一种猪戊型肝炎病毒ORF2重组蛋白的制备方法及其ORF2蛋白和检测试剂盒与流程

文档序号:11107758阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种猪戊型肝炎病毒重组蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1. 以表达HEV ORF2 C段第337个到第645个氨基酸片段的核苷酸序列为目的片段,利用上游引物F和下游引物R扩增该目的片段;上游引物F和下游引物R的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示;

S2. 连接pMAL-c5X载体,获得pMAL-c5X-ORF2重组质粒,转入原核表达菌诱导表达即可。

2. 根据权利要求1所述的猪戊型肝炎病毒重组蛋白的制备方法,其特征在于,S2所述诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,温度30℃,时间5h。

3.权利要求1或2所述方法获得的猪戊型肝炎病毒重组蛋白。

4.权利要求3所述猪戊型肝炎病毒重组蛋白作为免疫原在制备检测猪戊型肝炎病毒的试剂中的应用。

5.一种检测猪戊型肝炎病毒的羧基化荧光微球12-ORF2,其特征在于,是将权利要求3所述猪戊型肝炎病毒重组蛋白与羧基化荧光微球012偶联获得。

6.权利要求5所述猪戊型肝炎病毒的羧基化荧光微球12-ORF2的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1. 羧基化荧光微球的活化:将清洗后的羧基化荧光微球012分别依次重悬于磷酸氢二钠缓冲液、Sulfo-NHS溶液和EDC溶液中进行活化;

S2. 活化后的羧基化荧光微球012悬液中加入猪戊型肝炎病毒重组蛋白进行孵育,并用PBS-TBN重悬即得。

7.一种检测猪戊型肝炎病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有权利要求3所述的猪戊型肝炎病毒重组蛋白。

8.一种检测猪戊型肝炎病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有权利要求5所述的猪戊型肝炎病毒的羧基化荧光微球12-ORF2。

9.根据权利要求8所述的检测猪戊型肝炎病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还含有生物标记的鸡抗鼠IgG抗体或者兔抗猪IgG抗体、链霉素-藻红蛋白。

10.根据权利要求9所述的检测猪戊型肝炎病毒的试剂盒,其特征在于,所述生物标记的鸡抗鼠IgG抗体的稀释度为1:1000,兔抗猪IgG抗体的稀释度为1:5000,链霉素-藻红蛋白的稀释度为1:1000。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1