本发明涉及禽蛋制备卵黄抗体领域，具体涉及禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法及其用途。
背景技术：
I群禽腺病毒组成了腺病毒科的禽腺病毒属。Ⅱ群(火鸡出血性肠炎和相关病毒)和Ⅲ群(减蛋综合症)禽腺病毒与疾病的关系明确，相比之下，大多数I群的禽腺病毒对禽类的致病作用还未完全确定。但FAdV-1和FAdV-4明显属于例外，其中FAdV-1能引起鹌鹑支气管炎，FAdV-4是心包积水肝炎综合征的主要病因。当鸡的健康受到损害时，如并发感染鸡传染性贫血病毒(CIAV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)等其他病原，其他的禽腺病毒株可使条件性致病源发生快速感染。I群禽腺病毒已经鉴定了5个禽腺病毒，其名称用字母A～E表示。每个种内的病毒主要根据交叉中和实验结果进一步分为不同的血清型。病毒颗粒直径为70～nm，无囊膜，呈20面体对称结构。病毒核酸为双股DNA，占整个病毒粒子的11.3％～13.5％，其余部分为蛋白质。病毒六邻体是主要的衣壳蛋白，含有型、群和群异性抗原决定簇，因而感染后可产生相应的型，群和群的特异性抗体。
卵黄抗体是从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。抗体又称免疫球蛋白，具有抗菌、抗病毒、中和毒素等免疫活性。还能够调理、凝集和沉淀抗原，激活补体。在疫病爆发时可用于紧急治疗。此蛋白类大分子用于治疗时必须与其生物活性密切相关，因此在提取时必须保证其生物活性的稳定。大量生产高活性抗体对于治疗免疫疾病具有重要的价值和广阔的市场前景。
目前提取卵黄抗体的方法有很多种：
1、酸化水提取法：将卵黄与纯化水按一定比例混合后，用盐酸调节PH值，通过静置离心收集上清液，来达到收集卵黄抗体的效果。但是这种方法收集的卵黄抗体含量较低，不能完全体现卵黄的真正抗体含量。
2、聚乙二醇提取法：将卵黄与PBS缓冲液按一定比例混合后，加入一定比例的聚乙二醇粉末，然后静置，10000r/min离心。聚乙二醇溶于水中不会发热、升温，不会引起蛋白质变性，沉淀蛋白质的时间较短且不影响离心处理，并有促进蛋白质结晶的作用，但聚乙二醇易溶于水，而且需要用到10000r/min离心，在耗费成本的同时也不能有效去除聚乙二醇，抗体得率也不高。
3、辛酸萃取法：向用酸化水法提取的IgY溶液中缓慢加入终浓度为1％的正辛酸，搅拌10min，放入冰箱中冷冻10min，抽滤得IgY溶液。该方法与聚乙二醇法相似，但辛酸在水中溶解度极低(0.062g/L)，因此在水溶性物质中辛酸残留量极微。但是这种方法需要冷冻抽滤，而且抗体含量不是很高。
4、普通氯仿提取法：将卵黄、生理盐水、氯仿按一定的比例混匀后室温放置30min，3000r/min离心20min，溶液分成3层，下层为有机溶剂，中间层为变性脂蛋白，上层为提取的IgY溶液。这种方法需要使用到离心机，而且不一定100％能分层，在室温低下非常难析出大量的IgY溶液。因此，对于本领域技术人员来说，选用一种即能分离出含有大量卵黄抗体又要工艺简单能够适于工业化生产的提取卵黄抗体的方法成了一个技术难题。
因此，对于本领域技术人员来说，找到一种既能分离出含大量卵黄抗体，又能适合工业化生产的工艺简单、节人成本的简易提取卵黄抗体的方法是亟待解决的问题。
技术实现要素：
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的生产卵黄抗体纯度低、制备繁锁、活性低的缺陷，从而提供一种抗体纯度高、对活性无影响，得率高的禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法。
为此，本发明的禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
(1)将禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活苗为抗原免疫健康母鸡，并收集被免疫母鸡所产的鸡蛋；
(2)将所述免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液；
(3)将所述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统，所述双水相系统包括25wt％～28wt％的聚乙二醇和20wt％～25wt％的柠檬酸钠，得到水溶性组分混合液；
(4)对上述水溶性组分混合液进行分离纯化。
可选地，所述水溶性组分混合液中还包括0.05wt％～0.30wt％的Nacl。
可选地，所述步骤(2)具体包括：
对被免疫鸡蛋的蛋壳进行消毒处理；
取被免疫鸡蛋的卵黄并加入所述卵黄重量8～10倍的双蒸水制成卵黄稀释液；
使用0.1mol/LHCl调节卵黄稀释液的pH值至5～7；
放置于4℃～6℃环境下搅拌7～9小时；
将搅拌后的卵黄稀释液在4℃～6℃的温度下离心，得到卵黄抗体水溶性组分液上清液。
可选地，取被免疫鸡蛋的卵黄时，还包括使用无菌NS将蛋壳内的残余蛋清洗出来。
可选地，步骤(1)中免疫健康母鸡采用注射免疫，具体为4点注射为，肌肉一点，胸部一点，两翼下各一点，首次免疫后的第7天及第14天进行加强免疫。
可选地，步骤(4)离心后分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体层，还包括在该中间层中加入0.05％的蔗糖进行冷冻干燥的步骤。
可选地，当柠檬酸钠的浓度为20wt％时，卵黄稀释液的pH值为5.1，聚乙二醇的分子量为2000，Nacl浓度为2.5wt％。
可选地，所述柠檬酸钠的pH值为8.0。
根据所述的腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法所得抗体制成微胶囊。
