本发明涉及通式i和ii所示的吡嗪类衍生物，其可药用盐，及其制备方法，含有一个或多个这化合物的组合物，和该类化合物在治疗与线粒体功能失常有关的疾病如代谢综合征、神经退行性疾病、衰老、缺血再灌注、癌症等疾病治疗方面的用途。
背景技术
线粒体是人体细胞最重要的细胞器之一，其基质内含有三羧酸循环所需的全部酶类，内膜上具有呼吸链酶系及atp酶复合体。线粒体是细胞内氧化磷酸化和形成atp的主要场所，有细胞“动力工厂”之称。
研究认为，电子传递释放的能量形成跨线粒体内膜的质子梯度(h+梯度)，这种梯度驱动atp的合成，解释了氧化与磷酸化的关联。首先，电子传递链各组分在线粒体内膜中的分布不对称。当高能电子沿呼吸链传递时，所释放的能量将h+从线粒体基质侧泵至膜间隙。由于线粒体内膜本身对h+不通透，致使线粒体内膜两侧的h+浓度差的形成，即电位差，从而推动h+穿过atp合成酶返回基质，形成atp并将电化学梯度蕴藏的能量转移至atp中，即氧化与磷酸化的关联。
线粒体膜电位能够最直接地衡量线粒体的能量状态及其功能，与线粒体内钙离子摄取、atp生成、代谢物及蛋白质转运和线粒体内活性氧生成相关。解偶联剂正是针对线粒体膜电位的一种氧化磷酸化抑制剂，它以质子化的形式将膜间隙中的h+带回线粒体并释放到基质中，从而消除了线粒体内膜两侧的h+浓度梯度，使atp合成酶丧失质子驱动力，氧化可以发生，而磷酸化不能进行，因而无atp生成。解偶联剂并不抑制呼吸链的电子传递，甚至还加速电子传递，促进糖、脂肪和蛋白质的消耗，并刺激线粒体耗氧，但不形成atp，电子传递过程中释放的自由能以热量的形式散失。
随着线粒体解偶联剂研究的深入，以解偶联作用为靶标的多种疾病治疗药物的研究也被广泛开展，诸如代谢综合征、神经退行性疾病、衰老、缺血再灌注、癌症等疾病治疗药物的发现。在基础代谢速率的基础上继续增加线粒体的解偶联可能是很好的治疗肥胖的策略。增加线粒体的解偶联很可能是通过增加脂肪酸氧化和胞内能量消耗来增加肌肉中的胰岛素敏感性，使得胞内的甘油二脂含量降低。解偶联剂在一定的安全剂量下，可用于治疗肥胖相关的代谢综合征。
2型糖尿病往往与肥胖和血脂紊乱同行，故目前有学者称之为“糖脂病”。2型糖尿病主要的死亡原因源自心血管病，而后者往往并非高血糖的直接结果而是与胰岛素抵抗及其经常伴随的多种代谢紊乱有密切联系。基于线粒体解偶联开发具有新型作用机制的抗糖尿病药物是改善糖尿病治疗研究中的优先选择。
线粒体解偶联剂对神经退行性疾病同样有改善作用。线粒体呼吸功能的障碍是许多神经退行性疾病发病早期共识的病理现象，探索线粒体在疾病发生过程中的变化，对研究ad等神经退行性疾病的发病机理，甚至设计和开发创新药物都具有重要的指导意义。经研究证明，羊毛甾醇可以诱导线粒体温和解偶联，起到神经保护的作用。
解偶联蛋白ucp2的缺失与寿命相关。研究发现，ucp2缺失的小鼠较ucp2正常的小鼠寿命明显缩短。用低浓度的解偶联剂2，4-二硝基苯酚(dnp)(1mg/l于饮用水中)饲喂雌性swiss小鼠，结果发现小鼠体重有明显降低，脑、肝脏和心脏组织耗氧速率增加，生物活性氧(ros)生成减少，蛋白质和dna氧化减少，血浆中葡萄糖、甘油三酯和胰岛素含量明显降低，小鼠寿命较对照组有明显延长。
线粒体膜电位的降低可减少活性氧的产生，利用药物使线粒体氧化磷酸化短暂解偶联可引起线粒体膜电位一定程度的去极化，进而降低活性氧的生成，可对缺血-再灌注起到保护作用。另外，在使用解偶联剂dnp对癌细胞进行氧化磷酸化试验时发现：可以通过解偶联剂控制癌细胞的葡萄糖吸收和atp产生，达到治疗癌症的目的。
虽然线粒体解偶联剂可能能够改善和治疗多种疾病，但线粒体强解偶联剂如果口服剂量控制不当，会使机体产生高热致死。早年作为减肥药物上市的dnp尽管有很好的减肥效果却因此退出临床。因此，线粒体强解偶联剂的缓释和限量的研究，特别是线粒体温和解偶联剂的发现成为该领域的研究热点。温和解偶联剂能够使线粒体膜电位适度降低，这对于细胞是有益的，尤其在一些病理条件下，包括肥胖、甲状腺机能减退、衰老和某些类型的癌症，这表明温和解偶联剂(质子载体)可发展成为治疗相关疾病的候选药物。前两种疾病的治疗效果是由于解偶联剂促进了线粒体呼吸，减少了atp的生成；而对于衰老，可能是因为降低了活性氧的生成。癌症方面，诱导细胞凋亡的因子与解偶联剂引起的膜电位降低密不可分。线粒体膜电位很小程度的降低即可很大程度地降低ros的产生，而不会显著阻碍atp的合成，所以温和的解偶联剂可以作为治疗ros引起的组织损伤的候选药物。值得注意的是，解偶联必须是温和的，不能明显影响到atp的生成，也不会导致体温过度升高，不会对正常的生命活动造成不良影响等。但目前对于这类生物活性的化学结构还需要进一步寻找和发现。
技术实现要素：
本发明提供了一种具有线粒体解偶联活性的结构通式i和ii所示的吡嗪类衍生物:
本发明的目的在于提供一种具有线粒体解偶联活性的新型吡嗪类衍生物，其可药用盐，其溶剂化物，其前药，其多晶或共晶。
本发明的另一目的在于提供一种制备吡嗪类衍生物的方法。
本发明的再一目的在于提供一种含有一个或多个这种化合物的药物组合物。
本发明的又一目的是提供具有线粒体解偶联活性的化合物，和该类化合物在治疗与线粒体功能失常有关的疾病如代谢综合征、神经退行性疾病、衰老、缺血再灌注、癌症等疾病方面的用途。
本发明是涉及具有下列通式i和ii所示的吡嗪类衍生物:
