本发明属于药物化学领域，涉及C20位差向异构化盐霉素及其酰化衍生物以及制备方法和抗肿瘤用途，尤其是用于治疗肝癌，结肠癌和肺癌的用途。
背景技术：
肿瘤干细胞(cancer stem cell，CSC)是近年来发现的一个新的潜在治疗肿瘤的靶点，它们是存在于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞性质的细胞群体，具有自我更新的能力，可以形成不同分化程度的肿瘤细胞。现有的治疗肿瘤的方法如化学治疗和放射性治疗多是针对一般肿瘤细胞，而非肿瘤干细胞，这就导致治疗不彻底，仍会造成肿瘤的耐药、复发和转移。
盐霉素(salinomycin)是从白色链霉菌中分离得到的一种多聚醚类离子载体型抗生素，一直以来，盐霉素钠作为生长促进剂和抗球虫剂用于家禽。2009年的研究发现，盐霉素在体外能高选择性乳腺癌干细胞，在小鼠体内可以明显抑制乳腺癌的生长，其效力比临床上使用的抗肿瘤药物紫杉醇高100倍(Mertins，S.D.Cancer stem cells：a systems biology view of their role in prognosis and therapy.Anti-Cancer Drugs：2014，25(4)，353-367.)。盐霉素还对其它肿瘤组织中的干细胞有很好的活性，如急性骨髓性白血病干细胞、肺癌干细胞、胃癌干细胞、骨肉瘤干细胞、大肠癌干细胞、鳞状细胞癌干细胞、胰腺癌干细胞和前列腺癌干细胞等。
除此之外，盐霉素还对分化的肿瘤细胞如白血病、乳腺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、食道癌、神经胶质瘤、肝癌、膀胱癌、前列腺癌和肺癌肿瘤细胞等具有很好的抑制作用，还对多药耐药，放疗耐受以及细胞凋亡耐受的癌细胞具有很好的抑制活性，如慢性淋巴细胞白血病和人类转移性乳腺癌(Huczynski，A.Salinomycin-A New Cancer Drug Candidate.Chem.Biol.Drug Des.，2012，79，235.)。
文献报道盐霉素具有抑制P-糖蛋白gp170、干扰Wnt信号级联、增加DNA损伤和降低p21蛋白水平、克服ABC转运蛋白介导的多药耐药和凋亡耐受，增加氧化应激以及提高活性氧水平等作用。其中盐霉素通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路从而诱导肿瘤干细胞凋亡被认为是其发挥抗肿瘤活性的主要机理之一。
Wnt/β-Catenin通路在维持癌症干细胞特性有重要作用，尤其Wnt/β-Catenin激活可使癌症干细胞获得放疗及化疗抗性。Lu等发现盐霉素可以抑制白血病细胞Wnt/β-Catenin信号通路并阐明了机制：盐霉素作用于Wnt/Fzd/LPR复合体，LPR(低密度脂蛋白受体相关蛋白)复合体活性被抑制，从而导致下游Wnt靶标基因LEF1、Cyclin D1和Fibronectin表达下调，最终结果是癌细胞凋亡(Lu D，Choi MY，Yu J，Castro JE，Kipps TJ，Carson DA.Salinomycin inhibits Wnt signaling and selectively induces apoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells.Proc Natl Acad Sci U S A.2011；108(32)：13253-7.)。
随后，Tang等又发现骨母细胞瘤细胞U2OS、MG63及SAOS2中，盐霉素可降低GSK3β磷酸化水平激活期活性，加速降解β-Catenin，从而使核内β-Catenin减少，抑制癌关联基因Cyclin D1表达。King等也发现盐霉素通过抑制LPR，进而抑制Wnt/β-Catenin通路，从而诱导三阴性乳腺癌肿瘤细胞凋亡19。Zhu等发现盐霉素可诱导鼻咽癌NPC细胞CNE-1、CNE-2及CNE-2/DDP内Wnt受体LRP蛋白水平，并促进β-Catenin降解。Mao等发现激活wnt 1信号通路可以明显加快胃癌肿瘤干细胞的增殖，而盐霉素在抑制wnt 1信号通路中发挥了关键作用，继而诱导胃癌肿瘤干细胞的调亡。Lu等最近发现盐霉素在前列腺肿瘤干细胞中通过抑制LRP6的表达，不仅能抑制相关Wnt/β-catenin信号通路，还可以抑制mTORC1信号通路。以上研究结果说明LRP蛋白和Wnt/β-catenin通路是潜在的重要抗肿瘤药物靶点。
这些研究结果表明，盐霉素具有研发为一种新型的抗癌药物的潜能。到目前为止，已经开展盐霉素治疗三阴性乳腺癌、小儿高级别胶质瘤干细胞的临床前试验。
然而，盐霉素药代动力学性质欠佳，水溶性很差，酸性条件下不稳定，生物利用率低，并且对哺乳动物和人毒性较大，这给其临床使用带来了一定的困难。而对盐霉素进行构效关系研究以及结构优化，就可能得到活性更好、毒性更低以及药代动力学性质更好的先导化合物。
