本发明涉及化学医药领域，特别涉及一类噻吩并[3,2-d]嘧啶类化合物，该类化合物的制备方法及用途，该类化合物能够高选择性地抑制布鲁顿酪氨酸激酶(btk)而能在治疗或预防急性和慢性炎症、治疗或预防免疫失调疾病，或抗肿瘤中应用。
背景技术：
布鲁顿酪氨酸激酶(btk)是非受体型酪氨酸激酶tec家族的一员，在b细胞受体信号转导通路(bcr)中起到至关重要的作用，bcr信号通路参与介导调控正常b细胞的活化增殖、分化和凋亡。近年来研究发现，bcr信号通路异常与多种疾病相关，如炎症反应，癌症等。btk是bcr信号通路中的重要信号分子，也是近年来在炎症、自身免疫性疾病和癌症治疗领域非常热门的一个新靶点。目前，多个btk抑制剂已进入临床试验或者批准上市，临床试验数据表明btk抑制剂对类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等免疫疾病及多种b细胞相关的恶性肿瘤疗效显著。在正常b细胞发育和激活期间，异常bcr信号与自身免疫性疾病相关，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。此外，btk也在骨髓细胞群中表达，包括单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞，这些先天的细胞产生炎性细胞因子从而加重炎症。另外，在多种b细胞类型的恶性肿瘤中经常存在bcr通路的异常表达。b细胞受体信号转导通路还与癌症的发生发展紧密相关。btk作为b细胞受体信号通路中的一种关键酶，对b细胞的生长和功能发挥重要作用。本发明仅以依鲁替尼(第一个批准上市的口服btk抑制剂)为例，阐述btk抑制剂在抗肿瘤领域的广泛应用。依鲁替尼通过对btk的不可逆抑制机制发挥作用，显示出独特疗效。基于突出的临床表现，依鲁替尼通过突破性药物、优先审评、加速批准、孤儿药资格等多种快速途径批准上市。它是获得fda突破性药物通道批准的第二个新药，还获得了上市后7年的行政保护。到目前为止依鲁替尼批准用于四种肿瘤的治疗，其中包括套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、染色体17缺失的慢性淋巴细胞白血病、一种罕见的非霍奇金淋巴瘤—巨球蛋白血症。在推进中的临床试验中，其还应用于多种b细胞恶性肿瘤，包括弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)和多发性骨髓瘤(mm)。研究显示，它还具有潜在的治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮的作用。作为突破性治疗药物，其被认为是迄今为止治疗mcl最重要的突破，它的出现有望把cll变成一种可控制的慢性疾病。依鲁替尼上市后，美国国家综合癌症网络(nccn)立刻将之纳入白血病治疗指南。值得注意的是，大部分btk抑制剂除了抗肿瘤靶向药常见的副作用，还有其它副作用产生，这可能是靶向其它多种酪氨酸激酶产生的。综合以上几点，具有高活性、选择性和安全性的布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂在肿瘤、炎症和免疫疾病治疗领域具有巨大的应用前景。噻吩并[3,2-d]嘧啶环是一类具有广泛生物活性的药效团，大量针对噻吩并[3,2-d]嘧啶母核的修饰改造工作被报道。这些衍生物通过不同的生物机制发挥作用，比如danielp.sutherlin等利用噻吩并[3,2-d]嘧啶母核发展了pi3k/mtor抑制剂或高选择性的pi3k抑制剂，相关的成果发表在2010年的j.med.chem.53期1086–1097页和专利申请us20120088764上；jeremys.disc等报道了部分4,6位取代的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物具有sirt1/2/3抑制活性，相关成果发表在2013年的j.med.chem.第56期3666-3679页和专利申请wo2014138562/kr2015128768/cn105339371/us20160002273上；专利申请wo2011162515和kr2016082479/wo2016108623中开发了一系列2，4位取代的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物，具有egfr/btk以及其它多重激酶活性，其中olmutinib作为最终化合物进入临床研究。基于广泛的生物学活性，噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物在抗肿瘤，抗炎，抗真菌等多个领域有着广泛的应用。技术实现要素：本发明涉及到的化合物，是一类噻吩并[3,2-d]嘧啶衍生物，其中多个化合物对btk具有良好的抑制作用。值得指出的是，在药理学的免疫抑制实验中，本发明的化合物对lps诱导的b细胞活化增殖具有显著的抑制作用，且毒性较小，治疗窗口大。更值得指出的是，本发明的化合物具有高的激酶选择性，能有效减少副作用。基于以上药理学特点，本发明中的化合物可用于发展成为预防或治疗炎症疾病，免疫系统疾病和恶性肿瘤的药物。用于预防或者治疗的炎症疾病包括急性炎症疾病和慢炎症疾病，具体的急性炎症疾病如急性肺损伤，过敏，哮喘，慢性炎症疾病如风湿，类风湿性关节炎，特异性皮炎，湿疹，银屑病，痛风性关节炎，银屑病关节炎，过敏性鼻炎等。用于预防或者治疗的免疫系统疾病指的是系统性红斑狼疮，荨麻疹，恶性贫血，自身免疫性甲状腺炎，自身免疫性胃炎，自身免疫性阿狄森氏病，自身免疫性溶血性贫血等。