式中::r1和r2分别独立选自：单取代或多取代的芳环基、单取代或多取代的苄基、单取代或多取代的c1-8烷基、单取代或多取代的c3-8环烷基，多取代时取代基可以相同或不同，取代基选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、甲磺酰基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙酰氨基、羟基、乙酰氧基、三氟甲氧基、羧基、乙炔基、c1-6烯基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-8环烷基；
在通式i和ii所示的吡嗪类衍生物优选的实施例中：
r1和r2分别独立选自：单取代或多取代的苯基、单取代或多取代的苄基、单取代或多取代的c1-6烷基、单取代或多取代的c3-6环烷基，多取代时取代基可以相同或不同，取代基选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、甲磺酰基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙酰氨基、羟基、乙酰氧基、三氟甲氧基、羧基、乙炔基、乙烯基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-6环烷基；
在通式i和ii所示的吡嗪类衍生物更优选的实施例中：
r1和r2分别选自：单取代或多取代的苯基、单取代或多取代的苄基、单取代或多取代的c1-6烷基、单取代或多取代的c3-6环烷基，多取代时取代基可以相同或不同，取代基选自氢、氟、氯、溴、三氟甲基、氰基、硝基、甲磺酰基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙酰氨基、羟基、乙酰氧基、三氟甲氧基、羧基、乙炔基、乙烯基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、环丙基、环丁基、环戊基；
在通式i和ii所示的吡嗪类衍生物特优选的实施例中：
单取代或双取代的苯基、单取代或双取代的苄基、单取代或多取代的c1-6烷基、单取代或双取代的c3-6环烷基，多取代时取代基可以相同或不同，取代基选自氢、氟、氯、溴、三氟甲基、氰基、硝基、甲磺酰基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基、乙酰氧基、三氟甲氧基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、环丙基；
在通式i和ii所示的吡嗪类衍生物最优选的实施例中：
r1和r2分别选自：单取代或双取代的苯基、单取代或双取代的苄基、单取代或双取代的c1-6烷基、单取代的c3-6环烷基，多取代时取代基可以相同或不同，取代基选自氢、氟、氯、溴、三氟甲基、氰基、硝基、甲磺酰基、氨基、二甲氨基、羟基、乙酰氧基、三氟甲氧基、羧基、甲基、甲氧基，乙氧基、环丙基；
另外，上述反应中的起始原料及中间体容易得到，各步反应可依据已报道的文献或对本领域熟练技术人员来说可以用有机合成中的常规方法很容易合成。通式i和ii所述化合物可以溶剂化物或非溶剂化物的形式存在，利用不同的溶剂进行结晶可能得到不同的溶剂化物。通式i和ii所述药学上可接受的盐包括不同酸加成盐，如下列无机酸或有机酸的酸加成盐：盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸，甲磺酸，对甲苯磺酸，三氟乙酸，枸杞酸，马来酸，酒石酸，富马酸，柠檬酸，乳酸。通式i所述药学上可接受的盐还包括不同碱金属盐(锂，钠，钾盐)，碱土金属盐(钙，镁盐)及铵盐，和能提供生理上可接受的阳离子的有机碱的盐，如甲胺，二甲胺，三甲胺，哌啶，吗啉及三(2－羟乙基)胺的盐。在本发明范围内的所有这些盐都可采用常规方法制备。在所述的通式i和ii化合物及其溶剂化物和其盐的制备过程中，不同结晶条件可能出现多晶或共晶。
本发明还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、ph调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；ph调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/kg体重，优选为0.01-100mg/kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
具体实施方式
以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。
测定仪器：核磁共振光谱用varianmercury400型核磁共振仪。质谱仪为agilenttechnologieslc/mstof或thermoexactiveplus-orbitrap。
实施例1：5,6-二(4-三氟甲氧基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入4-三氟甲氧基苯胺(133μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入三乙胺(277μl,2mmol)，在50℃下反应17小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到橙色固体67mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.95(s,2h,nh),7.80(d,j＝8.8hz,4h,arh),7.46(d,j＝8.8hz,4h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+481.