目前，针对于肿瘤干细胞靶点的盐霉素药物化学研究才刚刚开始，已报道的研究主要在C1以及羟基的修饰上，Adam Huczynski小组合成了C1位酯化或者酰胺化取代的衍生物，体外抗肿瘤活性并未有显著提高(Antoszczak，M.；Popiel，K.；J.；Wietrzyk，J.；Maj，E.；Janczak，J.；Michalska，G.；Brzezinski，B.，A.Synthesis，cytotoxicity and antibacterial activity of new esters of polyether antibiotic e salinomycin，Eur.J.Med.Chem.2014，76，435-444)；Daniel Strand小组合成了羟基酰化衍生物，其中发现了一些在体外比盐霉素活性更好的化合物，活性提高了5倍(Borgstrom，B.；Huang，X.L.；Posta，M.；Hegardt，C.；Oredssonb S.and Strand.D.Synthetic modification of salinomycin：selective O-acylation and biological evaluation.Chem.Commun.，2013，49，9944.)。但总的来说，修饰策略比较简单，合成的衍生物不多，活性测试研究并不深入，构效关系还不清楚。
技术实现要素：
：
本发明解决的技术问题是提供一类C20位差向异构化盐霉素及其衍生物及其药学上可接受的盐、其制备方法、药物组合物以及其在预防或/和治疗肿瘤方面的应用。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供了通式I所示的C20位差向异构化盐霉素及其酰化衍生物及其药学上可接受的盐，具体结构如下：
其中，X选自H、Li、Na、K、Ca、Mg、Zn；
R1、R2和R3分别独立地选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C1-C14烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C1-C14烷基酰基、取代或未取代的饱和或不饱和C3-C8环烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C3-C8环烷基酰基、取代或未取代的C6-C12芳基甲酰基、取代或未取代的C5-C12杂环基甲酰基，所述取代基独立选自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、卤代C1-C3烷基、卤素、羟基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12杂环基，所述杂原子选自N、O、S。
其中优选的化合物，R1、R3独立的选自H，R2选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C1-C6烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C1-C6烷基酰基、取代或未取代的饱和或不饱和C3-C6环烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C3-C6环烷基酰基、取代或未取代的C6-C12芳基甲酰基、取代或未取代的C5-C12杂环基甲酰基，所述取代基独立选自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、卤代C1-C3烷基、卤素、羟基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12杂环基，所述杂原子选自N、O、S。
其中更优选的化合物，R1、R3独立的选自H，R2选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C1-C4烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C1-C4烷基酰基、取代或未取代的苯甲酰基、取代或未取代的C5-C12杂环基甲酰基，所述取代基独立选自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、卤代C1-C3烷基、卤素、羟基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12杂环基，所述杂原子选自N、O、S。
以上所述的杂环基选自呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡咯、四氢噻唑、吡啶、哌啶、吲哚。
最优选的化合物如下：
本发明技术方案的第二方面提供了制备本发明第一方面所述化合物的方法，其包括以下步骤：
其中，X选自H、Li、Na、K、Ca、Mg、Zn；
R1、R2和R3分别独立地选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C1-C14烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C1-C14烷基酰基、取代或未取代的饱和或不饱和C3-C8环烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C3-C8环烷基酰基、取代或未取代的C6-C12芳基甲酰基、取代或未取代的C5-C12杂环基甲酰基，所述取代基独立选自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、卤代C1-C3烷基、卤素、羟基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12杂环基，所述杂原子选自N、O、S。