用于预防或治疗的恶性肿瘤是指与b细胞异常增殖相关的肿瘤。本发明公开了一类对布鲁顿酪氨酸激酶(btk)具有显著的抑制作用的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物，其btk抑制活性良好，激酶选择性高，具有很强的免疫抑制活性作用，对小鼠原代淋巴细胞的细胞毒性低，对脂多糖(lps)诱导的b淋巴细胞活化增殖有显著的抑制活性。结合已有上市和临床研究中btk抑制剂的广泛应用和本发明中相关的生物学实验可以发现，本发明中的化合物在炎症，免疫系统疾病和恶性肿瘤治疗领域可以广泛应用。根据本发明的一方面，提供了结构式i所示的化合物或其药学上可接受的盐：其中，在结构式i中，r选自h，未取代或卤素取代的c1-c6直链或支链烷基；优选地，r选自h，未取代或卤素取代的c1-c3直链或支链烷基；更优选地，r选自h，甲基，乙基，正丙基，异丙基；r1选自h，d，卤素，未取代或卤素取代的c1-c6直链或支链烷基，-nh2，c1-c6直链或支链烷基取代的氨基，和氰基中的一至三个；优选地，r1选自h，d，f，cl，br，i，未取代或卤素取代的c1-c3直链或支链烷基，-nh2，c1-c3直链或支链烷基取代的氨基，和氰基中的一至三个；更优选地，r1选自h，d，f，cl，甲基，乙基，正丙基，异丙基，-nh2，和氰基中的一至三个；r2和r3各自独立地选自h，d，卤素，未取代或卤素取代的c1-c6直链或支链烷基，c1-c6直链或支链烷氧基，-coor4，氰基；优选地，r2和r3各自独立地选自h，d，f，cl，br，i，未取代或卤素取代的c1-c3直链或支链烷基，c1-c3直链或支链烷氧基，-coor4，氰基；更优选地，r2和r3各自独立地选自h，d，f，cl，甲基，乙基，正丙基，异丙基，甲氧基，乙氧基，丙氧基，-cooch3，-cooch2ch3，氰基；y是取代或未取代的c6-c10芳基或4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，其中，所述用于取代c6-c10芳基或4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基的取代基为选自c1-c6直链或支链烷氧基，氰基，卤素，c1-c6直链或支链烷基，c6-c10芳基，c6-c10芳基氧基，4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c6直链或支链烷氧羰基取代的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c6直链或支链烷基取代的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，-coor4，-soor5，-o-(ch2)n-o-r6和-cor7中的1至4个取代基；r4，r5，r6，r7各自独立地选自未取代或卤素取代的c1-c6直链或支链烷基，4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c6直链或支链烷基取代的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基；n是1～4的整数，优选地，y是取代或未取代的c6-c10芳基或5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，其中，所述用于取代c6-c10芳基或5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基的取代基为选自c1-c4直链或支链烷氧基，氰基，卤素，c1-c4直链或支链烷基，c6-c10芳基，c6-c10芳基氧基，5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷氧羰基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，-coor4，-soor5，-o-(ch2)n-o-r6和-cor7中的1至4个取代基；r4，r5，r6，r7各自独立地选自未取代或卤素取代的c1-c4直链或支链烷基，5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基；n是1～4的整数，优选地，y是取代的c6-c10芳基或5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基，其中，所述用于取代c6-c10芳基或5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基的取代基为选自c1-c3直链或支链烷氧基，氰基，卤素，c1-c3直链或支链烷基，c6-c10芳基，c6-c10芳基氧基，5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷氧羰基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c3直链或支链烷基取代的5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基，-coor4，-soor5，和-o-(ch2)n-o-r6中的1至4个取代基；r4，r5，r6各自独立地选自未取代或卤素取代的c1-c3直链或支链烷基，哌嗪基，n-甲基哌嗪基，n-boc哌嗪基，哌啶基；n是1～4的整数，更优选地，y是取代的苯基，其中，用于取代苯基的取代基选自甲基，乙基，丙基，f，cl，br，甲氧基，乙氧基，丙氧基，苯基，苯氧基，吗啉基，哌嗪基，n-甲基哌嗪基，n-boc哌嗪基，哌啶基，-coor4，-soor5，和-o-(ch2)n-o-r6中的1至4个取代基；r4，r5，r6各自独立地选自甲基，乙基，丙基，哌嗪基，n-甲基哌嗪基，n-boc哌嗪基，哌啶基；n是1，2或3；其中，所述芳香杂环基或非芳香杂环基包含选自n，o，s中的1至3个杂原子，所述卤素包括氟，氯，溴，碘。