实施例2：5,6-二(4-氟苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中4-氟苯胺(142μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应22小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体28mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.92(s,2h,nh),6.94(dd,j＝9.0,5.0hz,4h,arh),6.57(t,j＝9.0hz,4h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+349.
实施例3：5,6-二(4-氯苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入4-氯苯胺(191mg,1.5mmol)，室温下搅拌后加入三乙胺(277μl,2mmol)，在50℃下反应21小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体93mg，收率为48.9％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.67(s,2h,nh),7.75–7.57(m,4h,arh),7.56–7.37(m,4h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+381.
实施例4：5,6-二(4-溴苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入4-溴苯胺(258mg,1.5mmol)，室温下搅拌后加入三乙胺(277μl,2mmol)，在50℃下反应21小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到橙色固体77mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.66(s,2h,nh),7.59(s,8h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+468.
实施例5：5,6-二(2-氟苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入2-氟苯胺(144μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应24小时，经tlc和lc-ms检测未反应完全，升高温度至60℃，反应24小时，反应变化不大，停止反应，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体18mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.61(s,2h,nh),7.61(s,2h,arh),7.45–7.14(m,6h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+349.
实施例6：5,6-二(4-硝基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(150mg,0.75mmol)溶于3ml无水四氢呋喃，搅拌下加入4-硝基苯胺(221mg,1.6mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(0.225ml,1.6mmol)，在50℃下过夜反应，经tlc检测原料反应完全后，用乙酸乙酯和水萃取三次，用饱和氯化钠水溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，在乙醚中超声，过滤，得到黄色固体7mg，在210℃分解。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.56(s,2h,nh-),8.33(d,j＝8.7hz,4h,arh),7.93(d,j＝8.4hz,4h,arh).
实施例7：5,6-二(4-乙氧基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入4-乙氧基苯胺(194μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应96小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体128mg，收率为60.4％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.44(s,2h,nh),7.69–7.26(m,4h,arh),7.24–6.82(m,4h,arh),4.01(t,j＝6.8hz,4h,ch2),1.30(t,j＝7.0hz,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+401.
