本发明涉及一种超临界二氧化碳提取斑蝥素的方法，属于中药开发技术领域，应用于芫菁科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥中斑蝥素的提取。
背景技术：
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斑蝥为节肢动物门昆虫纲芫菁科(Meloidae)昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii L.的干燥虫体，具有消肿逐瘀、散结消徵、攻毒蚀疮等功效。斑蝥中的主要有效成分为斑蝥素，是特异性的丝氨酸(PP1)和苏氨酸(PP2A)蛋白磷酸酶抑制剂，在癌细胞增殖和分化等活动中起着重要的调控作用，具有抗肿瘤，抗病毒，升高白细胞，免疫增强等多种药效。
随着斑蝥素被越来越广泛地利用，人们对其研究逐步深入，目前斑蝥素提取方法多数使用乙醇、氯仿、甲苯等直接冷浸提取或浓盐酸酸化虫体后用丙酮、二氯甲烷回流提取，以上方法工序复杂、提取率低、周期长、污染大、危害人体、污染环境。而超临界二氧化碳萃取技术具有提取温度低，提取效率高，周期短，污染少，成本低等优点。
技术实现要素：
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本发明目的是针对目前斑蝥素提取方法技术不足，提供了一种超临界二氧化碳提取斑蝥素的方法，其包括如下步骤：
(1)原料预处理：从斑蝥药材中挑捡出杂质、霉变部分，剩余的用自来水洗净，自然晾干；
(2)粉碎：将上述(1)中晾干的斑蝥药材进行粉碎、过筛；
(3)浸泡：将上述(2)所得药材精密称量放入容量瓶中加入夹带剂浸泡；药材与夹带剂的质量体积比为1:5～10。
(4)超临界二氧化碳萃取：将上述(3)中的样品投入超临界二氧化碳萃取釜中，调节萃取温度为30～40℃，萃取压力为10～20MPa，并加入上述(3)所述的夹带剂作为助溶剂进行萃取，助溶剂流速为2～10g/min，萃取时间2～3h；在收集釜出口收集提取物；
(5)浓缩、析晶、提纯：将上述(4)提取物减压浓缩蒸去部分溶剂，浓缩液冷却析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加热溶解，过滤，除去不溶物，滤液冷却析晶，即得到斑蝥素；
所述的步骤(3)、(4)所用的夹带剂或助溶剂是体积比为10～70％的丙酮溶液。
所述的步骤(2)粉碎、过筛所用的筛目次为20～30目。
所述的步骤(5)中，减压浓缩压力为4～8MPa、滤液冷却析晶温度为40～50℃。
本发明所述的超临界二氧化碳提取斑蝥素的方法，与现有技术相比能够获得以下积极效果：
(1)本发明超临界二氧化碳提取斑蝥素萃取能力强，提取率高，用超临界二氧化碳提取中药有效成分，在最佳工艺条件下，能将所需提取的成分几乎完全提取，从而大大提高产品收率及资源的利用率。
(2)本发明超临界二氧化碳提取斑蝥素萃取的操作温度低，能较完好地保存中药有效成分不被破坏，不发生次生化。
(3)本发明超临界二氧化碳提取斑蝥素提取时间快，生产周期短，超临界CO2提取循环一开始，分离便开始进行，一般提取10分钟就有成分分离析出，2～4小时左右便可完全提取。
(4)本发明超临界二氧化碳提取斑蝥素操作参数容易控制，因此能保证有效成分及产品质量的稳定性。
(5)本发明超临界二氧化碳提取斑蝥素，其中超临界二氧化碳具有抗氧化、灭菌作用，有利于保证和提高产品的质量。
(6)本发明超临界二氧化碳提取斑蝥素工艺流程简单，操作方便，节省劳动力和大量有机溶剂，减少三废污染，是一种高效的提取、分离、制备及浓缩的新方法。
具体实施方式：
实施例1最佳因素水平下超临界二氧化碳提取斑蝥素