根据上述方法或产品在治疗制备禽类鸡传染性贫血病毒(CIAV)和传染性法氏囊病病毒的药物中的用途。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明实施例提供的禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，卵黄抗体通过禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活苗为抗原免疫健康母鸡而得，具有特异性强，效价高的特点。上述卵黄抗体是从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。
2.本发明实施例提供的禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，提取环境和条件温和、非致变性，能够获得高纯度的抗体，所得抗体得率在90％以上，较传统方法大大提高，上述方法获得抗体的成本低，可以大规模的生产，易于产业化，且扩大生产后得率不改变，具有重要的价值和广阔的市场前景。
具体实施方式
下述各实施例中使用的抗原的制备方法为：禽腺病毒Ⅳ型菌在液体培养基中扩增培养至菌液浓度107～10 9CFU/mL，收集菌体，用PBS稀释后油乳灭活，得到灭活的禽腺病毒Ⅳ型。
实施例1
本实施例提供一种禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.将免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液的具体步骤如下：
先用75％酒精将收集的鸡蛋浸泡5分钟，对外壳进行消毒处理；取出鸡蛋用清水冲洗，用无菌纱布将蛋壳擦干；将蛋壳打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至蛋清流尽，使用无菌NS将蛋壳内的残余蛋清洗出来；打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；把蛋黄加入无菌量杯，记录卵黄量(一般约5-10g),然后加入8倍灭菌的双蒸水于量杯中制成卵黄稀释液；用0.1mol/LHCl调卵黄稀释液pH为5，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌9小时；搅拌结束后，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以10000转/分钟(用高速低温离心机)离心15分钟，收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液，制成水溶性组分液；
S4.将上述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统混合均匀，然后至于37.5℃水浴锅温热，待双水相系统明显分层后转入离心机3000r/min，离心10分钟，离心后双水相系统明显分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体；
其中，双水相系统由25wt％的聚乙二醇(2000)和25wt％的柠檬酸钠(pH＝8.0)，加入一定量的去离子水，得到水溶性组分混合液，聚乙二醇2000、25wt％的柠檬酸钠和去离子水按1：1：1：1混合。
实施例2
本实施例提供一种禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.将免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液的具体步骤如下：
先用75％酒精将收集的鸡蛋浸泡15分钟，对外壳进行消毒处理；取出鸡蛋用清水冲洗，用无菌纱布将蛋壳擦干；将蛋壳打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至蛋清流尽；打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；把蛋黄加入无菌量杯，记录卵黄量(一般约5-10g),然后加入8倍灭菌的双蒸水于量杯中制成卵黄稀释液；用0.1mol/LHCl调卵黄稀释液pH为7，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌8小时；搅拌结束后，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以12000转/分钟(用高速低温离心机)离心15分钟，收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液，制成水溶性组分液；
S4.将上述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统混合均匀，然后至于37.5℃水浴锅温热，待双水相系统明显分层后转入离心机3000r/min，离心10分钟，离心后双水相系统明显分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体；
其中，双水相系统由25wt％的聚乙二醇2000和25wt％的柠檬酸钠(pH＝8.0)，加入一定量的去离子水，得到水溶性组分混合液，聚乙二醇2000、25wt％的柠檬酸钠和去离子水按1：1：1：1混合；
S5.去除步骤S4中的下层和上层后，向中间层盐析出的抗体层加入0.05％的蔗糖进行冷冻干燥，既延长了抗体的保存时间又对抗体进行浓缩，抗体冻干后其活性与冻干前活性无变化。
实施例3
本实施例提供一种禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液的具体步骤如下：
