检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合及其检测试剂盒与应用的制作方法

文档序号:12698034阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合,其特征在于,所述核酸组合包括检测引物组合;所述检测引物组合包括第1-14引物对,所述第1-14引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-28所示。

2.根据权利要求1所述的核酸组合,其特征在于,还包括检测探针,所述检测探针包括第1-14检测探针、阳性对照探针和阴性对照探针,所述第1-14检测探针的碱基序列分别如SEQ ID No.29-42所示,所述阳性对照探针的碱基序列如SEQ ID No.43所示,所述阴性对照探针的碱基序列如SEQ ID No.44所示;所述检测探针的5’端带有作为吸附剂的amino linker C6。

3.如权利要求1或2所述的核酸组合在制备致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒中的应用。

4.一种致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包括如权利要求1或2所述的核酸组合,所述检测引物组合的各引物对中的正向引物的5’端或反向引物的5’端带有生物素标记。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒还包括膜芯片、配液和PCR反应组分中至少一种。

6.根据权利要求5所述的检测试剂盒,其特征在于,所述膜芯片包括支持膜和依次负载于所述支持膜的所述检测探针;所述支持膜包括硝酸纤维素膜、尼龙膜或具有三维孔径结构的薄膜中的一种。

7.根据权利要求5所述的检测试剂盒,其特征在于,所述配液包括去活化液、去活化清洗液、杂交液、杂交清洗液、酶标液、酶标清洗液1、酶标清洗液2、显色液和显色清洗液中至少一种。

8.根据权利要求7所述的检测试剂盒,其特征在于,所述去活化液包括100mmol/L的NaOH;所述去活化清洗液包括2×SSPE和0.1%SDS;所述杂交液包括2×SSPE和0.1%SDS;所述杂交清洗液包括2×SSPE和0.5%SDS;所述酶标液包括2×SSPE和0.5%SDS,所述酶标清洗液1包括2×SSPE和0.5%SDS;所述酶标清洗液2包括1M Tris-HCl,pH9.5,5M NaCl,1M MgCl2

9.根据权利要求5所述的检测试剂盒,其特征在于,所述PCR反应组分包括UNG酶、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+和PCR缓冲液中的至少一种。

10.如权利要求7所述的检测试剂盒在致泻性大肠埃希氏菌检测分型中的应用。

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