优选地，结构式i所示的化合物为下列结构式ii所示的化合物：其中，在结构式ii中，r、r1、r2和r3的定义与结构式i中相同，y1选自选自c1-c6直链或支链烷氧基，氰基，卤素，c1-c6直链或支链烷基，c6-c10芳基，c6-c10芳基氧基，4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c6直链或支链烷氧羰基取代的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c6直链或支链烷基取代的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，-coor4，-soor5，-o-(ch2)n-o-r6和-cor7中的1至4个取代基；r4，r5，r6，r7各自独立地选自未取代或卤素取代的c1-c6直链或支链烷基，4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c6直链或支链烷基取代的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基；n是1～4的整数，优选地，y1选自c1-c4直链或支链烷氧基，氰基，卤素，c1-c4直链或支链烷基，c6-c10芳基，c6-c10芳基氧基，5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷氧羰基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，-coor4，-soor5，-o-(ch2)n-o-r6和-cor7中的1至4个取代基；r4，r5，r6，r7各自独立地选自未取代或卤素取代的c1-c4直链或支链烷基，5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基；n是1～4的整数，更优选地，y1选自c1-c3直链或支链烷氧基，氰基，卤素，c1-c3直链或支链烷基，c6-c10芳基，c6-c10芳基氧基，5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c4直链或支链烷氧羰基取代的5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基，c1-c3直链或支链烷基取代的5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基，-coor4，-soor5，和-o-(ch2)n-o-r6中的1至4个取代基；r4，r5，r6各自独立地选自未取代或卤素取代的c1-c3直链或支链烷基，哌嗪基，n-甲基哌嗪基，n-boc哌嗪基，哌啶基；n是1～4的整数，更优选地，y1选自甲基，乙基，丙基，f，cl，br，甲氧基，乙氧基，丙氧基，苯基，苯氧基，吗啉基，哌嗪基，n-甲基哌嗪基，n-boc哌嗪基，哌啶基，-coor4，-soor5，和-o-(ch2)n-o-r6；r4，r5，r6各自独立地选自甲基，乙基，丙基，哌嗪基，n-甲基哌嗪基，n-boc哌嗪基，哌啶基；n是1，2或3；其中，所述芳香杂环基或非芳香杂环基包含选自n，o，s中的1至3个杂原子，所述卤素包括氟，氯，溴，碘。根据本发明，所述的c6～c10芳基指的是环上含有6-10个碳原子且不包含杂原子的单环或多环芳香性环基，非限制性地包括苯基、萘基。根据本发明，所述的4-12元芳香杂环基或非芳香杂环基指的是环上含有4-12个原子且至少含有一个选自o、n、s中的杂原子的单环或多环的芳香性或非芳香性环基，非限制性地包括氮丙啶基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、哌嗪基、吗啉基、哌啶基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、嘧啶基和三嗪基；5-10元芳香杂环基或非芳香杂环基和5-7元芳香杂环基或非芳香杂环基的含义以此类推。根据本发明，所述药学上可接受的盐指保留了结构式i和结构式ii的生物效力和性质，并与适合的非毒性的有机或无机酸形成的盐，如无机盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐等；有机酸盐，例如乙酸盐、三氟乙酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、草酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、磺酸盐(例如甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、羟乙基磺酸盐)、葡糖醛酸盐、葡糖酸盐等。本发明中，只要没有特殊说明，本发明中的结构还包括所有的异构体。例如，烷基包括直链烷基和支链烷基。