其中优选的化合物，R1、R3独立的选自H，R2选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C1-C6烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C1-C6烷基酰基、取代或未取代的饱和或不饱和C3-C6环烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C3-C6环烷基酰基、取代或未取代的C6-C12芳基甲酰基、取代或未取代的C5-C12杂环基甲酰基，所述取代基独立选自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、卤代C1-C3烷基、卤素、羟基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12杂环基，所述杂原子选自N、O、S。
其中更优选的化合物，R1、R3独立的选自H，R2选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C1-C4烷基酰基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C1-C4烷基酰基、取代或未取代的苯甲酰基、取代或未取代的C5-C12杂环基甲酰基，所述取代基独立选自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、卤代C1-C3烷基、卤素、羟基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12杂环基，所述杂原子选自N、O、S。
以上所述的杂环基选自呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡咯、四氢噻唑、吡啶、哌啶、吲哚。
步骤一：化合物a与三甲基硅基乙醇反应得到化合物b；
步骤二：化合物b通过Mitsunobu反应得到化合物c，其中所用试剂分别为偶氮二甲酸二乙酯、偶氮二甲酸二异丙酯、偶氮二甲酸二叔丁酯和偶氮二甲酸二苄酯中的一种以及三苯基膦、三甲基膦、三丁基膦和三己基膦中的一种以及对硝基苯甲酸、卤代苯甲酸、甲氧基取代苯甲酸中的一种；所用溶剂分别为四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亚砜、甲醇和乙醇等醇类溶剂等。反应温度-80℃-200℃；
步骤三：化合物c在碱的作用下脱去苯甲酰基，其中所用碱为碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸锂、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、甲醇钠、乙醇钠、水合肼、DBU等，所用溶剂分别为四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亚砜、甲醇和乙醇等醇类溶剂等；
步骤四：化合物与酸酐或者酰氯反应，得到中间体d，其中所用酸酐为乙酸酐、丙酸酐、丁酸酐、苯甲酸酐、取代苯甲酸酐或者乙酰氯、丙酰氯、丁酰氯、苯甲酰氯或者取代苯甲酰氯等，所用溶剂分别为四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亚砜、甲醇和乙醇等醇类溶剂等；
步骤五：化合物e在氟化试剂的作用下脱去酯基，其中氟化试剂包括氟化钾、四丁基氟化铵、氟化银等，所用溶剂分别为四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亚砜、甲醇和乙醇等醇类溶剂等；
步骤六：步骤五得到的产物再用碱处理，得到终产物，碱分别为碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸锂、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、甲醇钠、乙醇钠等。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物组合物，其包含治疗和/或预防有效量的本发明第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。
该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助溶剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助溶剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助溶剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助溶剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调节剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-5mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
