一种全人源抗HCV的中和抗体‑TRN1001的制作方法

本发明属于细胞免疫学、分子生物学领域，涉及一种全人源的单克隆抗体，尤其涉及一种全人源抗HCV的单克隆中和抗体。另外，本发明还涉及该中和抗体的制备方法和用途。
背景技术：
：丙型肝炎病毒((HepatitisCvirus，HCV)是已知除逆转录病毒外惟一能造成慢性感染的RNA病毒。HCV的传染源主要为急性临床型和无症状的亚临床病人，慢性病人和病毒携带者。通常病人发病前12天其血液即具有感染性，并可带毒12年以上。据估计，目前全球超过2亿HCV感染者且每年以350万人的速度增长，其中慢性携带者占60％～80％；并且HCV具有泛嗜性可导致反复感染，从而使80％的急性感染转为慢性，最终发展为肝硬化/肝癌的机率则高达3.5％～20％。控制HCV复制和免疫清除的关键因素是产生广谱中和抗体，但是HCV存在高度变异，可逃逸机体的免疫监视并通过多种途径抑制体液和细胞免疫。研究发现，针对与受体作用的HCV表位产生的抗体具有较好的中和活性。近年来，有关HCV感染模型如细胞株和小动物模型的建立，使得对HCV的深入研究得到迅速发展，抗体介导的病毒中和作用有望成为新的有效的抗HCV治疗方法。利用HCVpp不同基因型的HCV假病毒感染Huh-7细胞，可用于中和抗体活性的研究。Kato等在非肝源性的HeLa和293细胞中实现了HCV亚基因组复制子的表达。Hideki等在人细胞系CHO和Huh-7中构建了以HCVE1和E2蛋白代替VSV膜蛋白的HCVrv，能够感染Huh-7并被CD81-E2特异的抗体中和。Daniel等进行了针对E2表位的单克隆抗体研究，发现从HCV携带者血清中获得E2的不同基因型的单克隆抗体mAbs1:7和A8对HCVpp和HCVcc感染模型表现出广泛的中和作用。根据核酸序列的变异，目前HCV分为7个基因型和数十个基因亚型。HCV基因组长约9.6kb，含单一的开放读框。病毒由包膜蛋白E1、E2，核心蛋白Core，P7蛋白，及非结构蛋白NS3、NS4a、NS4b、NS5a、NS5b组成。E1、E2的N端27个氨基酸残基构成的高变区1(HVR1)被公认为是中和表位，但其序列在不同基因型及准种间存在较大差异。国内一些学者研究发现选取包含不同基因型和准种的代表序列组合表达的重组抗原蛋白具有高交叉反应活性。国外对中和抗体表位的研究也很活跃：E1/E2免疫可产生较高的中和抗体，中和抗体虽然不能保护异株HCV攻击，但可防止异株病毒攻击后的慢性化；重组E1/E2膜糖蛋白有较好的交叉中和活性。上述有关中和抗体的研究，为进一步针对HCV的治疗性疫苗研究提供了思路。研究表明，采用HCV中和抗体能够控制HCV感染的慢性化和再次感染。另有研究表明，HCV中和抗体具有诊断和治疗的作用。因此，基于抗HCV中和抗体的研究，寻找一种有效方法可在病毒感染期激发机体的免疫反应，产生强烈而广泛的中和HCV的抗体，具有重要的意义。技术实现要素：本发明的目的是提供一种结合HCV表面包膜蛋白E2的全人源抗HCV的单克隆中和抗体，该抗体可以用于防治丙肝、并且还可以用于鉴定HCV。为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3以及轻链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3；重链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4所示，或者分别与SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4所示的序列至少具有80％同源性；轻链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示，或者分别与SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示的序列至少具有80％同源性。优选地，重链CDR1具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；轻链CDR1具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；轻链CDR2具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；轻链CDR3具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。将具有上述优选序列的抗体命名为TRN1001。