血液基因组DNA提取方法与流程

本发明涉及dna提取领域，具体涉及一种血液基因组dna提取方法。

背景技术：

目前的血液基因检测实验中，常用方法是购买核酸提取试剂盒进行提取或纯化。但是整个提取过程要经过裂解液裂解→孵育→离心→有机抽提(或者过柱)→漂洗数次→晾干→溶解(或者洗脱)这样的流程，最终得到dna。整个提取过程步骤繁琐，耗材消耗量大，等待时间很长。

技术实现要素：

为解决现有技术的dna提取方法费时费力，耗材消耗量大的技术问题，本发明提供一种解决上述问题的血液基因组dna提取方法。

一种血液基因组dna提取方法，运用所述血液基因组dna提取方法需使用血液基因组dna提取试剂盒，所述血液基因组dna提取试剂盒包括以下组分：

缓冲液gb、缓冲液bd、缓冲液gdb、漂洗液pwb、洗脱缓冲液tb、蛋白酶k、吸附柱、收集管、离心管；

所述血液基因组dna提取方法包括以下步骤：

步骤1：提取200μl的血液样本；

步骤2：将200μl所述缓冲液gb和20μl所述蛋白酶k组合为预混液，将所述血液样本加入至所述预混液中，充分振荡混匀，获得第一混合液；

步骤3：所述第一混合液于56℃下放置一定时间，同时颠倒混匀，直至所述第一混合液变为清亮液体；

步骤4：将所述第一混合液于室温下放置2-5min，加入350μl所述缓冲液bd，充分颠倒混匀后瞬时离心，获得第二混合液；

步骤5：所述第二混合液加入至所述吸附柱中，所述吸附柱置入所述收集管中，于12000rpm下离心30sec，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管；

步骤6：向所述吸附柱中加入500μl所述缓冲液gdb，于12000rpm下离心30sec，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管；

步骤7：向所述吸附柱中加入600μl所述漂洗液pwb，于12000rpm下离心30sec，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管；

步骤8：向所述吸附柱中加入550μl所述漂洗液pwb，于12000rpm下离心2.5min，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，将所述吸附柱置入所述离心管中；

步骤9：打开所述吸附柱的盖子，于室温下放置2min；

步骤10：于所述吸附柱的吸附膜中间位置悬空滴加50-200μl所述洗脱缓冲液tb，室温放置2min后，于12000rpm下离心2min，于所述离心管中获得检测样本。

在本发明提供的血液基因组dna提取方法的一种较佳实施例中，所述血液基因组dna提取试剂盒还包括缓冲液gs；

所述步骤一中，当血液样本的量少于200μl时，补充所述缓冲液gs至200μl。

在本发明提供的血液基因组dna提取方法的一种较佳实施例中，所述血液基因组dna提取试剂盒还包括细胞裂解液cl；

所述步骤一中，当血液样本的量大于200μl少于1ml时，所述步骤一具体分为以下步骤：

步骤1.1：于所述血液样本中加入1-2.5倍所述血液样本体积的所述细胞裂解液cl，颠倒混匀后，于10000rpm下离心1min，吸去上层清液，留下细胞核沉淀；

步骤1.2：于所述细胞核沉淀中加入200μl所述缓冲液gs。

在本发明提供的血液基因组dna提取方法的一种较佳实施例中，所述步骤4中所述第二混合液中包含一定量的絮状沉淀；

所述步骤5中将包含所述絮状沉淀在内的所述第二混合液一并加入至所述吸附柱中。

相较于现有技术，本发明提供的所述血液基因组dna提取方法具有以下有益效果：

一、所述血液基因组dna提取方法的所述步骤2中，采用将所述血液样本滴入所述预混液中的方式，解决了每加一次所述蛋白酶k便需要更换一个枪头的问题，有效减少了枪头的消耗量，减轻了操作人员的劳动强度。

二、所述血液基因组dna提取方法的所述步骤4中，所述缓冲液bd和所述第一混合液颠倒混匀后，还进行一次瞬时离心使二者充分结合，加快了混匀时间，防止因管盖残留的液体而导致样本间的交叉污染，且所述步骤5及后续步骤中均能获得更好的分离或漂洗效果。

三、所述血液基因组dna提取方法的所述步骤8中，适当减少所述漂洗液pwb的用量，并延长离心时间，使原先需重复多次的漂洗及离心操作缩减为所述步骤7和所述步骤8二步，且不影响所述检测样本的纯度；

由于所述漂洗液pwb用量的减少，取出所述吸附柱时不会再次沾染上所述漂洗液pwb，无需单独再进行一次离心的操作，简化了操作步骤，缩短了提取操作时间，且一定程度提高了所述检测样本纯度。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。

运用所述血液基因组dna提取方法所使用的血液基因组dna提取试剂盒包括以下组分：

细胞裂解液cl、缓冲液gs、缓冲液gb、缓冲液bd、缓冲液gdb、漂洗液pwb、洗脱缓冲液tb、蛋白酶k、吸附柱、收集管、离心管。

所述血液基因组dna提取方法包括以下步骤：

步骤1：提取200μl的血液样本；

步骤2：将200μl所述缓冲液gb和20μl所述蛋白酶k组合为预混液，将所述血液样本加入至所述预混液中，充分振荡混匀，获得第一混合液；

步骤3：所述第一混合液于56℃下放置10min，同时颠倒混匀，所述第一混合液变为清亮液体；

步骤4：将所述第一混合液于室温下放置5min，加入350μl所述缓冲液bd，充分颠倒混匀后瞬时离心，获得包含一定量的絮状沉淀的第二混合液；

步骤5：所述第二混合液及所述絮状沉淀一并加入至所述吸附柱中，所述吸附柱置入所述收集管中，于12000rpm下离心30sec，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管；

步骤6：向所述吸附柱中加入500μl所述缓冲液gdb，于12000rpm下离心30sec，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管；

步骤7：向所述吸附柱中加入600μl所述漂洗液pwb，于12000rpm下离心30sec，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管；

步骤8：向所述吸附柱中加入550μl所述漂洗液pwb，于12000rpm下离心2.5min，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，将所述吸附柱置入所述离心管中；

步骤9：打开所述吸附柱的盖子，于室温下放置2min；

步骤10：于所述吸附柱的吸附膜中间位置悬空滴加200μl所述洗脱缓冲液tb，室温放置2min后，于12000rpm下离心2min，于所述离心管中获得检测样本。

相较于现有技术，本发明提供的所述血液基因组dna提取方法具有以下有益效果：

一、所述血液基因组dna提取方法的所述步骤2中，采用将所述血液样本滴入所述预混液中的方式，解决了每加一次所述蛋白酶k便需要更换一个枪头的问题，有效减少了枪头的消耗量，减轻了操作人员的劳动强度。

二、所述血液基因组dna提取方法的所述步骤4中，所述缓冲液bd和所述第一混合液颠倒混匀后，还进行一次瞬时离心使二者充分结合，加快了混匀时间，防止因管盖残留的液体而导致样本间的交叉污染，且所述步骤5及后续步骤中均能获得更好的分离或漂洗效果。

三、所述血液基因组dna提取方法的所述步骤8中，适当减少所述漂洗液pwb的用量，并延长离心时间，使原先需重复多次的漂洗及离心操作缩减为所述步骤7和所述步骤8二步，且不影响所述检测样本的纯度；

由于所述漂洗液pwb用量的减少，取出所述吸附柱时不会再次沾染上所述漂洗液pwb，无需单独再进行一次离心的操作，简化了操作步骤，缩短了提取操作时间，且一定程度提高了所述检测样本纯度。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。