一种酶标记抗原抗体的制备方法与流程

文档序号:12162187阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:首先利用过碘酸钠的氧化性将辣根过氧化物酶分子中邻羟基氧化为醛基,透析除去小分子物质后,在酶溶液中加入冻干保护剂进行冷冻干燥处理,待用;

在进行抗原、抗体标记时,首先对抗原、抗体碱化处理,将其伯氨基暴露后,再加入上述冷冻干燥处理的醛基化后的辣根过氧化物酶分子进行交联反应,反应时间1~2h,反应结束后加入防冻保护剂,-20℃低温条件下长期保存。

2.根据权利要求1所述的酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:所述过碘酸钠氧化辣根过氧化物酶时,过碘酸钠与辣根过氧化物酶之间的摩尔比为20:1,反应时间为30min ;终止反应后按照每毫克辣根过氧化物酶加入20ul终止液,终止反应时间15 ~30 min。

3.根据权利要求2所述的酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:所述终止液为乙二醇。

4.根据权利要求1所述的酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:透析除去小分子物质所用的透析液为酸性醋酸盐缓冲液;所述酶溶液中加入的冻干保护剂为10%海藻糖。

5.根据权利要求1所述的酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:所述抗原、抗体为表面含有氨基的蛋白质分子,碱化处理是将待标记样本在pH 9.6 0.01~0.02 M 碳酸盐缓冲液透析过夜或加入pH 9.6 0.5M 碳酸盐启动剂,其中启动剂的加入量为待标记样本体积的1/5。

6.根据权利要求1所述的酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:进行交联反应时,反应温度为室温;交联反应结束后加入还原剂,将不稳定的西佛碱还原为稳定的碳氮双键,其中所用还原剂为浓度4mg/ml的硼氢化钠,加入量按1mg辣根过氧化物酶加25ul硼氢化钠计。

7.根据权利要求1所述的酶标记抗原抗体的制备方法,其特征在于:交联反应结束后加入的防冻保护剂为与酶结合物等体积的丙三醇。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1