一种Toll样受体4抑制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体涉及羟基红花黄色素 A作为Toll样受体4抑制剂的 医药用途。
【背景技术】
[0002] Toll样受体4(Toll like receptor 4，TLR4)，脑卒中是严重威胁人类健康的重要 疾病（Feigin VL,Stroke epidemiology in the developing world,Lancet,2005；365： 2160-2161；Park TH，Redelmeier DA，Li S，et al.Academic Year-end Changeover and Stroke Outcomes?J Stroke Cerebrovasc Dis?2014；S1052-3057；Jauch EC?Saver JL? Adams HP Jr，et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke：a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association . Stroke，2013;44:870-947; Marshall IJ，Wang Y，McKevitt C，et al. Trends in Risk Factor Prevalence and Management Before First Stroke：Data From the South London Stroke Register， Stroke，2013;44:1809-1816)，WH0发布的全球成人死亡率中占据第二位。其中，缺血性脑卒 中约占脑卒中的85 %，缺血、缺氧导致的神经损伤短期恢复血液灌注后，可加重中枢神经系 统的损伤，导致患者出现截瘫、意识不清，行动不便等多发危险，称为脑缺血再灌注损伤 (Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury，CIR)。脑缺血后再灌注可导致不可逆转的脑损 伤，其发病机制与固有免疫途径介导炎症反应密切相关（Inose Y，Kato Y，Kitagawa K，et al. Activated microglia in ischemic stroke penumbra upregulated MCP-1 and CCR-2 expression in response tolysophosphatidyIcholine derived from adjacent neuiOns and astrocytes ,Neuropathology，2015，35:209-223) D 固有免疫系统对损伤的响 应主要通过Toll样受体（Quiniou SM，Boudinot P，Bengt6n E，Comprehensive survey and genomic characterization of Toll-like receptors (TLRs) in channel catfish， Ictalurus punctatus：identification of novel fish TLRs，Immunogenetics，2013;65: 511-30)，目前已确定有13个TLR家族受体为响应受体(Kawai T，Akira S. TLR signaling. Cell Death Differ，2006;13:816-25)，其中Toll样受体4 (Toll like receptor 4，TLR4) 为研究最多的受体。TLR4是中枢神经小胶质细胞的主要响应受体(Johnson GB，Brunn GJ， Kodaira Y et al. Receptor-mediated monitoring of tissue well-being via detection of soluble heparan sulfate by Toll-like receptor 4.，J Immunol，2002; 168：5233-5239；Lehnardt S，Schott E，Trimbuch T，et al. A vicious cycle involving release of heat shock protein 60 from injured cells and activation of Tolllike receptor 4 mediates neurodegeneration in the CNS. J Neurosci，2008;28: 2320-233 I ； Kuang X ? Wang LF ? Yu L et a I·，LigustiIide ameliorates neuroinflammation and brain injury in focal cerebral ischemia/reperfusion rats：involvement of inhibition of TLR4/peroxiredoxin 6 signaling. Free Radic Biol Med，2014;71:165-715)，其能介导免疫相关的信号转导分子和信号转导途径。活化的 小胶质细胞中，TLR4表达升高，可促进炎症活化和神经毒性产生神经损伤。脑缺血再灌注损 伤后（Ramos-Cejudo J?Gutierrez-Fernandez M?0ter〇-0rtega L et al. Brain-derived neurotrophic factor administration mediated oligodendrocyte differentiation and myelin formation in subcortical ischemic stroke. Stroke 2015;46:221-28)， NF-κΒ可作为核转录因子参与控制免疫和炎症反应(Gao Y，Fang X，Tong Y et al. TLR4-mediated MyD88_dependent signaling pathway is activated by cerebral ischemia- reperfusion in cortex in mice，Biomed Pharmacother，2009;63:442-450)，MAPK蛋白如 ERKl/2、p38、JNK的蛋白及其磷酸化均报道为TLR4途径下介导的信号通路(Hu H，Li Z，Zhu X et al. GuaLou GuiZhi decoction inhibits LPS-induced microglial cell motility through the MAPK signaling pathway?Int J Mol Med?2013；32：1281-1286)? 核转录后炎症因子TNF-a，IL_10和N0(Barton GM，Medzhitov R. Toll-like receptor signaling pathways · Science，2003; 300:1524-1525)的释放均受到TLR4途径上的活化D 目前已有多种抑制剂，TAK-242,系Toll样受体4(TLR4)的人工合成拮抗剂(Matsunaga N， Tsuchimori N，Matsumoto T，et al.? TAK-242 (resatorvid)，a smal1-molecule inhibitor of Toll-like receptor (TLR) 4 signaling，binds selectively to TLR4 and interferes with interactions between TLR4 and its adaptor molecules，Mol Pharmacol，2011 ;79:34_41)，可通过抑制TLR4的Interleukin-1结合区域早前的研究已证 实，TAK-242可拮抗TLR4从而减弱脑出血引起的脑损伤(Wang YC，Wang PF，Fang H，et al. Toll-like receptor 4 antagonist attenuates intracerebral hemorrhage-induced brain injury. Stroke，2013;44:2545-2552)。综上，设计或寻找以TLR4为作用靶点的抗脑 缺血再灌注损伤和抗神经炎症损伤等药物的研究思路具有积极意义。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种Toll样受体4抑制剂。本发明公开了羟基红 花黄色素 A作为Toll样受体4抑制剂的用途，其可用于制备治疗或预防与Toll样受体4相关 的疾病的药物。
[0004] 本发明通过以下技术方案解决上述技术问题， 一种Toll样受体4抑制剂，其特征在于，为羟基红花黄色素 A。
[0005] 作为优化，所述羟基红花黄色素 A使用量为每千克体重使用l_4mg; 作为优化，所述羟基红花黄色素A使用量为每千克体重使用2mg。
[0006] 本发明利用系列亲和色谱法发现了羟基红花黄色素 A在小鼠脑缺血脑组织中的特 异性结合的蛋白（图2)。并通过质谱鉴定和蛋白免疫印迹技术鉴定该蛋白为TLR4。在此基础 上采用大脑中动脉栓塞模型middle cerebral artery occlusion，MCA0模型实验，考察了 羟基红花黄色素 A的抑制脑缺血再灌注作用。实验结果表明，羟基红花黄色素 A具有降低脑 梗死体积、改善神经行为学评分、抑制炎症信号通路的作用。
【附图说明】
[0007] 图1为本发明实施例系列亲和色谱原理示意图； 图2为本发明实施例羟基红花黄色素 A与TLR4的特异性结合蛋白条带电泳银染图； 图3为本发明实施例多普勒血流仪监测对脑缺血再灌注小鼠脑皮层血流量的影响图； A:假手术组;B:MCAO模型组；C:HSYA I mg/kg;D: HSYA 2 mg/kg;E: HSYA 4 mg/kg;F: NIMO 2 mg/kg。