本发明涉及一种抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备方法。
背景技术：
番鸭细小病毒为细小病毒科、细小病毒属的成员，病毒直径20～24 nm，无囊膜，呈二十面体对称，基因组大小约5k，主要引起1～3周龄雏番鸭发病，以腹泻、软脚、喘气为特征，发病率为27％～62％．；病死率为22％一43％，且病愈鸭大部分成为“僵鸭”。随着安徽省番鸭养殖量的增加，番鸭细小病毒病也时有发生。研究表明，IgY是一种高效、特异的抗体，且方便、廉价。为了有效防治番鸭细小病毒病，发明者制备了抗番鸭细小病毒卵黄抗体，通过试验发现其对番鸭细小病毒病起到了明显的预防和治疗作用。
技术实现要素：
本发明提出一种抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备方法。
一种抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将MDPV AH株病毒液经尿囊腔接种12日龄番鸭胚，0.1ml／胚，37℃下孵育，弃去24h内的死胚，收集24～120h内死亡的鸭胚尿囊液，置于零下60-零下80℃冰箱中冻存备用；
（2）灭菌生理盐水按1：5的比例稀释、混合、搅拌均匀，加入等体积的氯仿，充分振荡后5000r／min离心10min，收集上层水相，置于零下20℃冰箱中保存备用；
（3）取MDPV AH株胚胎尿囊液20ml，5000 r／min离心10min，取上清分装于7ml玻璃瓶中，每瓶2ml进行冻干备用；
（4）称取1g琼脂糖置于100 ml8％NaCl溶液中，加热融化后倒入玻璃培养皿中制成琼脂扩散平板，冷却后用打孔器打成梅花状小孔，各孔用融化的琼脂糖补底；
（5）置于4℃下冷却，取制备的冻干琼扩抗原1瓶，用200微升超纯水溶解，取50微升加入中间孔，外周孔依次加入倍比稀释的纯化卵黄抗体50微升；
（6）将加样后的琼脂扩散平板放人湿盒内置37℃温箱扩散24～48h后即得。
优选地，所述死亡的鸭胚尿囊液的保存温度为零下80℃。
优选地，所述步骤（6）扩散温度为30h。
本发明所述方法制备的抗番鸭细小病毒卵黄抗体，对番鸭细小病毒病起到了明显的预防和治疗作用可有效防治番鸭细小病毒，本发明所述方法简单，实用性强，可工业化生产。
具体实施方式
实施例1。
一种抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将MDPV AH株病毒液经尿囊腔接种12日龄番鸭胚，0.1ml／胚，37℃下孵育，弃去24h内的死胚，收集24～120h内死亡的鸭胚尿囊液，置于零下60-零下80℃冰箱中冻存备用；
（2）灭菌生理盐水按1：5的比例稀释、混合、搅拌均匀，加入等体积的氯仿，充分振荡后5000r／min离心10min，收集上层水相，置于零下20℃冰箱中保存备用；
（3）取MDPV AH株胚胎尿囊液20ml，5000 r／min离心10min，取上清分装于7ml玻璃瓶中，每瓶2ml进行冻干备用；
（4）称取1g琼脂糖置于100 ml8％NaCl溶液中，加热融化后倒入玻璃培养皿中制成琼脂扩散平板，冷却后用打孔器打成梅花状小孔，各孔用融化的琼脂糖补底；
（5）置于4℃下冷却，取制备的冻干琼扩抗原1瓶，用200微升超纯水溶解，取50微升加入中间孔，外周孔依次加入倍比稀释的纯化卵黄抗体50微升；
（6）将加样后的琼脂扩散平板放人湿盒内置37℃温箱扩散24～48h后即得；
（7）所述死亡的鸭胚尿囊液的保存温度为零下80℃。
实施例2。
一种抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将MDPV AH株病毒液经尿囊腔接种12日龄番鸭胚，0.1ml／胚，37℃下孵育，弃去24h内的死胚，收集24～120h内死亡的鸭胚尿囊液，置于零下60-零下80℃冰箱中冻存备用；
（2）灭菌生理盐水按1：5的比例稀释、混合、搅拌均匀，加入等体积的氯仿，充分振荡后5000r／min离心10min，收集上层水相，置于零下20℃冰箱中保存备用；
（3）取MDPV AH株胚胎尿囊液20ml，5000 r／min离心10min，取上清分装于7ml玻璃瓶中，每瓶2ml进行冻干备用；
（4）称取1g琼脂糖置于100 ml8％NaCl溶液中，加热融化后倒入玻璃培养皿中制成琼脂扩散平板，冷却后用打孔器打成梅花状小孔，各孔用融化的琼脂糖补底；
（5）置于4℃下冷却，取制备的冻干琼扩抗原1瓶，用200微升超纯水溶解，取50微升加入中间孔，外周孔依次加入倍比稀释的纯化卵黄抗体50微升；
（6）将加样后的琼脂扩散平板放人湿盒内置37℃温箱扩散24～48h后即得；
（7）所述死亡的鸭胚尿囊液的保存温度为零下80℃；
（8）所述步骤（6）扩散温度为30h。
实施例3。
一种抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将MDPV AH株病毒液经尿囊腔接种12日龄番鸭胚，0.1ml／胚，37℃下孵育，弃去24h内的死胚，收集24～120h内死亡的鸭胚尿囊液，置于零下60-零下80℃冰箱中冻存备用；
（2）灭菌生理盐水按1：5的比例稀释、混合、搅拌均匀，加入等体积的氯仿，充分振荡后5000r／min离心10min，收集上层水相，置于零下20℃冰箱中保存备用；
（3）取MDPV AH株胚胎尿囊液20ml，5000 r／min离心10min，取上清分装于7ml玻璃瓶中，每瓶2ml进行冻干备用；
（4）称取1g琼脂糖置于100 ml8％NaCl溶液中，加热融化后倒入玻璃培养皿中制成琼脂扩散平板，冷却后用打孔器打成梅花状小孔，各孔用融化的琼脂糖补底；
（5）置于4℃下冷却，取制备的冻干琼扩抗原1瓶，用200微升超纯水溶解，取50微升加入中间孔，外周孔依次加入倍比稀释的纯化卵黄抗体50微升；
（6）将加样后的琼脂扩散平板放人湿盒内置37℃温箱扩散24～48h后即得；
（7）所述死亡的鸭胚尿囊液的保存温度为零下80℃；
（8）所述步骤（6）扩散温度为25h。