一种富锌灵芝菌丝体的生产方法与流程

文档序号:12644369阅读:161来源:国知局

本发明涉及一种灵芝的高效药用价值开发的方法,具体地说是一种富锌灵芝菌丝体的生产方法。



背景技术:

锌是人体必需的微量元素之一,在人体生长发育、生殖遗传、免疫、内分泌等重要生理过程中起着极其重要的作用,被人们冠以“生命之花”、“婚姻和谐素”的美称。锌存在于众多的酶系中,如碳酸酐酶、呼吸酶、乳酸脱氢酸、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、DNA和RNA聚中酶等中,是核酸、蛋白质、碳水化合物的合成和维生素A利用的必需物质。具有促进生长发育,改善味觉的作用。缺锌时易出现味觉嗅觉差、厌食、生长缓慢与智力发育低于正常等表现。中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所的最新调查结果表明,中国少年儿童的缺锌率高达60%,这60%的儿童每日锌摄入量不足世卫组织推荐量的一半,也就是说每2个孩子中就有1个缺锌!然而人体很难吸收利用无机锌而造成的普遍人群缺锌的状况,而灵芝具有广泛的药理作用,如抗肿瘤作用、免疫调节作用、镇静安神作用、强心及抗心肌缺血作用、调节血脂作用、平喘作用、保肝作用、抗缺氧和抗衰老作用等,如何培养基配方、让灵芝在深层液体培养时能够富集锌元素,使无机态的锌转化为有机态锌形成灵芝菌丝体结构的成分,为灵芝的高效药用价值开发提供了一种途径。



技术实现要素:

本发明要解决的技术问题是提供一种让灵芝在深层液体培养时能够富集锌元素,使无机态的锌转化为有机态锌形成灵芝菌丝体结构的成分的富锌灵芝菌丝体的生产方法。

为了解决上述技术问题,本发明的富锌灵芝菌丝体的生产方法,包括以下步骤:

A:芝深层发酵培养

a、灵芝菌种培养:培养温度为25~26℃,

取灵芝菌种在菌种培养基中培养20~30天,所述菌种培养基的配方组成为:马铃薯200~250g、葡萄糖20~25g、磷酸二氢钾3~4g、七水硫酸镁1.5~2g、维生素B110~20mg、琼脂18~20g、水1000ml;

b、摇床种:保持温度在25~26℃,在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基,用水稀释,然后置于振荡器上,搅拌3~4天,控制搅拌速度为100~120转/min;

c、一级放大:保持温度在25~26℃,将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中,培养2~3天;

d、二级放大:保持温度在25~26℃,将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中,培养2~3天;

e、发酵培养:保持温度在25~26℃,将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中,并加入发酵培养基发酵,所述发酵培养基含有七水硫酸锌;

B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45~55℃,加入20000u/g的酸性纤维素酶,加入量为发酵罐实际装量的0.0001~0.0004%,搅拌酶解3~4小时,得到灵芝酶解液;

C、将上述灵芝酶解液降至40~45℃,并加入质量浓度为10%的NaOH溶液,调节pH至7.0~9.0,加入发酵罐实际装量的0.006~0.012%的复合蛋白酶,搅拌酶解3~5小时,升温至85~95℃,灭酶活10~30分钟;

D、板框压滤:将所述步骤C酶解灵芝混合液取出,用50~60kg的压力压滤,除去固体物,得到灵芝酶解原液;

E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体,然后对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富锌灵芝菌丝体粉。

按质量百分数计,所述发酵培养基的配方组成为:玉米粉1~3%、蔗糖2~4%、七水硫酸锌0.01~0.02%,磷酸二氢钾0.01~0.02%、硫酸铵0.2~0.3%、酵母粉0.2~0.4%、豆油0.05~0.1%、余量为水;

所述得复合蛋白酶的质量组成为:

10万u/g的中性蛋白酶 35%

20万u/g的碱性蛋白酶 35%

10万u/g胰蛋白酶 10%

10万u/g的木瓜蛋白酶 15%

10万u/g的糖肽酶 5%

所述步骤A中e工序中,待达到以下标准时,发酵结束:待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象,且菌丝变细,菌丝原生质凝集,菌丝有自溶现象发生时。

所述步骤A中e工序中,待达到以下标准时,发酵结束:菌丝湿重达到15~20%。

所述步骤A中e工序中,待达到以下标准时,发酵结束:发酵原液的pH值为3.0~3.5。

本发明的有益效果在于:

通过灵芝深层发酵技术在液体培养基中加入添加七水硫酸锌,灵芝利用自身较强的锌元素生物富集作用,使无机的硫酸锌转化为有机态螯合锌,人体通过服用富锌灵芝从而达到补锌的作用。解决了人体很难吸收利用无机锌而造成的普遍人群缺锌的状况,提供了可行高效的补锌途径,通过合理设计培养基配方、让灵芝在深层液体培养时能够富集锌元素,使无机态的锌转化为有机态锌形成灵芝菌丝体结构的成分,这样生产出来的富锌灵芝菌丝体既具有灵芝广泛的药理作用又同时具有锌元素的生物机能等药理作用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式,对本发明的富锌灵芝菌丝体的生产方法作进一步详细说明。

本发明的富锌灵芝菌丝体的生产方法,包括以下步骤:

A:芝深层发酵培养

a、灵芝菌种培养:培养温度为25~26℃,

取灵芝菌种在菌种培养基中培养20~30天,所述菌种培养基的配方组成为:马铃薯200~250g、葡萄糖20~25g、磷酸二氢钾3~4g、七水硫酸镁1.5~2g、维生素B110~20mg、琼脂18~20g、水1000ml;

b、摇床种:保持温度在25~26℃,在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基,用水稀释,然后置于振荡器上,搅拌3~4天,控制搅拌速度为100~120转/min;

c、一级放大:保持温度在25~26℃,将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中,培养2~3天;

d、二级放大:保持温度在25~26℃,将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中,培养2~3天;

e、发酵培养:保持温度在25~26℃,将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中,并加入发酵培养基发酵,所述发酵培养基含有七水硫酸锌;

按质量百分数计,所述发酵培养基的配方组成为:玉米粉1~3%、蔗糖2~4%、七水硫酸锌0.01~0.02%,磷酸二氢钾0.01~0.02%、硫酸铵0.2~0.3%、酵母粉0.2~0.4%、豆油0.05~0.1%、余量为水;

待达到以下标准时,发酵结束:

待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象,且菌丝变细,菌丝原生质凝集,菌丝有自溶现象发生时;

发酵结束:菌丝湿重达到15~20%。

发酵原液的pH值为3.0~3.5。

B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45~55℃,加入20000u/g的酸性纤维素酶,加入量为发酵罐实际装量的0.0001~0.0004%,搅拌酶解3~4小时,得到灵芝酶解液;

C、将上述灵芝酶解液降至40~45℃,并加入质量浓度为10%的NaOH溶液,调节pH至7.0~9.0,加入发酵罐实际装量的0.006~0.012%的复合蛋白酶,搅拌酶解3~5小时,升温至85~95℃,灭酶活10~30分钟;

所述步骤C中复合蛋白酶的质量组成为:

10万u/g的中性蛋白酶35%

20万u/g的碱性蛋白酶 35%

10万u/g胰蛋白酶 10%

10万u/g的木瓜蛋白酶 15%

10万u/g的糖肽酶5%

D、板框压滤:将所述步骤C酶解灵芝混合液取出,用50~60kg的压力压滤,除去固体物,得到灵芝酶解原液;

E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体,然后对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富锌灵芝菌丝体粉。

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