制得的载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液并加热2~3h，然后充入全氟丙烷 机械法振荡30s~50s，制得包裹载药白蛋白纳米粒的脂质微泡。
[0032] 上述载奥拉西坦白蛋白脂质微泡直径为4~7微米。
[0033] 磷脂混合液与载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的体积比优选4~5:1。
[0034] 本发明所得的微泡可静注用于临床，或者制成冻干粉针剂用于临床。
[0035] -种奥拉西坦脂质微泡冻干粉针剂的制备方法，包括如下步骤： 1)载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的制备： 分别配制浓度为0. 8%~5%白蛋白水溶液和奥拉西坦的乙醇溶液，然后将奥拉西坦乙 醇溶液以〇. 5~3 mL/min滴加到白蛋白水溶液中，然后加入浓度为0. 25%的戊二醛，搅拌 固化，旋转蒸发除去乙醇，即得载药白蛋白纳米粒混悬液。
[0036] 2)包裹载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的制备： 将磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液按55~60:5~8:100的比例混合，再加入步骤1中制得 的白蛋白纳米粒混悬液并加热2~3h，然后充入全氟丙烷机械法振荡30s~50s，制得包裹 载药白蛋白纳米粒的脂质微泡，所述憐脂混合液与载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的体积 比为5:1。
[0037] 3)、预冻：把分装好的奥拉西坦脂质微泡放入冻干箱内隔板上，在手动界面中，设 板层温度为OtMmin (开启电加热)，进箱完毕后，待制品达到1°C以下保持60min ;打开两 个压缩机，设板温-40°C、lmin，使制品在-35°C以下保持60min ;设板温-lit：、60min，待制 品达-lit：时，使制品在-lit：保持60min ;设板温-38°C、lmin，使制品在-35°C以下保持 60min〇
[0038] 4)、一次干燥(升华干燥） 对后箱制冷，待后箱温度达_40°C时，开启真空泵，2s后开小蝶阀，对后箱抽真空。
[0039] 待后箱真空彡90Pa时，开中隔阀，待前箱真空彡12pa时，设定导热油温度为 〇°C，有限量泄露为8±2pa，对制品加热180min，设定导热油温度为10°C，有限量泄露为 8±2pa，至制品完全抽白。整个升华过程中，前、后箱真空度应彡30Pa，制品温度彡-20°C， 冷凝器温度< -50°C。如出现异常情况应减慢加热速度、停止加热或降低板温。
[0040] 5 )、二次干燥(解析干燥） 设定板层温度为20°C，待制品温度越过-25~-20°C温度段后，打开有限量泄漏 20±5 (彡30Pa)，使制品温度迅速上升到20°C后，关闭有限量泄漏，恒温干燥5小时以上。
[0041] 整个过程中，冷阱温度应< -50°C。恒温阶段前、后箱真空为< 5Pa。
[0042] 本发明的有益效果： 本发明为载药超声微泡给药系统，进入体内后，体表采用超声辐射，使微泡定向爆破， 在体内靶部位释放药物；同时微泡的爆破可以造成"声孔效应"，增强局部微血管和细胞膜 通透性，促进药物渗透，从而实现药物的靶向给药。
[0043] 本发明选用的天然磷脂能清除自由基，延缓机体衰老；改善脂类代谢，防治静动脉 硬化，参与组成