实施例8：5,6-二(4-三氟甲基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，，搅拌中4-三氟甲基苯胺(189μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应22小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体14mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.55(s,1h,nh),10.38(s,1h,nh),8.12–7.90(m,4h,arh),7.72(dd,j＝17.7,8.8hz,4h,arh).
实施例9：5,6-二[4-(n,n-二甲氨基)苯基]氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(150mg,0.75mmol)溶于3ml无水四氢呋喃，搅拌下加入4-氨基-n,n-二甲基苯胺(217mg,1.6mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(0.225ml,1.6mmol)，在50℃下过夜反应，经tlc检测原料反应完全后，用乙酸乙酯和水萃取三次，用饱和氯化钠水溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，在乙醚中超声，过滤，得到黄色固体7mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.03(s,2h,nh-),7.34(d,j＝8.4hz,4h,arh),6.77(d,j＝8.4hz,4h,arh),2.92(s,12h,nch3).
实施例10：5,6-二(4-氨酰甲基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(150mg,0.75mmol)溶于3ml无水四氢呋喃，搅拌下加入4-氨酰基苯胺胺(240mg,1.6mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(0.225ml,1.6mmol)，在50℃下过夜反应，经tlc检测原料反应完全后，用乙酸乙酯和水萃取三次，用饱和氯化钠水溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，在乙醚中超声，过滤，得到黄色固体7mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.16(s,2h,nh),10.04(s,2h,nh),7.62(d,j＝9.1hz,4h,arh),7.46(d,j＝10.8hz,4h,arh),2.05(s,6h,ch3).
实施例11：5,6-二(4-羟基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(100mg,0.5mmol)溶于3ml无水四氢呋喃，搅拌下加入4-氨基苯酚(114mg,1.05mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(0.146ml,1.05mmol)，在50℃下过夜反应，经tlc检测原料反应完全后，用乙酸乙酯和水萃取三次，用饱和氯化钠水溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，在乙醚中超声，过滤，得到黄色固体8mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.42(s,2h,oh),9.32(s,2h,nh),7.35(d,j＝8.5hz,4h,arh),6.77(d,j＝8.4hz,4h,arh).
实施例12：5,6-二苯基氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入苯胺(138μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入三乙胺(277μl,2mmol)，在50℃下反应21小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体93mg，收率为59.6％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.60(s,2h,nh),7.88–7.53(m,4h,arh),7.57–7.32(m,4h,arh),7.16(tt,j＝7.8,1.2hz,2h,arh)。esi-ms(m/zpositive):[m+h]+313.
实施例13：5,6-二(4-甲基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在25ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(49mg,0.25mmol)溶于10ml四氢呋喃，搅拌中加入4-甲苯胺(56μl,0.52mmol)，室温下搅拌后加入三乙胺(70μl,0.5mmol)，在40℃下反应24小时，经tlc检测原料反应未完全，加热至50℃，继续反应27小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体47mg，收率为55.3％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.51(s,2h,nh),7.48(d,j＝8.4hz,4h,arh),7.21(d,j＝8.2hz,4h,arh),2.28(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+341.
实施例14：5,6-二(3-甲苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入4-氯苯胺(160μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体36mg，收率为21.2％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.52(s,2h,nh),7.46(d,j＝8.0hz,2h,arh),7.38(s,2h,arh),7.29(t,j＝7.8hz,2h,arh),6.98(d,j＝7.6hz,2h,arh),2.31(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+341.
实施例15：5,6-二(2,4-二甲基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入2,4-二甲基苯胺(182μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应24小时，经tlc检测原料反应未完全，蒸干溶剂，加入20ml甲苯，80℃反应48小时，经tlc检测反应完全，浓缩溶剂，加入加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体36mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.75(s,2h,nh),7.08(s,4h,arh),7.01(d,j＝9.1hz,2h,arh),2.26(s,6h,ch3),2.06(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+369.
实施例16：5-(2,4-二甲基苯基)氨基-6-(4-甲基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
5-(4-三氟甲氧基苯基)氨基-6-氯-2,3-二氰基吡嗪：
在25ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(49mg,0.25mmol)溶于10ml四氢呋喃，搅拌中加入4-三氟甲氧基苯胺(23μl,0.26mmol)，室温下搅拌后加入三乙胺(70μl,0.5mmol)，在50℃下反应2.5小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体77mg，收率为90.7％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.28(s,1h,nh),7.67(d,j＝9.8hz,2h,arh),7.43(d,j＝8.4hz,2h,arh).