进一步，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。优选地，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。包括优选抗体氨基酸序列的保守序列变体的抗体也包括在本发明的范围之内。保守氨基酸序列变体包括不显著改变本发明的全人源抗HCV的单克隆中和抗体结合性质和中和性质的氨基酸序列的修饰，如源于本领域熟知的相似氨基酸替代的变体，氨基酸的缺失、增加导致的变体。本发明的抗体还包括人源与非人源抗体，以及具有与TRN1001抗体相同功能或改造及优化的一切抗体。进一步，所述抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链Fv。本发明还提供了一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。本发明的编码前面所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子包括具有上述核苷酸序列的保守核苷酸序列变体的核酸分子。所谓的保守核苷酸序列变体源于遗传密码简并和沉默的变体，核苷酸的替代、缺失和增加也包含在内。本发明还提供了一种前面所述的核酸分子的DNA片段。所述DNA片段可以编码抗体重链或轻链可变区的任何区域，包括重链CDR1、CDR2、或CDR3，或轻链CDR1、CDR2、或CDR3。本发明还提供了一种包括前面所述的核酸分子的表达载体，除了前面所述的核酸分子之外，表达载体还包括与所述核酸分子序列操作性相连的表达调控序列。表达载体是指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。载体的种类包括本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。在表达载体中，除了含有复制起点外，还可含有标记基因和其他翻译控制元件。在本发明的具体实施方案中，所述载体是pCDNA3.3。本发明还提供了一种含有前面所述的核酸分子或前面所述的表达载体的宿主细胞。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞：真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO,COS,293细胞、或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。在本发明的具体实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞，更优选CHO细胞。用重组DNA转化、转染宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的本发明的抗体或其抗原结合片段。所述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述载体包括但不限于已经被美国食品与药品管理局认可的而可用于人类或动物的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、稀释剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗压剂、溶剂或乳化剂等对组成药物组合物无副作用的各种形式的载体。本发明还提供了一种包括本发明的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段的HCV检测产品。所述检测产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。凡是包括前面所述结合分子的能够检测出HCV的检测产品均包括在本发明的范围之内。本发明还提供了一种非诊断目的的检测HCV水平的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)提取含有HCV的样品；(2)将步骤(1)获取的样品与前面所述的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段的接触；(3)检测样品与抗体或其抗原结合片段的免疫反应。本发明还提供了一种前面所述的全人源抗HCV的单克隆中和抗体的制备方法，所述制备方法采用的是单个B淋巴细胞抗体制备技术。所述单个B淋巴细胞抗体制备技术是将单细胞分离鉴定技术结合多种PCR技术形成的一种单克隆抗体的体外表达系统，即从人B淋巴细胞中直接获取全人源的单克隆抗体的方法。