进而，双键、环、稠环中的几何异构体(e型、z型、顺式、反式)、由存在不对称碳原子等而产生的光学异构体(r和s型，α和β构型，对映体，非对映体)、具有旋光性的光学活性体(d、l、d、l型)、旋光异构体、它们的任意比例混合物、外消旋混合物均包括在本发明中。另外，本发明中，也包括所有的由互变异构体产生的异构体。通式i或ii表示的化合物及其盐也可以存在为其溶剂合物的形式。溶剂合物优选为低毒性且水溶性的。作为适当的溶剂合物，例如可列举出水、醇类(比如乙醇)等的溶剂的溶剂合物，并可能存在多种晶型。另外，通式i或ii表示的化合物及其盐也可以存在为其前药的形式。前药是指能够在生物体内通过酶和/或胃酸等的反应发生，由此转化成通式i或ii表示的化合物。另外，通式i或ii表示的化合物的前药可以存在为水合物或非水合物。另外，通式i或ii表示的化合物的前药，也可以如“广川书店，1990年刊，《医药品的开发》，第7卷，《分子设计》，第163-198页”中所描述的那样，在生理条件下变为通式i或ii表示的化合物。进而，通式i或ii表示的化合物也可以是同位素(例如、氘、氚、11c、13c、14c、13n、15n、15o、18o、35s、18f、36cl、123i、125i)等标记的化合物。上述通式i或ii表示的化合物及其盐的异构体(包括光学异构体、旋光异构体、互变异构体以及它们的任意比例混合物)、溶剂合物和前药作为等同替代方式均包括在本发明中。根据本发明的另一方面，提供了结构式i所示化合物的制备方法：其中，化合物i由化合物i-1与r-丙烯酰氯在碱存在下反应得到，其中y、r、r1、r2、r3的定义如上所述；其中，反应可采用酰氯与胺的常规反应条件，例如反应可以在溶剂中进行，所述溶剂可选自四氢呋喃和水或1,4-二氧六环和水的混合溶剂(例如四氢呋喃或1,4-二氧六环和水的重量比为0.1-10)或纯四氢呋喃或纯1,4-二氧六环，优选一定比例的四氢呋喃和水的混合溶剂，所述碱可以选自三乙胺、二异丙胺，碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钠、碳酸氢钾；优选碳酸氢钠。优选地，化合物i-1可由如下方法制备：其中，其中y、r1、r2、r3的定义如上所述，步骤1：化合物i-0在碱存在下与y-硼酸催化反应以得中间产物，其中，y替换i-0的br取代基，反应可以在溶剂中进行，所用溶剂选自四氢呋喃和水或1,4-二氧六环和水的混合溶剂(例如四氢呋喃或1,4-二氧六环和水的重量比为0.1-10)或纯四氢呋喃或纯1,4-二氧六环，优选四氢呋喃和水的混合溶剂；所述碱可以选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钠、碳酸氢钾；优选碳酸钠，所述催化剂可以选自四三苯基膦钯、pd(dppf)cl2、pd(dppf)cl2dcm，优选pd(dppf)cl2或pd(dppf)cl2dcm；步骤2：将步骤1得到的中间产物加氢还原得到化合物i-1，例如可以在溶剂中，在氢气氛围(如1-30标准大气压)中室温搅拌加氢还原得到化合物i-1，其中，所述溶剂可选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或多种的混合溶剂，优选纯甲醇或甲醇与二氯甲烷混合溶剂，其中加氢还原可在raney-ni存在下进行，也可采用其它常见的加氢还原方法。优选地，化合物i-0可由如下方法制备：其中r1、r2、r3的定义如上所述，其中，化合物a和化合物b在碱性催化剂存在下室温下反应得化合物i-0，其中，反应可以在溶剂中进行，所述溶剂可选自四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺或n,n-二甲基乙酰胺；优选n,n-二甲基甲酰胺；所述碱性催化剂可以选自三乙胺、二异丙胺、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸铯；优选碳酸钾或碳酸铯。根据本发明的另一方面，提供一种药物组合物，包括上述结构式i或结构式ii所示的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。此外，所述组合物还可进一步地包含药学上可接受的辅料，例如稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、香味剂、缓冲剂等。根据本发明的另一方面，提供了所述结构式i或结构式ii所示的化合物或其药学上可接受的盐或者所述药物组合物用于制备用于预防或治疗炎症、免疫疾病或恶性肿瘤的药物的用途。根据本发明的另一方面，提供了一种预防或治疗炎症、免疫失调疾病或恶性肿瘤的方法，包括向有此需要的受试者施用所述结构式i或结构式ii所示的化合物或其药学上可接受的盐或者所述药物组合物。在所述用途和方法中，所述结构式i或结构式ii所示的化合物或其药学上可接受的盐或者所述药物组合物作为布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂。所述的炎症疾病包括急性炎症疾病，慢炎症疾病，例如，急性炎症疾病包括急性肺损伤、过敏、哮喘，慢性炎症疾病包括风湿、类风湿性关节炎、特异性皮炎、湿疹、银屑病、痛风性关节炎、银屑病关节炎、过敏性鼻炎。所述免疫失调疾病选自系统性红斑狼疮，荨麻疹，恶性贫血，自身免疫性甲状腺炎，自身免疫性胃炎，自身免疫性阿狄森氏病，自身免疫性溶血性贫血。所述恶性肿瘤包括实体瘤和血液肿瘤。根据本发明的另一方面，提供了所述结构式i或结构式ii所示的化合物或其药学上可接受的盐或者所述药物组合物用于制备btk抑制剂的用途。附图说明图1为实施例5中制备的化合物5与olmutinib的激酶筛选结果(200nm)。