5-(2,4-二甲基苯基)氨基-6-(4-甲基苯基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5-(2,4-二甲基苯基)氨基-6-氯-2,3-二氰基吡嗪(106mg,0.3mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入4-甲基苯胺(66μl,0.6mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(166mg1.2mmol)，在50℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体25mg，收率为20.3％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.67(s,1h,nh),9.56(s,1h,nh),7.74(d,j＝9.4hz,2h,arh),7.54–7.45(m,2h,arh),7.42(d,j＝8.4hz,2h,arh),7.22(s,2h,arh),2.28(s,3h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+411.
实施例17：5,6-二环丙基氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中加入环丙胺(68μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体46mg，收率为38.3％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.67(s,2h,nh),2.79(tq,j＝7.1,4.0hz,2h,ch),1.00–0.61(m,4h,ch2),0.66–0.39(m,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+241.
实施例18：5,6-二环己基氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml无水甲苯，搅拌中加入环己胺(136μl,1.2mmol)，依次加入碳酸钾(207mg,1.5mmol)，pd2(dba)3(14mg,0.025mmol)、x-phos(24mg,0.05mmol)，氩气保护，在80℃下反应24小时，经tlc检测原料反应完全，硅藻土过滤，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体50mg，收率为30.9％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.47(d,j＝7.0hz,2h,nh),3.81(dtt,j＝10.8,7.0,3.8hz,2h,n-ch),2.01–1.83(m,4h,ch2),1.82–1.66(m,4h,ch2),1.59(d,j＝12.6hz,2h,ch2),1.38–1.06(m,10h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+325.
实施例19：5,6-二环丙基甲基氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(198mg,1mmol)溶于20ml无水甲苯，搅拌中加入环己基甲基胺(198μl,2.2mmol)，依次加入碳酸钾(414mg,3mmol)，pd2(dba)3(28mg,0.05mmol)、x-phos(48mg,0.1mmol)，氩气保护，在80℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，硅藻土过滤，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体115mg，收率为42.9％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.89(s,2h,nh),3.24–3.17(m,4h,ch2),1.13–0.98(m,2h,ch),0.49(d,j＝8.4hz,4h,ch2),0.24(d,j＝5.2hz,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+269.
实施例20：5,6-二苄氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(50mg，0.25mmol)溶于3ml无水四氢呋喃，搅拌下加入苄胺(0.06ml，0.51mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(0.073ml，0.52mmol)，在50℃下过夜反应，经tlc检测原料反应完全后，用乙酸乙酯和水萃取三次，用饱和氯化钠水溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，在乙醚中超声，过滤，得到淡黄色固体20mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.22(s,2h,nh-),7.36(s,8h,arh),7.31(s,2h,arh),4.60(s,4h，-ch2).
实施例21：5,6-二(4-氟苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml无水甲苯，搅拌中加入4-氟苄胺(137μl,1.2mmol)，依次加入碳酸钾(207mg,1.5mmol)，pd2(dba)3(14mg,0.025mmol)、x-phos(24mg,0.05mmol)，氩气保护，在80℃下反应17小时，经tlc检测原料反应完全，硅藻土过滤，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体80mg，收率为42.6％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.13(t,j＝5.2hz,2h,nh),7.41–7.32(m,4h,arh),7.19–7.11(m,4h,arh),4.54(d,j＝5.0hz,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+377.
实施例22：5,6-二(3-氟苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入3-氟苄胺(172μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应12小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体101mg，收率为53.7％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.17(s,2h,nh),7.37(d,j＝7.0hz,2h,arh),7.17(d,j＝8.2hz,4h,arh),7.14–7.04(m,2h,arh),4.60(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+377.
实施例23：5,6-二(2-氟苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入2-氟苄胺(172μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应12小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体92mg，收率为52.1％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.14(s,2h,nh),7.40(s,2h,arh),7.36(s,2h,arh),7.19(t,j＝9.6hz,4h,arh),4.58(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+377.