进一步，所述方法包括如下步骤：(1)检测发现HCV感染患者；(2)分离HCV感染患者静脉血中的单个核细胞，之后利用流式细胞术进行细胞分选，分选出含有CD235a-/IgD-/CD20+的B细胞；(3)利用单细胞RT-PCR扩增步骤(2)获得的单个B细胞中的抗体轻链和重链可变区的核苷酸片段；(4)将步骤(3)获得的抗体轻链和重链可变区的核苷酸片段融合到含有人类抗体恒定区的表达载体中形成重组表达载体，之后导入宿主细胞表达；(5)抗体筛选平台筛选获得具有结合活性和中和活性的本发明的全人源抗HCV的单克隆中和抗体。本发明还提供了前面所述的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段在制备HCV检测产品中的应用。所述检测产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。凡是包括前面所述结合分子的能够检测出HCV的检测产品均包括在本发明的范围之内。根据本发明的抗体，可以简单并精准鉴定7种HCV基因型。本发明还提供了前面所述的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段在制备前面所述的药物组合物中的应用。本发明还提供了前面所述的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段在制备抑制HCV药物中的应用。本发明还提供了前面所述的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段在制备预防或治疗由HCV感染引起的疾病的药物中的应用。进一步，所述由HCV感染引起的疾病包括肝病，如肝炎、肝硬化或肝癌和肝外疾病。本发明的肝炎是指急性或慢性丙型肝炎。本发明的抗体TRN1001可以用于治疗急性、慢性丙型肝炎患者，所述治疗是通过给予这些患者治疗有效量的能够结合HCVE2的抗体。“治疗有效量”是指能够在个体中有效减轻HCV感染症状的剂量，或者是有效降低循环中病毒颗粒的剂量。该抗体也可以用于例如HCV阳性携带者分娩的新生儿的被动免疫，还可以用于肝移植的被动免疫以防止这些患者可能出现的反复HCV感染。特别地，对于预计没有来自干扰素治疗的治疗效果的、感染基因型的丙型肝炎患者，可以减轻不良反应，并且可以提供选择新的治疗方法的机会。本发明的公开的抗体可以在重链和轻链可变区包含一个或多个糖基化位点，如本领域内熟知的，在可变区中存在的一个或多个糖基化位点可以导致增强的抗体免疫原性，或者由于改变了抗原结合而改变抗体的药物动力学。本发明的抗体可以被设计为在Fc区域内包含修改，通常是改变抗体的1个或多个功能特性，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗原依赖的细胞毒性。此外，本发明的抗体可以被化学修饰(如，可以将一个或多个化学基团连接于抗体)，或被修饰以改变其糖基化，从而再改变抗体的一个或多个功能特性。本发明的全人源抗HCV的单克隆中和抗体或其抗原结合片段可以以化学方法或者通过基因工程与其他因子缀合。这些因子提供将抗体靶向所需功能位点的作用或者为抗体提高或提供其他性能。根据本发明的全人源抗HCV的抗体可以以化学方法或者通过基因工程标记，以提供可检测的抗体。可检测的抗体可以用于例如评定对象是否己经感染丙型肝炎病毒毒株或者作为临床实验程序的一部分监测丙型肝炎病毒感染的发生或进展以例如确定指定治疗方案的功效。然而，它们也可以用于其它检测和/或分析和/或诊断目的。可检测的部分包括但不限于酶、辅基、荧光材料、发光材料，生物发光材料、放射性材料、正电子发射金属以及非放射性顺磁性金属离子。为了检测和/或分析和/或诊断目的标记依赖于使用的特定检测/分析/诊断技术和/或方法例如免疫组织化学染色(组织)样品、流式细胞计量术、激光扫描细胞计量术检测、荧光免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、生物测定(例如吞噬作用测定)、蛋白质印迹应用等。对于本领域已知的检测/分析/诊断技术和/或方法合适的标记为本领域技术人员所熟知。本文所用的术语“单克隆抗体”指从一类基本均一的群体获得的抗体，除少数可能存在的天然发生的突变外，该群体中包含的单个抗体是相同的。修饰语“单克隆”仅表示抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不能解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。