先用75％酒精将收集的鸡蛋浸泡10分钟，对外壳进行消毒处理；取出鸡蛋用清水冲洗，用无菌纱布将蛋壳擦干；将蛋壳打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至蛋清流尽，使用无菌NS将蛋壳内的残余蛋清洗出来；打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；把蛋黄加入无菌量杯，记录卵黄量(一般约5-10g),然后加入10倍灭菌的双蒸水于量杯中制成卵黄稀释液；用0.1mol/LHCl调卵黄稀释液pH为6，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌7小时；搅拌结束后，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以11000转/分钟(用高速低温离心机)离心15分钟，收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液，制成水溶性组分液；
S4.将上述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统混合均匀，然后至于37.5℃水浴锅温热，待双水相系统明显分层后转入离心机3000r/min，离心10分钟，离心后双水相系统明显分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体；
其中，双水相系统由25wt％的聚乙二醇2000、20wt％的柠檬酸钠(pH＝8.0)和0.05wt％的Nacl，加入一定量的去离子水，得到水溶性组分混合液，聚乙二醇2000、25wt％的柠檬酸钠和去离子水按1：1：1：1混合。
S5.去除步骤S4中的下层和上层后，向中间层盐析出的抗体层加入0.05％的蔗糖进行冷冻干燥。
实施例4
本实施例提供一种禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液的具体步骤如下：
先用75％酒精将收集的鸡蛋浸泡7分钟，对外壳进行消毒处理；取出鸡蛋用清水冲洗，用无菌纱布将蛋壳擦干；将蛋壳打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至蛋清流尽；打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；把蛋黄加入无菌量杯，记录卵黄量(一般约5-10g),然后加入8倍灭菌的双蒸水于量杯中制成卵黄稀释液；用0.1mol/LHCl调卵黄稀释液pH为5.1，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌8小时；搅拌结束后，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以10000转/分钟(用高速低温离心机)离心15分钟，收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液，制成水溶性组分液；
S4.将上述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统混合均匀，然后至于37.5℃水浴锅温热，待双水相系统明显分层后转入离心机3000r/min，离心10分钟，离心后双水相系统明显分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体；
其中，双水相系统由26wt％的聚乙二醇2000、24wt％的柠檬酸钠(pH＝8.0)和3.0wt％的Nacl，加入一定量的去离子水，得到水溶性组分混合液，聚乙二醇2000、25wt％的柠檬酸钠和去离子水按1：1：1：1混合
S5.去除步骤S4中的下层和上层后，向中间层盐析出的抗体层加入0.05％的蔗糖进行冷冻干燥。
实施例5
本实施例提供一种禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液的具体步骤如下：
先用75％酒精将收集的鸡蛋浸泡12分钟，对外壳进行消毒处理；取出鸡蛋用清水冲洗，用无菌纱布将蛋壳擦干；将蛋壳打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至蛋清流尽；打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；把蛋黄加入无菌量杯，记录卵黄量(一般约5-10g),然后加入8倍灭菌的双蒸水于量杯中制成卵黄稀释液；用0.1mol/LHCl调卵黄稀释液pH为5.5，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌9小时；搅拌结束后，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以10000转/分钟(用高速低温离心机)离心15分钟，收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液，制成水溶性组分液；
S4.将上述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统混合均匀，然后至于37.5℃水浴锅温热，待双水相系统明显分层后转入离心机3000r/min，离心10分钟，离心后双水相系统明显分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体；
其中，双水相系统由27wt％的聚乙二醇2000、23wt％的柠檬酸钠(pH＝8.0)，0.15wt％的Nacl，加入一定量的去离子水，得到水溶性组分混合液，聚乙二醇2000、25wt％的柠檬酸钠和去离子水按1：1：1：1混合。
