人叶酸代谢相关的三个SNP位点基因分型的PCR扩增系统和检测试剂盒的制作方法

文档序号:12056634阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人叶酸代谢相关的三个SNP位点基因分型的PCR扩增系统,其特征在于,所述三个SNP位点分别为:rs1801133、rs1801131、rs1801394;同时包含三个样本分子标签位点:Amelogenin、rs57863450、rs35134728;上述6个基因位点在同一PCR扩增体系相互兼容,同时扩增;6个基因位点相应的PCR扩增引物及其荧光标记如下:

第一个位点rs1801133:相应的PCR扩增引物寡核苷酸序列依次为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3;FAM荧光素标记SEQ ID No.3;

第二个位点rs1801131:相应的PCR扩增引物寡核苷酸序列依次为SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6;FAM荧光素标记SEQ ID No.6;

第三个位点rs1801394:相应的PCR扩增引物寡核苷酸序列依次为SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9;FAM荧光素标记SEQ ID No.9;

第四个位点Amelogenin:相应的PCR扩增引物寡核苷酸序列依次为SEQ ID No.10、SEQ ID No.11;FAM荧光素标记SEQ ID No.11;

第五个位点rs57863450:相应的PCR扩增引物寡核苷酸序列依次为SEQ ID No.12、SEQ ID No.13;FAM荧光素标记SEQ ID No.12;

第六个位点rs35134728:相应的PCR扩增引物寡核苷酸序列依次为SEQ ID No.14、SEQ ID No.15;FAM荧光素标记SEQ ID No.14。

2.如权利要求1所述的PCR扩增系统,其特征在于,SEQ ID No.1-SEQ ID No.15所示寡核苷酸PCR扩增引物的工作浓度为50〜300nmol/L。

3.如权利要求1所述的PCR扩增系统,其特征在于,引物组合物由SEQ ID No.1-SEQ ID No15所示寡核苷酸序列的PCR引物的干粉或溶液组成。

4.一种人叶酸代谢相关的三个SNP位点的基因分型方法,其特征在于使用权利要求1-3之一所述的复合PCR扩增系统检测人干血滤纸片。

5.一种人叶酸代谢相关的三个SNP位点基因分型检测试剂盒,所述三个SNP位点分别为:rs1801133、rs1801131、rs1801394;同时包含三个样本分子标签位点:Amelogenin、rs57863450、rs35134728;其特征在于,包含引物组合物容器、PCR反应母液容器、PCR辅助液;其中:

所述引物组合物容器包含引物SEQ ID No.1~SEQ ID No.15组合物贮存液,贮存液浓度为相应工作浓度的2~10倍;这里,SEQ ID No.1-SEQ ID No.15所示寡核苷酸PCR扩增引物的工作浓度为50〜300nmol/L;

所述PCR反应母液容器内有进行PCR反应的2~5倍反应浓度的PCR反应母液,PCR反应母液包含:DNA聚合酶0.5~5u、镁离子1~5mmol/L、dNTP 40~400μmol/L以及Tris-HCl缓冲液20~100mmol/L;

所述PCR辅助液容器内有可使所述PCR以干血滤纸片为扩增模板进行相应位点基因分型的缓冲体系,该缓冲体系以PBS为基液,包含浓度为1~2M的甜菜碱、浓度为10~30mM的(NH4)2SO4,以及浓度为2%~8%的DMSO。

6.一种如权利要求5所述检测试剂盒的使用方法,其特征在于具体步骤如下:

(1)多重PCR扩增:总反应体系为20μL,反应体系组成如下:

2×PCR反应母液 10μL

PCR辅助液 2μL

引物SEQ ID No.1~SEQ ID No.15组合物 2μL

人干血滤纸片1.0×1.0mm /

ddH2O 补足20μL

(2)PCR反应在普通PCR仪进行,PCR反应条件如下:95℃10分钟启动后,95℃ 30秒、60℃ 30秒、72℃ 30秒,共28个循环,然后60℃保温40分钟,然后4℃保温;

(3)PCR产物取1μL,按常规操作在遗传分析仪上进行毛细管电泳,得到每一个位点的基因分型图谱。

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