本文所用的术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。可变性集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区(可变区中较保守的部分)，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，可形成部分β折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。本发明的优点和有益效果：本发明制备的的全人源抗HCV中和抗体效价高、特异性强、具有高交叉活性，成分清晰，可以高效表达、标准化生产、质量控制容易，成本低廉。本发明制备的的全人源抗HCV中和抗体既可以避免HCV多基因型及高变异性导致的抗体失效，又可以避免市场现有药物无高交叉反应活性的问题。附图说明图1为本发明的实施例的抗体TRN1001的SDS-PAGE检测图；图2为本发明的实施例的抗体TRN1001与7种不同亚型HCV真病毒的包膜糖蛋白中和活性测定图；图3为本发明的实施例的抗体TRN1001与HCV病毒抗原亲和活性测定图；图4为本发明的实施例的抗体TRN1001与5种不同HCV病毒株的中和活性测定图，其中，A：h77；B：JFH1；C：SA13；D：S52；E：ED43。具体实施方式下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例1全人源抗HCV的单克隆中和抗体TRN1001的制备1.PBMC分离和单个记忆性B细胞分选细胞计数后利用流式细胞术从PBMC进行细胞分选，首先去除细胞碎片、黏连细胞和死细胞，通过荧光抗体染色得到CD3-/CD14-/CD16-/IgM-的细胞，选择表达CD235a-/IgD-/CD20+的B细胞，圈出CD27ALL记忆B细胞，用特异性标记荧光素的抗原得到E2双荧光标记的靶细胞。2.单细胞RT-PCR分离抗体可变区基因1)逆转录(RT)单细胞的RNA：将含有单个B淋巴细胞的96孔板的PCR预测混液中加入0.5μM的各亚型重链与轻链的恒定区引物与SuperscriptIV逆转录酶(Invitrogen，Carlsbad，CA)，同时设置阳性及阴性对照；逆转录PCR条件：55℃60min，降温至4℃。产物cDNA-20℃长期保存。2)抗体重链可变区和轻链可变区基因的扩增：采用巢式PCR方法，先以逆转录产物(cDNA)为模板，用抗体可变区的PCRa引物混合物扩增抗体可变区基因。50μLPCR反应体系中含有5μL的由RT-PCR逆转录而成的cDNA，HotStarTaqPlusDNAPolymerase及0.5μM的各亚型重链与轻链抗体的特异性引物；反应条件：预变性95℃5min，然后进行35个PCR循环，每个循环为：94℃×30s，55/56/50(H/K/L)℃×1mim，72℃×1.5min，最后用72℃延伸7min，降至10℃即可。第二步以上述PCR反应产物为模板，50μLPCR反应体系中含有3μL的PCRa反应产物，HotStarTaqPlusDNAPolymerase及0.5μM的各亚型重链与轻链抗体的特异性引物。PCR反应条件：预变性95℃5min，然后进行35个PCR循环，每个循环为：94℃×30s，58/60/64(H/K/L)℃×30s，72℃×1.5min，用72℃延伸7min后降至10℃。PCR产物用2.0％的琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。3.构建重组抗体的表达载体用特异性引物获取ELISA检测为阳性的抗体重链与轻链基因片段(包括可变区和恒定区)，利用TA克隆的方法分别将重链和轻链基因链接到pcDNA3.3载体上，将连接产物转化DH5α感受态细菌中，在含有氨苄青霉素的平板上37℃培养过夜，随即挑取12个单菌落用特异性引物进行PCR鉴定。取2μLPCR产物在1％琼脂糖凝胶上进行电泳检测，选取PCR鉴定为阳性的菌落进行基因测序，比对结果正确的即为抗体重链和轻链的重组表达质粒。4.抗体表达在大肠杆菌DH5α中大量扩增表达阳性抗体重链和轻链基因的质粒，无内毒素抽提试剂盒抽提。在10cm培养皿中用转染试剂Polyetherimide共转染CHO细胞，转染后4-6小时添加新鲜无血清培养基，置于37℃，5％CO2恒温培养箱中培养96小时，收集细胞上清进行检测。5.表达抗体的筛选检测ELISA筛选：以不同的HCV包膜糖蛋白为抗原，并用包被液将抗原稀释浓度为100ng/ml，包被于ELISA96孔板，每孔100μl，4℃过夜。