一种快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法与流程

文档序号:12097514阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于:构建含有目的基因的重组穿梭质粒,并将重组穿梭质粒加入含有MgCl2的活化的鸭疫里默氏杆菌菌液中,37℃孵育30分钟后,加入含MgCl2的GCB培养基继续孵育7小时,最后涂布在含对应抗性固体GCB培养基上,37℃培养箱培养18-24h至单克隆长出,即获得鸭疫里默氏杆菌回补候选菌株;所述穿梭质粒为能够在鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌中稳定存在的质粒。

2.根据权利要求1所述快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于:所述穿梭质粒为含有鸭疫里默氏杆菌复制起始基因的质粒。

3.根据权利要求1所述快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于:所述穿梭质粒为穿梭质粒pLMF03,其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根据权利要求1所述快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于:所述MgCl2的浓度为5mM。

5.根据权利要求1所述快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于,活化鸭疫里默氏杆菌的方法如下:从-80℃取出鸭疫里默氏杆菌在血平板上复苏至菌落长出,用接种环挑取单克隆菌落接种至GCB液体培养基中培养过夜;调整OD600=1,得活化鸭疫里默氏杆菌。

6.根据权利要求1所述快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于:所述目的基因为鸭疫里默氏杆菌RA0C_1193基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.根据权利要求1所述快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法,其特征在于:所述重组穿梭质粒由以下方法制备:将SEQ ID NO.4所示序列经NcoI和XbaI酶切位点连入pLMF03质粒NcoI和XbaI酶切位点制得。

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