具体实施方式以下通过实施例来示例性说明本发明的实施方案，这些实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。实施例1步骤一化合物a的合成6-溴-4-氯噻吩[3,2-d]嘧啶(24.9g,100mmol)，间硝基苯酚(13.9g,100mmol)和碳酸铯(65.2g,200mmol)溶于200毫升无水n,n-二甲基甲酰胺，室温搅拌一小时后，反应完后，体系倒入冷水中，过滤，得到化合物a(30g,86％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.72(s,1h),8.31(s,1h),8.22(d,j＝8.1hz,1h),7.99(s,1h),7.89(d,j＝8.2hz,1h),7.82(d,j＝8.2hz,1h)。步骤二化合物1-i的合成352毫克化合物a(1mmol)，212毫克碳酸钠(2mmol),321毫克4-苯氧基苯基硼酸(1.5mmol)与41毫克1,1'-双(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(ii)二氯甲烷复合物(0.05mmol)混合物置于氮气氛围中，10毫升四氢呋喃和1毫升去离子水加入，充放氮气多次，加热到80摄氏度，点板反应完成后(约八小时)，冷却至室温，5毫升水加入，过滤，固体水洗多次，四氢呋喃洗，乙醚洗，干燥后直接投下一步。步骤三化合物1-ii的合成上一步中得到的化合物溶于80毫升甲醇，雷尼镍-氢气体系室温还原过夜，过滤，得到化合物1-ii(360毫克，88％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.71(s,1h),7.72(d,j＝8.4hz,2h),7.62(s,1h),7.39(t,j＝7.7hz,2h),7.20(dt,j＝14.8,7.7hz,2h),7.09(d,j＝7.8hz,4h),6.69–6.54(m,3h),3.81(s,2h)。步骤四化合物1的合成41毫克化合物1-ii(0.1mmol)溶于10毫升四氢呋喃，16毫克碳酸氢钠溶于一毫升去离子水中，该碳酸氢钠水溶液加入到体系中。80微升丙烯酰氯溶于10毫升无水四氢呋喃，取一毫升冰浴下逐滴加入到反应中，搅拌半小时后，lc-mass检测反应进度，反应完全后，向体系中加入20毫升饱和碳酸钠水溶液和20毫升乙酸乙酯，分液，乙酸乙酯相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，乙酸乙酯和石油醚混合溶剂打浆得到化合物1，白色固体25mg，产率54％。1hnmr(400mhz,dms-d6)δ10.39(s,1h),8.70(s,1h),8.07(s,1h),7.99(d,j＝8.5hz,2h),7.78(s,1h),7.53(d,j＝8.3hz,1h),7.46(q,j＝7.6hz,3h),7.24(t,j＝7.3hz,1h),7.14(d,j＝8.3hz,4h),7.07(d,j＝8.0hz,1h),6.44(dd,j＝17.0,10.0hz,1h),6.26(d,j＝16.8hz,1h),5.83–5.73(m,1h)。实施例2化合物2-i的合成化合物a与4-(2-甲氧基乙氧基)苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物2-i直接用于下一步。化合物2-ii的合成化合物2-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物2-ii。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.70(s,1h),7.70(d,j＝7.8hz,2h),7.59(s,1h),7.23(s,1h),7.03(d,j＝7.7hz,2h),6.62(dd,j＝18.1,7.7hz,3h),4.19(s,2h),3.80(s,4h),3.48(s,3h)。化合物2的合成化合物2-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.69(s,1h),7.73(s,2h),7.71(s,1h),7.61(s,1h),7.49(s,1h),7.41(s,2h),7.04(d,j＝8.2hz,3h),6.43(d,j＝16.7hz,1h),6.23(dd,j＝16.8,10.2hz,1h),5.78(d,j＝10.2hz,1h),4.20(s,2h),3.80(s,2h),3.48(s,3h)。实施例3化合物3-i的合成化合物a与4-吗啡啉苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物3-i直接用于下一步。化合物3-ii的合成化合物3-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物3-ii。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.69(s,1h),7.69(d,j＝8.8hz,2h),7.58(s,1h),7.22(d,j＝8.0hz,1h),6.97(d,j＝8.8hz,2h),6.62(ddd,j＝17.2,7.2,1.7hz,3h),3.95–3.84(m,4h),3.80(s,2h),3.31–3.24(m,4h)。化合物3的合成化合物3-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物3。