本发明技术方案的第四方面是提供第一方面所述化合物以及第三方面所述药物组合物在制备预防或/治疗肿瘤药物中的应用。
其中所述的肿瘤包括但不限于：结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、前列腺癌、膀胱癌、上皮癌、食管癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、基底细胞癌、腺癌、支气管癌、肝瘤、胆管癌、绒膜癌、胚胎癌、白血病、黑色素瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非-霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤或原发性脑瘤。优选的，所述肿瘤选自胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌或肝癌。更优选的，所述肿瘤选自肝癌、胃癌或结肠癌。特别优选的，所述肿瘤选自肝癌。
有益技术效果
本研究内容提供了一类结构新颖、药理活性较强的盐霉素衍生物，可用于癌症及其相关病症的预防和治疗。本发明中所有化合物涉及到盐霉素立体构型的改变，均具有新颖的化学结构，且本发明中大部分盐霉素衍生物具有很强的抗肿瘤活性，比盐霉素提高了10倍以上，最好的可以达到50倍，可能进一步研发成为新型靶向肿瘤干细胞抗肿瘤药物。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。
对于以下全部实施例，可以使用本领域技术人员已知的标准操作和纯化方法。除非另有说明，所有温度以℃(摄氏度)表示。化合物的结构是通过核磁共振氢谱(1H NMR)和质谱(MS)来确定的。核磁共振氢谱位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。核磁共振氢谱用Mercury-400型核磁共振仪测定，氘代氯仿(CDCl3)作溶剂，四甲基硅烷(TMS)为内标。
制备例
制备例1盐霉素三甲基硅基乙基酯(中间体1)的制备
将2.4g(3.2mmol)盐霉素溶于20ml二氯甲烷中，加入3ml(20.8mmol)三甲基硅基乙醇、1.8ml(10.1mmol)二异丙基乙胺(DIPEA)和1.0g(3.67mmol)N，N，N′，N′-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(TCFH)，室温下搅拌24h。分别用0.1M HCl水溶液10ml，饱和碳酸氢钠水溶液10ml和水10ml洗，合并有机相，干燥，浓缩，通过柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得到目标产物1.36g，为无色油状物，收率50％，回收未反应的盐霉素。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.06(d，J＝10.8Hz，1H)，5.97(d，J＝10.8Hz，1H)，4.41(dtd，J＝35.3，11.2，5.9Hz，2H)，4.09-3.94(m，3H)，3.93-3.77(m，2H)，3.68(dd，J＝10.4，7.2Hz，2H)，3.55(dd，J＝10.4，2.2Hz，1H)，3.17(td，J＝14.7，7.3Hz，1H)，3.08-2.91(m，2H)，2.70(d，J＝9.9Hz，1H)，2.38(dd，J＝21.9，9.4Hz，2H)，2.27-2.14(m，1H)，2.12-0.53(m，55H)，0.07(s，9H).
制备例2 20-epi-20-O-对硝基苯甲酰基盐霉素三甲基硅基乙酯(中间体2)
将1.0g盐霉素三甲基硅基乙酯溶于30ml四氢呋喃中，搅拌中加入3.0g三苯基膦和0.5g对硝基苯甲酸，然后将2ml偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)缓慢滴入，室温下搅拌5h，TLC检测原料反应完。蒸干溶剂，通过柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1)，得到目标产物0.93g，为无色油状物，收率80％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(d，J＝8.2Hz，2H)，8.16(d，J＝8.2Hz，2H)，6.51(d，J＝10.6Hz，1H)，6.33(dd，J＝10.6，5.3Hz，1H)，5.22(d，J＝5.3Hz，1H)，4.55-4.32(m，1H)，4.12-3.99(m，1H)，3.76(d，J＝6.5Hz，1H)，3.69(d，J＝9.6Hz，1H)，3.59(d，J＝10.3Hz，1H)，3.49(d，J＝7.5Hz，1H)，3.24(dd，J＝15.1，7.7Hz，1H)，3.01(dd，J＝22.0，11.0Hz，1H)，2.75(d，J＝9.5Hz，1H)，2.54(s，1H)，2.13(dd，J＝16.0，9.0Hz，2H)，1.89(ddd，J＝64.8，25.5，13.4Hz，4H)，1.68-0.64(m，56H)，0.08(s，9H).