封闭液37℃封闭2个小时。封闭后加一抗，抗体起始浓度为25μg/ml，3倍梯度稀释，每孔体积为100μl，37℃孵育1个小时，同时用HCV阳性病人血清作为阳性对照，狂犬抗体为阴性对照。用HRP标记的羊抗人IgG(1:2000稀释)作为二抗37℃孵育1个小时。加入底物显色液(TMB)100μL/孔，37℃避光放置5min后，用2M硫酸中止反应，用450nm波长进行比色。抗体中和实验：将不同的HCV包膜糖蛋白的包装成质粒，加入荧光素Luciferase基因转染CHO细胞用于包装HCV假病毒(HCVpp)，收取上清用于感染。铺Huh7细胞于96孔板中，每孔细胞约1*104个，每孔体积为100μl，过夜培养，感染时细胞约30％铺满。HCVpp与抗体混合，室温放置30min。加入HCVpp与抗体混合液于96孔板，感染Huh7细胞。对照组仅加入HCVpp，感染24h后换液，继续培养1-2天。感染后2-3天后测定Luciferase活性，测量方法为去掉细胞上清，每孔用30μl裂解液，充分裂解后取20μl细胞裂解液加30μl底物，读取荧光值。比较抗体与对照组，计算中和效率。6.抗体大量表达与纯化将中和实验鉴定出的有中和活性的编号为TRN1001的抗体重链与轻链的表达载体(其中，重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示)共转染CHO细胞(细胞融合度达到90％以上)，37℃，8％CO2，125rpm摇床中培养120小时。然后收集转染上清，利用蛋白(Protein)A亲和层析法进行纯化。通过SDS-PAGE和western-blot检验抗体TRN1001的表达及纯化情况，结果证实得到较纯蛋白，并可清晰观察到解链后的抗体轻、重链(图1)。实施例2TRN1001抗体结合活性检测1、ELISA测定结合活性步骤：以不同的HCV包膜糖蛋白为抗原，并用包被液将抗原稀释浓度为100ng/ml，包被于ELISA96孔板，每孔100μl，4℃过夜。封闭液37℃封闭2个小时。封闭后加一抗，TRN1001起始浓度为25μg/ml，3倍梯度稀释，每孔体积为100μl，37℃孵育1个小时，同时用HCV阳性病人血清作为阳性对照，狂犬抗体为阴性对照。用HRP标记的羊抗人IgG(1:2000稀释)作为二抗37℃孵育1个小时。加入底物显色液(TMB)100μL/孔，37℃避光放置5min后，用2M硫酸中止反应，用450nm波长进行比色。结果如图2所示，把表达纯化的抗体TRN1001进行大于2000倍稀释后TRN1001抗体依然可以与抗原结合，具有极强的结合活性(图2中的HCV1a、HCV1b、HCV2、HCV3、HCV4、HCV5、HCV6、HCV7为不同的HCV包膜糖蛋白)。2、TRN1001抗体与HCV包膜糖蛋白的特异性结合检测将不同的HCV包膜糖蛋白的包装成质粒，加入荧光素Luciferase基因转染CHO细胞用于包装HCV假病毒(HCVpp)，收取上清用于感染。铺Huh7细胞于96孔板中，每孔细胞约1*104个，每孔体积为100μl，过夜培养，感染时细胞约30％铺满。HCVpp与不同浓度的抗体TRN00C018混合，起始浓度75μg/ml，3倍稀释，室温放置30min。加入HCVpp与抗体TRN1001混合液于96孔板，感染Huh7细胞。对照组仅加入HCVpp，感染24h后换液，继续培养1-2天。感染后2-3天后测定Luciferase活性，测量方法为去掉细胞上清，每孔用30μl裂解液，充分裂解后取20μl细胞裂解液加30μl底物，读取荧光值。结果：TRN1001能100％与HCV包膜糖蛋白特异性结合，荧光值降低。实施例3TRN1001抗体亲和活性检测CM5芯片偶联捕获分子：将羊抗人IgG抗体作为捕获分子固定在CM5传感器芯片上，按照偶联试剂盒的操作将其偶联到CM5芯片金薄膜表面上。用EDC、NHS活化芯片的葡聚糖表面，以进样时间确定偶联量，最后用乙醇胺封闭表面残留的活化基团。CM5芯片上捕获分子捕获配体：将制备的全人源抗HCV中和抗体作为配体，以计算得到的信号值确定单抗的进样浓度及接触时间。单抗TRN1001与HCV-E2蛋白(抗原)结合的亲和力和动力学分析：HCV-E2蛋白株用HBS-EP缓冲液稀释作为分析物，分析物以逐渐增高的浓度依次流过芯片，分别得到信号曲线。每个浓度作为1个循环，完成1次循环后用3mol/L的氯化镁再生芯片以回复到原始未结合抗原的状态。用BiaCoreX-100System软件进行分析。