实施例24：5,6-二(2,4-二氟苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml无水甲苯，搅拌中加入2,4-二氟苄胺(143μl,1.2mmol)，依次加入碳酸钾(207mg,1.5mmol)，pd2(dba)3(14mg,0.025mmol)、x-phos(24mg,0.05mmol)，氩气保护，在80℃下反应36小时，经tlc检测原料反应完全，硅藻土过滤，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体69mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.10(t,j＝5.0hz,2h,nh),7.45(2h,arh),7.24(2h,arh),7.05(arh),4.55(d,j＝4.8hz,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+413.
实施例25：5,6-二(吡啶-3-甲基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于10ml四氢呋喃和10ml二氯甲烷的混合溶液，搅拌中3-甲基氨基吡啶(153μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应22小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到橙色固体106mg，收率为62.0％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.56(s,2h,nh),8.46(s,2h,arh),8.16(s,2h,arh),7.74(s,2h,arh),7.35(s,2h,arh),4.68(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+343.
实施例26：5,6-二(4-氰基苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中4-氰基苄胺(198mg,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg,2mmol)，在50℃下反应12小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体154mg，收率为79.0％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.27(s,2h,nh),8.04–7.67(m,4h,arh),7.52(d,j＝8.4hz,4h,arh),4.68(d,j＝4.0hz,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+391.
实施例27：5,6-二(4-氯苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入4-氯苄胺(183μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应13小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体123mg，收率为60.3％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.16(t,j＝5.2hz,2h,nh),7.81–7.06(m,8h,arh),4.56(d,j＝5.0hz,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+409.
实施例28：5,6-二(4-溴苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入4-溴苄胺(189μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应12小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体93mg，收率为37.3％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(s,2h,nh),7.51(s,4h,arh),7.29(s,4h,arh),4.54(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+496.
实施例29：5,6-二(4-甲氧基苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入4-甲氧基苄胺(196μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体184mg，收率为92.0％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.07(t,j＝5.0hz,2h,nh),7.32–7.13(m,4h,arh),6.98–6.76(m,4h,arh),4.46(4h,arh,ch2),3.69(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+401.
实施例30：5,6-二(3-甲基苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入3-甲基苄胺(188μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应20小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体103mg，收率为56.0％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.12(s,2h,nh),7.20(t,j＝5.6hz,2h,arh),7.14(s,2h,arh),7.11(s,2h,arh),7.07(d,j＝9.0hz,2h,arh),4.52(s,4h,ch2),2.26(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+369.
实施例31：5,6-二(2-甲基苄基)氨基-2,3-二氰基吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-2,3-二氰基吡嗪(99mg,0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入2-甲基苄胺(186μl,1.5mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(276mg2mmol)，在50℃下反应20小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体102mg，收率为55.4％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.03(s,2h,nh),7.27–7.22(m,2h,arh),7.17(s,4h,arh),7.14(d,j＝6.4hz,2h,arh),4.51(s,4h,ch2),2.26(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+369.
实施例32：5,6-二(4-氟苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
2,3,5,6-四氯吡嗪：
在500ml圆底烧瓶中加入三氯氧磷200ml，然后加入五氯化磷(145.6g,700mmol)，搅拌，出现浅黄色浑浊，加入甘氨酸酐(11.4g,100mmol)，加热到60℃反应48h。通过蒸馏除去多于的三氯氧磷和五氯化磷，在150℃时有三氯氧磷蒸馏出，220℃时有五氯化磷升华到冷凝管中，继续加热至不再有蒸馏物后停止加热，放置至室温，将产物敞口放置过夜(以利于残余的五氯化磷升华出来)，得到无色透明油状物，慢慢滴加到冰水中，用石油醚三次，然后柱层析得到白色固体7525mg，收率为35.0％。
5,6-二氯-2,3-二胺吡嗪：
在100ml玻璃封管中加入2,3,5,6-四氯吡嗪(2g,9.6mmol)，加入浓氨水40ml，搅拌，加热到120℃，反应14h，经tlc检测原料反应完全，用乙酸乙酯萃取3次，用饱和氯化钠水溶液洗，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体535mg，收率32.4％。esi(m/z):178[m+h]+。
5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪：
在100ml圆底烧瓶中，将2,3-二氯-5，6-二胺吡嗪(178mg,1mmol)溶于20ml无水甲苯，搅拌使其完全溶解，加入吡啶(321μl,4mmol)，然后加入二氯亚砜(218μl,3mmol)，80℃反应20小时，tlc检测原料反应完全，用乙酸乙酯和水萃取三次，饱和氯化钠溶液洗一次，无水硫酸钠干燥，柱层析，得到淡黄色固体150mg，收率为72.5％
5,6-二(4-氟苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪：
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(30mg,0.15mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入4-氟苯胺(32μl,0.32mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(51μl,0.32mmol)，在81℃下反应20小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体22mg，收率为41.1％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.61(s,2h,nh),7.80(d,j＝5.6hz,4h,arh),7.27(d,j＝8.8hz,4h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+357.