制备例3 20-epi-盐霉素三甲基硅基乙酯的制备(中间体3)
将1.0g 20-epi-O-对硝基苯甲酰基盐霉素三甲基硅基乙酯溶于20ml甲醇中，加入210mg碳酸钾，室温搅拌30分钟，TLC检测原料反应完。蒸干溶剂，加入100ml二氯甲烷溶解残留物，有机相再用20ml 0.1M NaOH水溶液、20ml水洗，干燥，蒸干溶剂得到C20-epi-盐霉素三甲基硅基乙酯粗品，经过柱层析纯化得到0.6g。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.06(d，J＝10.8Hz，1H)，5.97(d，J＝10.8Hz，1H)，4.41(dtd，J＝35.3，11.2，5.9Hz，2H)，4.09-3.94(m，3H)，3.93-3.77(m，2H)，3.68(dd，J＝10.4，7.2Hz，2H)，3.55(dd，J＝10.4，2.2Hz，1H)，3.17(td，J＝14.7，7.3Hz，1H)，3.08-2.91(m，2H)，2.70(d，J＝9.9Hz，1H)，2.38(dd，J＝21.9，9.4Hz，2H)，2.27-2.14(m，1H)，2.12-0.53(m，55H)，0.07(s，9H).
实施例1 20-epi-盐霉素钠的制备(1)
将50mg中间体3溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体30mg，收率62％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.31(dt，J＝21.7，7.7Hz，1H)，4.35(d，J＝4.5Hz，1H)，4.26(d，J＝10.1Hz，1H)，4.03(d，J＝2.4Hz，1H)，3.96(dd，J＝10.2，3.2Hz，1H)，3.84-3.69(m，3H)，3.58(d，J＝10.1Hz，1H)，3.43(d，J＝11.6Hz，1H)，2.86(dd，J＝10.5，8.4Hz，1H)，2.77-2.60(m，2H)，2.33-0.55(m，60H).
实施例2 20-epi-20-O-乙酰基盐霉素钠的制备(2)
将50mg中间体3溶于2ml吡啶中，加入100μL乙酸酐和5mg DMAP，室温下搅拌24时，TLC检测原料反应完，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂得到粗品，经过柱层析纯化，将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体30mg，收率62％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.09-8.06(m，2H)，7.56(dd，J＝10.6，4.2Hz，1H)，7.44(t，J＝7.7Hz，2H)，6.09(dd，J＝9.9，6.0Hz，1H)，5.83(d，J＝9.9Hz，1H)，5.34(d，J＝6.0Hz，1H)，4.64-4.39(m，1H)，3.85(dd，J＝10.6，1.8Hz，1H)，3.74(dt，J＝16.7，8.2Hz，2H)，3.39(d，J＝10.7Hz，1H)，3.19-2.97(m，2H)，2.73(ddd，J＝9.3，4.1，1.9Hz，1H)，2.68-2.61(m，1H)，2.20-2.10(m，1H)，2.34-0.56(m，65H).
实施例3 20-epi-20-O-丙酰基盐霉素钠的制备(3)
将50mg中间体3溶于2ml吡啶中，加入100μL丙酸酐和5mg DMAP，室温下搅拌24时，TLC检测原料反应完全，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂得到粗品，经过柱层析纯化，将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体46mg，收率94.5％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.39(d，J＝10.7Hz，1H)，6.31(dd，J＝10.6，5.6Hz，1H)，5.07(d，J＝5.6Hz，1H)，4.38(d，J＝6.5Hz，1H)，4.23(d，J＝10.3Hz，1H)，3.93(dd，J＝11.0，4.3Hz，1H)，3.72(d，J＝9.9Hz，1H)，3.60(d，J＝9.9Hz，1H)，3.39(d，J＝11.4Hz，1H)，2.87(td，J＝10.9，3.1Hz，1H)，2.75-2.60(m，2H)，2.34-2.24(m，2H)，2.15-0.58(m，65H).