结果如图3和表1所示，TRN1001抗体的亲和力达2.03*10-8mol。表1TRN1001与HCV-E2蛋白结合的亲和力和动力学分析结果Ka(1/Ms)Kd(1/s)KD(M)Rmax(RU)5.44E+031.10E-042.03E-08195.2实施例4TRN1001抗体与不同的HCV病毒株的中和活性检测铺Huh7细胞于96孔板中，过夜培养，感染时细胞约30％铺满。HCV病毒株(h77、JFH1、S52、ED43、SA13)与不同浓度的抗体TRN1001混合，起始浓度25μg/ml，3倍稀释，室温放置30min。加入HCV病毒株(h77、JFH1、S52、ED43、SA13)与抗体TRN1001混合液于96孔板，感染Huh7细胞。对照组仅加入HCV病毒株2G9，感染24h后换液，继续培养1-2天。感染后2-3天后测定活性，读取荧光值。比较抗体与对照组，计算中和效率。结果如图4所示，TRN1001抗体与不同的HCV病毒株的中和效率见表2。表2TRN1001抗体与不同的HCV病毒株的中和效率虽然以上仅描述了本发明的具体实施方式范例，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更或修改均落入本发明的保护范围。SEQUENCELISTING<110>广州泰诺迪生物科技有限公司；暨南大学；珠海泰诺麦博生物技术有限公司<120>一种全人源抗HCV的中和抗体-TRN1001<160>8<170>PatentInversion3.5<210>1<211>127<212>PRT<213>人源<400>1GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlySer151015SerValLysValSerCysLysValSerGlyAspArgIleAsnAsnTyr202530AlaIleAsnTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpMet354045GlyArgIleIleGlyIleValGlyLeuAlaAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrAlaAspLysSerThrSerThrGlyTyr65707580MetGluLeuSerThrLeuLysSerAspAspThrAlaMetTyrTyrCys859095AlaThrAspAsnArgIleLeuAlaAlaAlaProSerHisTyrSerTyr100105110SerMetAspLeuTrpGlyProGlyThrThrValThrValSerSer115120125<210>2<211>8<212>PRT<213>人源<400>2GlyAspArgIleAsnAsnTyrAla15<210>3<211>8<212>PRT<213>人源<400>3IleIleGlyIleValGlyLeuAla15<210>4<211>20<212>PRT<213>人源<400>4AlaThrAspAsnArgIleLeuAlaAlaAlaProSerHisTyrSerTyr151015SerMetAspLeu20<210>5<211>110<212>PRT<213>人源<400>5GlnSerAlaLeuThrGlnProAlaSerValSerGlySerProGlyGln151015SerIleThrIleSerCysThrGlyThrSerSerAspValGlyGlyAsp202530AsnTyrValSerTrpTyrGlnGlnTyrThrGlyLysAlaProLysVal354045MetIleTyrAspValSerLysArgProSerGlyValSerAsnArgPhe505560SerGlySerLysSerGlyAsnThrAlaSerLeuThrIleSerGlyLeu65707580GlnAlaGluAspGluAlaAspTyrTyrCysCysSerTyrThrSerAsp859095AsnSerTyrValPheGlySerGlyThrLysValIleValLeu100105110<210>6<211>9<212>PRT<213>人源<400>6SerSerAspValGlyGlyAspAsnTyr15<210>7<211>3<212>PRT<213>人源<400>7AspValSer1<210>8<211>10<212>PRT<213>人源<400>8CysSerTyrThrSerAspAsnSerTyrVal1510当前第1页1 2 3