S5.去除步骤S4中的下层和上层后，向中间层盐析出的抗体层加入0.05％的蔗糖进行冷冻干燥。
实施例6
本实施例提供一种禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.免疫母鸡所产鸡蛋中的卵黄分离得到水溶性组分液的具体步骤如下：
先用75％酒精将收集的鸡蛋浸泡13分钟，对外壳进行消毒处理；取出鸡蛋用清水冲洗，用无菌纱布将蛋壳擦干；将蛋壳打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至蛋清流尽；打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；把蛋黄加入无菌量杯，记录卵黄量(一般约5-10g),然后加入8倍灭菌的双蒸水于量杯中制成卵黄稀释液；用0.1mol/LHCl调卵黄稀释液pH为6.5，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌8小时；搅拌结束后，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以11000转/分钟(用高速低温离心机)离心15分钟，收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液，制成水溶性组分液；
S4.将上述卵黄分离得到水溶性组分液加入至双水相系统混合均匀，然后至于37.5℃水浴锅温热，待双水相系统明显分层后转入离心机3000r/min，离心10分钟，离心后双水相系统明显分为三层，上层为聚乙二醇层，下层为柠檬酸钠层，中间层为盐析出的抗体；
其中，双水相系统由25wt％的聚乙二醇2000、20wt％的柠檬酸钠(pH＝8.0)和1.5wt％的Nacl，加入一定量的去离子水，得到水溶性组分混合液，聚乙二醇2000、25wt％的柠檬酸钠和去离子水按1：1：1：1混合。
S5.去除步骤S4中的下层和上层后，向中间层盐析出的抗体层加入0.05％的蔗糖进行冷冻干燥。
S6.使用上述方法得到的抗体制成微胶囊保存，方便使用。
对比例1
本实施例提供的禽腺病毒Ⅳ型卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤：
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.将卵黄与PBS缓冲液按一定比例混合后，加入一定比例的聚乙二醇粉末，然后静置，10000r/min离心，得到上层液体为抗体液。
对比例2
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.卵黄与蛋清分离后，将卵黄与纯化水按一定比例混合后，用0.1mol/LHCl盐酸调卵黄稀释液pH为6.5，把制备好的卵黄液放置在4℃环境下搅拌，通过静置离心收集上清液，以收集卵黄抗体。
对比例3
S1.选择健康的17-18周龄海兰褐鸡3只，将免疫原(禽腺病毒Ⅳ型油乳灭活疫苗)注射到海兰褐鸡体内，每只免疫注射量为0.5ml，免疫注射部位为4点注射，分别为胸部一点，两翼下各一点，肌肉一点共四点，首次免疫后的第7天及14天进行加强免疫，免疫剂量与方法与首次免疫相同；
S2.免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起，将收集的鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，收集海兰褐鸡未免疫鸡蛋为阴性对照；
S3.卵黄与蛋清分离后，将卵黄与纯化水按一定比例混合后，静置2小时得到上层清液为卵黄粗提物，向卵黄抗体粗提物中加入硫酸铵至饱和度为60％，搅拌均匀后4℃过夜，4℃下离心，将沉淀用去离子水稀释至原体积，再加入硫酸钠至饱和度为14％，搅拌均匀后室温过夜，室温离心，将沉淀用去离子水稀释至原体积，得到卵黄抗体提取液；卵黄抗体提取液用100kDa截留量的超滤膜包进行超滤浓缩，超滤后的卵黄抗体提取液在-70℃条件下预冻2h，然后在真空度20Pa下，冷冻干燥，24h后得到纯化的腺病毒Ⅳ型卵黄抗体冻干粉。
效果例
测试方法：使用间接ELISA法测定所提卵黄抗体与未提抗体的效价。
包被禽腺病毒Ⅳ型抗原4℃过夜，PBST溶液洗涤三次，每次1min，洗涤后加入5％的脱脂奶粉37℃封闭2小时，封闭后PBST洗涤三次，每一1min，洗涤后将所提抗体还原为提纯前的体积作为一抗以及免疫血清原液作为一抗加入到封闭后的ELISA板中，1％的BSA作为阴性对照加入。37℃温箱抚育1小时后PBST洗涤三次，每次1min，加入二抗37℃温箱抚育40min。PBST洗涤3次，每次1min。洗涤后加入显色液，37℃放置15min。15min后加入终止液，酶标仪测450nm的OD值及为所得抗体效价。
所得值与阴性对照组比值大于2.1及可判定所测效价为有效值。对于有效值减去阴性对照后与免疫血清减去阴性对照组的OD值乘以100％及作为所得抗体的得率。
抗体得率的计算公式：
X为所提抗体的OD值，Y为免疫血清的OD值，R为阴性对照。此处，X/R>2.1；Y/R>2.1。
经检测实施例1提取抗体得率为91.7％，实施例2抗体得率为90.3％，实施例3的抗体得率为92.6％，实施例4的抗体得率为92.5％，实施例5的抗体得率为91.9％，实施例6的抗体得率为95.7％，由此可得，通过本申请所使用的提取方法所得到的抗体得率均为90％以上，特别是实施例6的试验参数，抗体得率稳定且相对高。对比例1～对比例3的抗体得率很低，其中，对比例3的抗体得率在70％左右，较对比例1和对比例2高。综上所述，使用上述提取方法所得抗体质量稳定，操作简单，成本低，具有很好的产业化前景。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。