实施例4 20-epi-20-O-异丁酰基盐霉素钠的制备(4)
将50mg中间体3溶于2ml吡啶中，加入100μL丙酸酐和120ul三乙胺，室温下搅拌24时，TLC检测原料反应完，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂得到粗品，经过柱层析纯化，将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体25mg，收率50％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.41(d，J＝10.7Hz，1H)，6.31(dd，J＝10.6，5.7Hz，1H)，5.07(d，J＝5.7Hz，1H)，4.40(q，J＝6.6Hz，1H)，4.25(d，J＝10.2Hz，1H)，3.94(dd，J＝11.0，4.5Hz，1H)，3.74(dd，J＝10.0，1.5Hz，1H)，3.62(d，J＝10.1Hz，1H)，3.40(dd，J＝11.8，1.6Hz，1H)，2.88(td，J＝10.9，3.1Hz，1H)，2.70(ddd，J＝17.6，10.6，4.8Hz，2H)，2.50(dt，J＝14.0，7.0Hz，1H)，2.15-0.63(m，69H).
实施例5 20-epi-20-O-苯甲酰基盐霉素钠的制备(5)
将50mg中间体3溶于2ml吡啶中，加入100mg苯甲酸酐和5mg DMAP，室温下搅拌24时，TLC检测原料反应完，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解残留物，再分别用0.1M NaOH水溶液、水洗，将有机相干燥浓缩得到粗品，经过柱层析纯化，将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1MNa2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体30mg，收率58％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(d，J＝7.5Hz，1H)，7.52(t，J＝7.1Hz，1H)，7.39(t，J＝7.5Hz，1H)，6.40(q，J＝10.8Hz，1H)，5.27(d，J＝4.8Hz，1H)，4.38(d，J＝6.5Hz，1H)，4.22(d，J＝10.3Hz，1H)，4.11(dd，J＝14.3，7.1Hz，1H)，3.91(d，J＝8.3Hz，1H)，3.72(d，J＝9.9Hz，1H)，3.61(d，J＝9.8Hz，1H)，3.37(d，J＝11.6Hz，1H)，2.85(t，J＝10.5Hz，1H)，2.76-2.59(m，2H)，2.33-0.41(m，62H).
实施例6 20-epi-20-O-对氟苯甲酰基盐霉素钠的制备(6)
将50mg中间体3溶于2ml二氯甲烷中，加入100μL对氟苯甲酰氯、150μL三乙胺和5mg DMAP，50℃搅拌12时，TLC检测原料反应完，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解残留物，再分别用0.1M NaOH水溶液、水洗，将有机相干燥浓缩得到粗品，经过柱层析纯化，将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体40mg，收率76％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05-7.85(m，2H)，7.05(t，J＝8.5Hz，2H)，6.38(dt，J＝10.6，8.3Hz，2H)，5.26(d，J＝5.3Hz，1H)，4.42-4.32(m，1H)，4.22(d，J＝10.3Hz，1H)，3.90(dd，J＝10.6，2.4Hz，1H)，3.70(d，J＝10.0Hz，1H)，3.60(d，J＝9.7Hz，0H)，3.37(d，J＝11.6Hz，1H)，2.85(dd，J＝10.5，9.3Hz，1H)，2.75-2.53(m，2H)，2.28-0.43(m，62H).
实施例7 20-epi-20-O-对硝基苯甲酰基盐霉素钠的制备(7)
将25mg中间体2溶于DMF中，再加入25mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体10mg，收率40％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.31(d，J＝8.6Hz，2H)，8.18(d，J＝8.7Hz，2H)，6.50(d，J＝10.5Hz，1H)，6.35(dd，J＝10.4，5.7Hz，1H)，5.31(d，J＝5.7Hz，1H)，4.22-4.16(m，1H)，4.06-3.92(m，2H)，3.86(dd，J＝12.4，5.6Hz，1H)，3.78-3.62(m，3H)，2.99-2.88(m，1H)，2.80(dd，J＝9.3，7.6Hz，1H)，2.67(d，J＝10.1Hz，1H)，2.39-0.44(m，62H).
