1.一种外显子组装测序方法,其特征在于:结合多重PCR及序列之间的重叠延伸原理,设计引物组合物同时扩增多个外显子并将其组装在一起进行测序。
2.一种外显子组装测序方法,其特征在于,包括以下步骤:
提供核酸样本,所述核酸样本中包含待测基因;以及
利用权利要求1所述的引物组合物,使用多重PCR方法对分散在基因各处的外显子序列进行捕获,并将其通过overlap组装成为一个含有多个外显子片段的大扩增子,即扩增产物。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,进一步包括:
Overlap组装过程可以在第一步多重PCR扩增时完成,亦可对其进行二次PCR扩增,将多个外显子序列通过PCR的方法组装起来。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述基因包含但不限于BRCA1、BRCA2、TP53、EGFR等。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述引物组合物由根据各基因外显子序列设计的特异性的上/下游引物、重叠延伸的overlap序列以串联的方式组成。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:引物组合物设计时Tm值相似。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述重叠延伸的overlap序列是随机的,以及,同一个反应体系中的任意两个外显子之间的序列是特异的。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:测序方法包括但不限于Sanger测序法、高通量测序法等。
9.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中设置有权利要求1中所述的引物组合物。
10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所发明的试剂盒用于检测基因的外显子的序列情况,包括但不限于缺失、突变、重组等。