试验方法：称取斑蝥药材，从斑蝥药材中挑捡出杂质、霉变部分，剩余的用自来水洗净，自然晾干；将晾干的斑蝥药材进行粉碎、过筛，筛目次为30目；精密称取斑蝥药材粉末100g放入容量瓶中，按样品与夹带剂的质量体积比为1:6比例加入夹带剂浸泡3h，夹带剂是体积比为50％的丙酮溶液，浸泡好的样品放入超临界装置中的萃取釜中，进行萃取前，先将二氧化碳制冷液化，设置萃取压力20MPa，温度30℃，调节二氧化碳进入收集釜的入口阀门开度，将收集釜的压力控制在10MPa，同时温度控制在30℃，设置助溶剂的流速为5g/min，二氧化碳流速为20g/min。助溶剂由高压泵加入到萃取釜中，助溶剂是体积比为50％的丙酮溶液，待萃取压力和温度达到预设值后，开始计时，萃取2h后，停止萃取，关闭二氧化碳气瓶，打开手动排气阀进行泄压，在收集釜出口收集萃取物，将上述萃取物减压(压力为5MPa)浓缩蒸去部分溶剂，浓缩液冷(温度为40℃)却析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加热溶解，过滤，除去不溶物，滤液冷却析晶，即得到斑蝥素。分析计算得出斑蝥素提取含量达2.8％。
实施例2一般因素水平下超临界二氧化碳提取斑蝥素
试验方法：称取斑蝥药材，从斑蝥药材中挑捡出杂质、霉变部分，剩余的用自来水洗净，自然晾干；将晾干的斑蝥药材进行粉碎、过筛，筛目次为20目；精密称取斑蝥药材粉末100g放入容量瓶中，按样品与夹带剂的质量体积比为1:10比例加入夹带剂浸泡2h，夹带剂是体积比为30％的丙酮溶液，浸泡好的样品放入超临界装置中的萃取釜中，进行萃取前，先将二氧化碳制冷液化，设置萃取压力15MPa，温度30℃，调节二氧化碳进入收集釜的入口阀门开度，将收集釜的压力控制在20MPa，同时温度控制在30℃，设置助溶剂的流速为2g/min，二氧化碳流速为20g/min。助溶剂由高压泵加入到萃取釜中，助溶剂是体积比为30％的丙酮溶液，待萃取压力和温度达到预设值后，开始计时，萃取3h后，停止萃取，关闭二氧化碳气瓶，打开手动排气阀进行泄压，在收集釜出口收集萃取物，将上述萃取物减压(压力为8MPa)浓缩蒸去部分溶剂，浓缩液冷却(温度为50℃)析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加热溶解，过滤，除去不溶物，滤液冷却析晶，即得到斑蝥素。分析计算得出斑蝥素提取含量为1.46％。
实施例3较差因素水平下超临界二氧化碳提取斑蝥素
试验方法：称取斑蝥药材，从斑蝥药材中挑捡出杂质、霉变部分，剩余的用自来水洗净，自然晾干，将晾干的斑蝥药材进行粉碎、过筛，筛目次为40目；精密称取斑蝥药材粉末100g放入容量瓶中，按样品与夹带剂的质量体积比为1:3比例加入夹带剂浸泡3h，夹带剂是体积比为30％的丙酮溶液，浸泡好的样品放入超临界装置中的萃取釜中，进行萃取前，先将二氧化碳制冷液化，设置萃取压力20MPa，温度30℃，调节二氧化碳进入收集釜的入口阀门开度，将收集釜的压力控制在10MPa，同时温度控制在30℃，设置助溶剂的流速为5g/min，二氧化碳流速为20g/min。助溶剂由高压泵加入到萃取釜中，助溶剂是体积比为50％的丙酮溶液，待萃取压力和温度达到预设值后，开始计时，萃取2h后，停止萃取，关闭二氧化碳气瓶，打开手动排气阀进行泄压，在收集釜出口收集萃取物，将上述萃取物减压(压力为5MPa)浓缩蒸去部分溶剂，浓缩液冷(温度为40℃)却析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加热溶解，过滤，除去不溶物，滤液冷却析晶，即得到斑蝥素。分析计算得出斑蝥素提取含量为0.914％。
实施例4传统提取方法提取斑蝥素
试验方法：称取斑蝥药材，从斑蝥药材中挑捡出杂质、霉变部分，剩余的用自来水洗净，自然晾干，将晾干的斑蝥药材进行粉碎、过筛，筛目次为30目；精密称取斑蝥药材粉末100g放入容量瓶中，往容量瓶中加入50％的丙酮溶液，所述斑蝥药材粉末：丙酮溶液按质量比为1:6，在常温常压下振摇5-10小时，抽滤获得滤液，残渣用丙酮洗3次，每次200ml，抽滤，合并上述几次滤液，将合并后的滤液于60℃下进行蒸馏浓缩，蒸馏至无液体流出为止，将蒸好的浓缩液冷却至室温析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加热溶解，过滤，除去不溶物，滤液冷却析晶，即得到斑蝥素。分析计算得出斑蝥素提取含量为0.864％。