一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法与流程

文档序号:12399381阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法,其特征在于包括如下步骤:

1)取含有人血白蛋白的酵母发酵液,调节pH至6.0,加入辛酸钠至5~20mM,68℃加热30min灭活蛋白酶,得到人血白蛋白粗品溶液;

2)混合模式吸附剂装填到扩张床中,平衡缓冲液预平衡,达到1.8~2.5倍膨胀率,保持20分钟;

3)调节人血白蛋白粗品溶液的pH至5.0~6.0,上样到扩张床中,平衡缓冲液冲洗,冲洗缓冲液冲洗,洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液,得到人血白蛋白溶液;

4)将人血白蛋白溶液脱盐,冷冻干燥,得到纯度大于95%的人血白蛋白;

所述的混合模式吸附剂为添加有增重剂的多孔微球,增重剂为石英砂、钛白粉或碳化钨粉末,多孔微球为琼脂糖微球、纤维素微球或聚丙烯酰胺微球;

所述的混合模式吸附剂的功能配基为色氨酸及其衍生物,包括L-色氨酸、L-色氨酸甲酯、L-色氨酸乙酯、5-羟基-L-色氨酸、N-乙酰-L-色氨酸、色胺和4-(1H-吲哚-2-基)苯胺;

所述的平衡缓冲液pH值为5.0~6.0;

所述的冲洗缓冲液pH值为7.0~8.0;

所述的洗脱缓冲液pH值为3.5~4.5。

2.如权利要求1所述的一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法,其特征在于所述的含有人血白蛋白的酵母发酵液为毕赤酵母、汉逊酵母或酿酒酵母表达重组人血白蛋白的发酵液。

3.如权利要求1所述的一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法,其特征在于所述的平衡缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或乙酸-乙酸钠缓冲液,所述的冲洗缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,所述的洗脱缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

4.如权利要求1所述的一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法,其特征在于所述的步骤3)中的冲洗缓冲液的冲洗体积为5-20倍柱体积。

5.如权利要求1所述的一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法,其特征在于所述的步骤1)中酵母发酵液pH值和步骤3)人血白蛋白粗品溶液的pH调节所用酸溶液为乙酸或柠檬酸,所用碱溶液为氢氧化钠溶液。

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