实施例8 20-epi-20-O-对三氟甲基苯甲酰基盐霉素钠的制备(8)
将50mg中间体3溶于2ml二氯甲烷中，加入100μL对三氟甲基苯甲酰氯、150μL三乙胺和5mg DMAP，50℃搅拌12时，TLC检测原料反应完，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解残留物，再分别用0.1M NaOH水溶液、水洗，将有机相干燥浓缩得到粗品，经过柱层析纯化。将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体40mg，收率72％。
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.07(d，J＝8.1Hz，2H)，7.67(d，J＝8.2Hz，3H)，6.54-6.29(m，2H)，5.37(d，J＝5.4Hz，1H)，4.37(d，J＝7.1Hz，1H)，4.22(d，J＝10.4Hz，1H)，3.91(dd，J＝11.2，4.5Hz，1H)，3.65(dd，J＝39.6，10.1Hz，2H)，3.39(d，J＝11.8Hz，1H)，2.86(dt，J＝11.1，5.4Hz，1H)，2.78-2.56(m，2H)，2.31-0.58(m，69H).
实施例9 20-epi-20-O-呋喃-2-甲酰基盐霉素钠的制备(9)
将50mg中间体3溶于2ml二氯甲烷中，加入100μL呋喃-2-甲酰氯、150μL三乙胺和5mg DMAP，50℃搅拌12时，TLC检测原料反应完，加入甲醇淬灭反应。蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解残留物，再分别用0.1M NaOH水溶液、水洗，将有机相干燥浓缩得到粗品。将其溶于DMF中，再加入50mg氟化钾，80℃反应过夜，TLC检测原料反应完全。减压蒸干溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗两次，将有机相干燥，蒸干得到钠盐，抽干成无色泡沫状固体40mg，收率78.5％。
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ7.59(d，J＝1.6Hz，1H)，7.09(d，J＝3.4Hz，1H)，6.53-6.45(m，2H)，6.40(t，J＝5.9Hz，1H)，5.33(d，J＝5.6Hz，1H)，4.40(d，J＝7.4Hz，1H)，4.25(d，J＝10.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝11.5，4.5Hz，1H)，3.77-3.69(m，1H)，3.63(d，J＝11.1Hz，2H)，3.42(d，J＝11.8Hz，1H)，2.90(td，J＝11.0，3.3Hz，1H)，2.71(q，J＝10.4，9.4Hz，2H)，2.26-0.63(m，67H).
试验例部分
试验例1 20位差向异构化盐霉素以及酰化产物的体外抗肿瘤活性试验
实验方法
(1)选用对数生长期的贴壁A549、Bel7402、HCT-8四种肿瘤细胞，分别用胰酶消化后，用10％小牛血清的RPMI1640培养液配成15000个/ml的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔接种190ul，37℃，5％CO2培养24h。
(2)实验组加样品10ul，每孔终体积位200ul，用1640培养液补足。37℃，5％CO2培养3d。
(3)弃上清液，每孔加入100ul新鲜配制的0.5mg/mlMTT的无血清培养液，37℃继续培养4h。小心弃上清，并加入150ul DMSO溶解MTT formazon沉淀，用微型超声振荡器混匀，在酶标仪上测定波长570nm处的光密度值。
(4)计算肿瘤细胞生长抑制率。
结果：测试化合物体外抗肿瘤活性IC50(μM)*
结果表明，20位差向异构化盐霉素以及酰化产物在体外具有显著的抗肿瘤活性。其中，化合物3、4和6的药理活性比母体化合物盐霉素增强了10倍以上，其中化合物4药理活性最好，对肝癌Bel7402肿瘤细胞的抑制作用比盐霉素提高了50倍以上。