实施例33：5,6-双(2-氟苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(100mg,0.485mmol)溶于无水乙腈3ml，搅拌下加入2-氟苯胺(100μl,1.068mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(149μl,1.068mmol)，在81℃下反应6h，经tlc检测原料反应不完全，再加入2-氟苯胺(50μl,0.5mmol)，之后加入3滴dbu,加热到100℃反应10h，经tlc检测原料反应完全，用乙酸乙酯和水萃取三次，饱和氯化钠溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，得到不纯的黄色固体，再硅胶柱层析得到纯黄色固体9mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.62(s,2h,nh),7.66(d,j＝1.8hz,2h,arh),7.45–7.20(m,6h,arh).
实施例34：5,6-二(3-氟苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶取中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(25mg,0.12mmol)溶于3ml无水乙腈中，搅拌下加入3-氟苯胺(31μl,0.32mmol)，室温下搅拌十分钟后加入n，n-二乙基苯胺(51μl,0.32mmol)，在81℃下反应6h，经tlc检测原料反应完全，用乙酸乙酯和水萃取三次，饱和氯化钠溶液洗一次，干燥、浓缩，柱层析分离，在乙醚中超声，过滤，得到黄色固体11mg，收率为20.8％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.82(s,2h,nh),7.91(s,2h,arh),7.60(s,2h,arh),7.49(dd,j＝15.2,7.9hz,2h,arh),7.03(t,j＝7.7hz,2h,arh).
实施例35：5,6-二(2，4-二氟苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(60mg,0.29mmol)溶于3ml无水乙腈，搅拌下加入2，4-二氟苯胺(0.065ml，0.64mmol)，室温下搅拌十分钟后加入三乙胺(0.089ml，0.64mmol)，在81℃下反应6h，经tlc检测原料反应不完全，再加入2，4-二氟苯胺(30μll，0.32mmol)，之后加入3滴dbu,加热到100℃反应10h，经tlc检测原料反应完全，用乙酸乙酯和水萃取三次，饱和氯化钠溶液洗一次，干燥、浓缩，硅胶柱层析得到黄色固体5mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.58(s,2h,nh-),7.66(dd,j＝10.5,6.4hz,2h,arh),7.47(t,j＝11.2hz,2h,arh),7.21(t,j＝9.7hz,2h,arh).
实施例36：5,6-二(4-溴苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(62mg,0.3mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入4-溴苯胺(155mg,0.9mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(102μl,0.64mmol)，在50℃下反应20小时，经tlc检测原料反应未完全，70℃反应11小时，经tlc检测反应完全，浓缩溶剂，加入加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到橙黄色固体17mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.70(s,2h,nh),7.79(d,j＝8.4hz,4h,arh),7.60(d,j＝8.8hz,4h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+476.
实施例37：5,6-二(4-乙氧基苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入4-乙氧基苯胺(72μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应41小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体70mg，收率为68.6％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.46(s,1h,nh),7.68(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.98(d,j＝8.8hz,2h,arh),4.02(q,j＝7.0hz,2h,ch2),1.60–1.21(m,3h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+409.
实施例38：5,6-二苯基氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入苯胺(51μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应137小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体42mg，收率为52.5％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.60(s,2h,nh),7.80(d,j＝3.6hz,4h,arh),7.57–7.34(m,4h,arh),7.29–7.00(m,2h,arh).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+321.