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.35(s,1h),8.64(s,1h),7.91(s,1h),7.80(d,j＝8.7hz,2h),7.76(s,1h),7.52(d,j＝8.3hz,1h),7.43(t,j＝8.1hz,1h),7.06(d,j＝8.9hz,3h),6.43(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.26(dd,j＝17.0,1.6hz,1h),5.82–5.73(m,1h),3.81–3.67(m,4h),3.29–3.20(m,4h)。实施例4化合物4-i的合成化合物a与4-甲基哌嗪苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物4-i直接用于下一步。化合物4-ii的合成化合物4-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物4-ii。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.68(s,1h),7.67(d,j＝8.8hz,2h),7.56(s,1h),7.22(t,j＝8.0hz,1h),6.97(d,j＝8.8hz,2h),6.70–6.52(m,3h),3.80(s,2h),3.45–3.30(m,4h),2.66–2.56(m,4h),2.39(s,3h)。化合物4的合成化合物4-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物4。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.34(s,1h),8.65(s,1h),7.91(s,1h),7.78(dd,j＝9.1,5.4hz,3h),7.53(d,j＝8.1hz,1h),7.44(t,j＝8.1hz,1h),7.05(d,j＝8.8hz,3h),6.44(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.27(dd,j＝17.0,1.8hz,1h),5.78(dd,j＝10.1,1.8hz,1h),3.30(dd,j＝12.6,7.9hz,6h),2.56–2.37(m,8h),2.23(s,3h)。实施例5化合物5-i的合成化合物a与4-甲磺酰基苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物5-i直接用于下一步。化合物5-ii的合成化合物5-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物5-ii。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.74(s,1h),8.28(d,j＝13.9hz,1h),8.21(d,j＝7.9hz,2h),8.07(d,j＝7.9hz,2h),7.10(t,j＝7.9hz,1h),6.56–6.39(m,3h),5.35(s,2h),3.30(s,3h)。化合物5的合成化合物5-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物5。1hnmr(400mhz,dmso-d6))δ10.36(s,1h),8.76(s,1h),8.35(s,1h),8.26(d,j＝8.4hz,2h),8.09(d,j＝8.4hz,2h),7.81(d,j＝1.8hz,1h),7.53(d,j＝8.4hz,1h),7.46(t,j＝8.1hz,1h),7.09(dd,j＝7.9,1.5hz,1h),6.44(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.27(dd,j＝17.0,1.8hz,1h),5.82–5.74(m,1h),3.31(s,3h)。实施例6化合物6-i的合成化合物a与3,5-二甲氧基苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物6-i直接用于下一步。化合物6-ii的合成化合物6-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物6-ii。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(s,1h),8.15(s,1h),7.10(t,j＝8.0hz,1h),7.05(d,j＝2.2hz,2h),6.65(t,j＝2.1hz,1h),6.52(dd,j＝8.1,1.3hz,1h),6.46(t,j＝2.1hz,1h),6.41(dd,j＝7.8,1.8hz,1h),5.34(s,2h),3.85(s,6h)。化合物6的合成化合物6-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物6。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.35(s,1h),8.72(s,1h),8.25–8.12(m,1h),7.79(s,1h),7.53(d,j＝8.5hz,1h),7.45(t,j＝8.1hz,1h),7.11–7.01(m,3h),6.66(s,1h),6.44(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.27(dd,j＝17.0,1.9hz,1h),5.82–5.75(m,1h),3.86(s,6h)。