实施例39：5,6-二(4-甲基苯基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(30mg,0.15mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入4-氟苯胺(34mg,0.32mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(51μl,0.32mmol)，在81℃下反应20小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到淡黄色固体24mg，收率为46.0％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.52(s,2h,nh),7.68(d,j＝8.4hz,4h,arh),7.23(d,j＝7.8hz,4h,arh),2.30(s,6h,ch3).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+349.
实施例40：5,6-二环丙基氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入环丙胺(39μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到橙黄色固体14mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.10(s,2h,nh),8.43(s,2h,ch),0.71(s,8h,ch2).
实施例41：5,6-二环己基氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(62mg,0.3mmol)溶于20ml四氢呋喃，搅拌中加入环己胺(103μl,0.9mmol)，室温下搅拌后加入碳酸钾(166mg1.2mmol)，在50℃下反应20小时，经tlc检测原料反应未完全，70℃反应11小时，经tlc检测反应完全，浓缩溶剂，加入加入150ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到黄色固体17mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.47(d,j＝7.0hz,2h,nh),3.81(2h,ch),2.01–1.83(m,4h,ch2),1.82–1.66(m,4h,ch2),1.59(d,j＝12.6hz,2h,ch2),1.38–1.06(m,10h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+333.
实施例42：5,6-二环丙基甲基氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入环丙基甲基胺(48μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到橙黄色固体27mg，收率为39.1％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70–7.95(m,2h,nh),3.30(d,j＝6.0hz,4h,ch2),1.20(dd,j＝17.0,8.5hz,2h,ch),0.43(d,j＝8.0hz,4h,ch2),0.29(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+277.
实施例43：5,6-二(4-氟苄基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入4-氟苄胺(64μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体13mg。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.24(s,2h,nh),7.41(d,j＝6.8hz,4h,arh),7.24–7.09(m,4h,arh),4.65(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+385.
实施例44：5,6-二(2-氟苄基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入2-氟苄胺(64μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体50mg，收率为52.1％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.24(s,2h,nh),7.52–7.40(m,2h,arh),7.33(s,2h,arh),7.27–7.08(m,4h,arh),4.70(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+385.
实施例45：5,6-二(4-氟苄基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入3-氟苄胺(64μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体63mg，收率为88.7％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.29(s,2h,nh),7.36(d,j＝13.2hz,2h,arh),7.23(d,j＝10.2hz,4h,arh),7.08(s,2h,arh),4.70(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+385.
实施例46：5,6-二(2,4-二氟苄基)氨基-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪
在50ml圆底烧瓶中，将5,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-b]吡嗪(52mg,0.25mmol)溶于20ml乙腈，搅拌中加入2,4-二氟苄胺(66μl,0.55mmol)，室温下搅拌后加入n,n-二乙基苯胺(88μl,0.5mmol)，在81℃下反应18小时，经tlc检测原料反应完全，浓缩溶剂，加入加入100ml乙酸乙酯，用水、饱和氯化钠水溶液各洗一次，硫酸钠干燥、浓缩，硅胶柱层析分离，得到白色固体37mg，收率为35.2％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.20(s,2h,nh),7.57–7.46(m,2h,arh),7.32–7.21(m,2h,arh),7.04(d,j＝8.9hz,2h,arh),4.65(s,4h,ch2).esi-ms(m/zpositive):[m+h]+421.
药理活性
体外活性评价：
基于jc-10线粒体膜电位荧光探针的筛选：
方法：jc-10为常用的线粒体膜电位探针，可以选择性的进入线粒体，并且由于膜电位的增加，其颜色会发生从绿色到橙色的可逆性改变。本实验中，当化合物或药物与体外培养的肝细胞孵育一段时间后，加入jc-10，分别检测绿色和橙色荧光的比值，该比值增加提示线粒体膜电位降低，即化合物具有线粒体解耦联作用。
活性结果表达方式：
分别以荧光比值(倍数)和与阳性对照药dnp的相对活性(％)表示。
线粒体解耦联剂活性筛选结果
化合物浓度(1μm)
结果分析：在本筛选体系中，阳性对照dnp(1μm)的荧光比值为1.20倍。
化合物浓度(10μm)
结果分析：在本筛选体系中，阳性对照dnp(10μm)的荧光比值为1.44倍，化合物荧光比值大于1.2倍，即相对活性大于70％的可认为阳性化合物。