实施例7化合物7-i的合成化合物a与2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物7-i直接用于下一步。化合物7-ii的合成化合物7-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物7-ii。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.77(s,1h),7.43(s,1h),7.27–7.22(m,1h),6.70(s,1h),6.68–6.64(m,1h),6.61(dt,j＝4.4,1.7hz,2h),3.99(s,6h)。化合物7的合成化合物7-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物7。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.35(s,1h),8.77(s,1h),7.79(s,1h),7.70(s,1h),7.54(d,j＝8.8hz,1h),7.45(t,j＝8.1hz,1h),7.14–7.08(m,2h),6.44(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.27(dd,j＝17.0,1.9hz,1h),5.78(dd,j＝10.1,1.9hz,1h),4.00(s,6h)。实施例8化合物8-i的合成化合物a与对甲酸甲酯苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物8-i直接用于下一步。化合物8-ii的合成化合物8-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物8-ii。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.73(s,1h),8.24(s,1h),8.08(s,4h),7.11(s,1h),6.73–6.20(m,3h),5.35(s,2h),3.90(s,3h)。化合物8的合成化合物8-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物8。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.36(s,1h),8.74(s,1h),8.28(s,1h),8.10(q,j＝8.6hz,4h),7.80(t,j＝1.9hz,1h),7.53(d,j＝8.7hz,1h),7.45(t,j＝8.1hz,1h),7.08(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),6.44(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.27(dd,j＝17.0,1.9hz,1h),5.78(dd,j＝10.1,1.9hz,1h),3.90(s,3h)。实施例9化合物9-i的合成化合物a与4-苯基苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物9-i直接用于下一步。化合物9-ii的合成化合物9-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物9-ii。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.65(s,1h),7.77(d,j＝5.5hz,2h),7.65(s,3h),7.57(d,j＝4.8hz,2h),7.40(s,2h),7.33(d,j＝4.9hz,1h),7.17(d,j＝7.0hz,1h),6.54(d,j＝15.9hz,3h),3.74(s,2h)。化合物9的合成化合物9-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物9。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.35(s,1h),8.72(s,1h),8.20(s,1h),8.07(d,j＝8.3hz,2h),7.87(d,j＝8.3hz,2h),7.82–7.77(m,2h),7.77(s,1h),7.56–7.52(m,2h),7.49(d,j＝9.8hz,1h),7.47–7.38(m,2h),7.09(dd,j＝8.0,1.3hz,1h),6.44(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.27(dd,j＝17.0,1.7hz,1h),5.81–5.74(m,1h)。实施例10化合物10-i的合成化合物a与4-甲氧基苯硼酸为原料，按照实施例1中步骤二的方法得到化合物10-i直接用于下一步。化合物10-ii的合成化合物10-i为原料按照实施例1中步骤三的方法得到化合物10-ii。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.70(s,1h),7.71(d,j＝8.3hz,2h),7.59(s,1h),7.23(t,j＝8.0hz,1h),7.00(d,j＝8.3hz,2h),6.62(dd,j＝18.7,8.2hz,3h),3.88(s,3h),3.82(s,2h)。化合物10的合成化合物10-ii为原料，按照实施例1中步骤四的方法得到化合物10。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.43(s,1h),7.99(s,1h),7.90(d,j＝8.7hz,2h),7.77(s,1h),7.54(d,j＝8.5hz,1h),7.43(t,j＝8.1hz,1h),7.10(d,j＝8.7hz,2h),7.05(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),6.46(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.26(dd,j＝17.0,1.7hz,1h),5.78–5.71(m,1h),3.84(s,3h)。本发明的结构式i和ii化合物已证明的分子机制为抑制btk激酶。药理活性试验证明，本发明的结构式i和结构式ii化合物能够有效地抑制lps诱导的b细胞活化增殖，且毒性小，激酶选择性高，进而可以应用于发展成为治疗或控制炎症，免疫系统疾病和恶性肿瘤的药物。如治疗或控制：急性肺损伤，过敏，哮喘，风湿，类风湿性关节炎，特异性皮炎，湿疹，银屑病，痛风性关节炎，银屑病关节炎，过敏性鼻炎，系统性红斑狼疮，荨麻疹，恶性贫血，自身免疫性甲状腺炎，自身免疫性胃炎，自身免疫性阿狄森氏病，自身免疫性溶血性贫血，b细胞异常增殖相关的肿瘤等。以下是本发明部分化合物的药理活性测试方法及结果：一.采用htrfkineasetkkit检测化合物对btk的抑制活性方法：a)首先配制2.5％的dmso溶液，然后用酶对应的2.5％的dmso溶液稀释待测化合物至筛选浓度。除对照孔外，向所用反应孔中加入4微升的稀释好的待测化合物溶液，向对照孔中加入4微升先前配制的2.5％的dmso溶液。b)向所有反应孔中加入2微升先前配制好的tk-biotinsubstrate溶液c)向除阴性孔外的所有反应孔中加入2微升先前配制好的酶溶液，阴性孔用2微升酶对应激酶缓冲补足体积。用封板膜封板，混匀后室温孵育10分钟，让化合物和酶充分作用结合。d)向所有反应孔中加入2微升的atp溶液来启动激酶反应，btk的酶反应时间为50分钟。e)在激酶反应结束前5分钟开始配制btk检测液。使用试剂盒中的检测缓冲配制1:100的检测液。f)待激酶反应结束后，向所有反应孔中加入5微升稀释好的的streptavidin-xl665，混匀后加入检测液。g)封板混匀，室温反应1h后，检测荧光信号。通过全活性孔和背景信号孔计算出每个孔的抑制率，复孔取平均值，同时用专业的画图分析软件对每个待测化合物进行半数抑制活性(ic50)的拟合。结果：见表1a:<500nmb:<5000nmc:<10000nmd:>10000nm表1实施例中制备的化合物对btk的抑制的ic50值化合物btk激酶半抑制浓度1b2b3a4a5a6d7d8b9d10d二.通过小鼠淋巴细胞的非特异性毒性作用及增殖反应实验评价化合物的免疫抑制活性，方法如下：毒性测试：小鼠处死后，无菌取其脾脏并制备单个细胞悬液，红细胞裂解液去除红细胞，调节细胞浓度。小鼠脾脏淋巴细胞悬液1×106/孔接种于96孔板，同时加入不同浓度化合物，另设相应的溶媒对照及培养液本底对照。37℃，5％co2培养箱中培养48h。结束培养前6h加入cck-8溶液。至培养结束，于酶标仪450nm(参比650nm)处测定od值。免疫抑制活性测试：小鼠脾脏淋巴细胞悬液5×105/孔接种于96孔板，加入lps(10μg/ml)，不同浓度化合物，并设相应的无lps刺激的阴性对照孔以及无药物阳性对照孔。37℃，5％co2培养箱中培养48h。培养结束前8h，每孔加入3h-胸腺嘧啶核苷酸。继续培养至实验结束。加入闪烁液后于beta记数仪读取掺入细胞dna的3h-tdr量，以cpm值代表细胞增殖的情况。结果评定：化合物对脾脏细胞的非特异性毒性作用采用待测样品od值除以细胞对照孔od值，标记为细胞存活率(％)。淋巴细胞的增殖反应采用阳性对照样品cpm值减去被检测样品cpm值，然后除阳性对照样品cpm值，标记为增殖抑制率(％)。cc50和ic50值使用graphpadprism5软件拟合。结果见表2.表2.实施例5中制备的化合物5的脾脏淋巴细胞毒性和对b细胞的抑制活性化合物细胞毒性cc50b细胞抑制ic50553632nm282nmolmutinib(阳性参照物)1489nm300nm上述实验表明，本发明的实施例5中制备的化合物5，对lps诱导的b细胞增殖具有明显的抑制活性，其对小鼠脾脏淋巴细胞的毒性小，给药窗口大，安全性较高。三.通过caliper法评价化合物的激酶选择性图1示出了实施例5中制备的化合物5与olmutinib(空白图标表示化合物5，黑色图标表示olmutinib)的激酶筛选结果(200nm)。不可逆的btk抑制剂通过与btk激酶atp结合域的半胱氨酸口袋结合产生活性，因为半胱氨酸在某些酶的atp结合域相似位置也存在，所以btk抑制剂大部分具有多重激酶抑制作用，这带来了副作用增加的风险。实验结果表明，本发明中的实施例5中的化合物5在200纳摩尔的浓度下对除btk，blk外的被测激酶均无明显抑制作用，对在酶的atp结合域相似位置含有半胱氨酸egfr/jak1/jak2/jak3/itk激酶的抑制活性丧失，表现出了较高的激酶选择性，从而减少副作用的产生。当前第1页12