本发明涉及含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物，及其在制药中的应用，属于医药技术领域。
背景技术：
藤茶，学名显齿蛇葡萄（ampelopsisgrossedentala），是葡萄科蛇葡萄属多年野生藤本植物的茎叶，具有消炎、止咳、抑菌、镇痛、消脂、抗高血压等功效。显齿蛇葡萄的主要成分为黄酮类化合物，二氢杨梅素是藤茶中含量最高的化学成分（约占40%），具有抗病毒、抗脂质过氧化、保肝、护肝等作用。
目前乙肝的抗病毒治疗药物主要有干扰素和核苷类似物，这些治疗药物主要是通过抑制病毒复制中的关键酶类而干预病毒复制过程，或者针对宿主抗病毒的不同环节而发挥抗病毒作用。这些药物虽然有一定疗效，但也存在病毒不易被完全清除、停药后反跳等不良反应，而且，核苷类似物的耐药性也逐渐增加。因此，新型抗乙肝病毒药物的研究具有重要意义。
no主要是由l-精氨酸在一氧化氮合酶（nos）的催化下产生的一种气态自由基，具有维持血管张力的恒定、调节血压稳定及脑血流、促进记忆过程、杀伤细菌病毒及肿瘤细胞等多种生物学功能。硝酸酯类化合物在医药方面主要表现在它是优良的no供体，有其产生的no可使dna碱基部分脱氨基并断裂，进一步诱导细胞凋亡。no可以作用于病毒复制的早期阶段，具有阻止病毒扩散、促进病毒的清除和宿主的恢复作用，no供体型化合物具有潜在的抗病毒活性。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物、盐，包括其立体异构体和互变异构体，其具有抗病毒的作用。
本发明的另一目的在于提供所述一种含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物、盐，包括其立体异构体和互变异构体的制备方法。
本发明的再一目的在于提供所述一种含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物、盐，包括其立体异构体和互变异构体的用途。
以下对本发明进行详细描述。
本发明提供的含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物、盐，包括其立体异构体或互变异构体，如下式所示：
式中，r1各自独立为h,酰基，甲基、烃基、取代烃基、取代酰基；r2各自独立为h,烃基、苯基、苄基、4-羟基苄基、吲哚甲基、羧甲基、咪唑甲基、羧乙基、酰胺甲基、羟甲基、羟乙基、巯甲基和酰胺乙基。r3各自独立为h、烃基，取代烃基，杂环烃基，芳环烃基。
所述的含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物具体结构实例如下：
本发明还提供了所述化合物的制备方法：
式中，r1各自独立为h,酰基，甲基、烃基、取代烃基、取代酰基；r2各自独立为h,烃基、苯基、苄基、4-羟基苄基、吲哚甲基、羧甲基、咪唑甲基、羧乙基、酰胺甲基、羟甲基、羟乙基、巯甲基和酰胺乙基。r3各自独立为h、烃基，取代烃基，杂环烃基，芳环烃基。
所述药学上可接受的盐是各种有机酸、无机酸与所述二氢杨梅素硝酸酯衍生物形成的盐。例如：盐酸、硫酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、硝酸、乙酸、草酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、甲苯磺酸等。
本发明的含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物具有抗病毒活性。
通过以下实施例进一步举例说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。
具体实施方式
实施例1
中间体（i）的制备
n2下，取200mg二氢杨梅素，溶于10ml无水吡啶溶液中，缓慢加入80ml醋酐，室温反应2h，停止反应，回收溶剂，硅胶柱层析纯化（v石油醚：v乙酸乙酯=4:1），得到7,3’,4’,5’-四乙酰基二氢杨梅素中间体（ia）。收率32.1%；ir（kbr）(cm-1):3370(o-h),1773(c=o),1636,1587,1504(芳环c=c),1201（c-o-c）。
n2下，取二氢杨梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml无水dmf溶液中，加入无水345mg(2.5mmol)k2co3，缓慢加入355mg(2.5mmol)碘甲烷，室温反应6h，停止反应，加1ml醋酸，过滤，减压蒸干，回收溶剂，硅胶柱层析纯化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到7,3’,4’,5’-四甲氧基二氢杨梅素中间体（ib）。收率27.3%；ir（kbr）(cm-1):3200-3400(o-h,宽峰),1648(c=o),1450-1600(芳环c=c)，1200（c-o-c）。
实施例2
中间体（iii）的制备
取1mmol中间体（ia）或（ib），溶于5mldmf中，加入无水1.1mmolk2co3，于0℃下加入1.1mmol（ii）（氯乙酰氯或2-氯丙酰氯），反应1h，自然升至室温，反应2h，过滤，减压蒸干，回收溶剂，硅胶柱层析纯化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到7,3’,4’,5’-四乙酰基-3-（2-氯）乙酰基二氢杨梅素中间体（iiia），收率87%;得到7,3’,4’,5’-四乙酰基-3-（2-氯）丙酰基二氢杨梅素中间体（iiib），收率85%；得到7,3’,4’,5’-四甲氧基-3-（2-氯）乙酰基二氢杨梅素中间体（iiic），收率86%。
实施例3
中间体（iv）的制备
取16mmol（l)或(d)-2-boc-氨基醇，加入醋酸60ml，甲醇20ml，搅拌溶解，缓慢滴加发烟硝酸4.8ml和醋酐1.6ml的混合液，室温反应8h，将反应液倾入450ml的冰水中，剧烈搅拌，用nahco3调ph至中性，过滤，滤饼分散在水中，过滤，水洗涤，硅胶柱层析纯化（v石油醚：v乙酸乙酯=5:1），得到固体。将上述固体加入到10ml氯化氢-乙酸乙酯饱和溶液中，搅拌反应8h，再加入nahco3溶液至ph8，分层，有机层水洗，浓缩，得到中间体（iv）。
中间体（iva）：2-氨基乙醇硝酸酯，收率60%；
中间体（ivb）：2-氨基苯丙醇硝酸酯，收率66%；
中间体（ivc）：2-氨基咪唑丙醇硝酸酯，收率61%；
中间体（ivd）：2-氨基丙醇硝酸酯，收率57%；
中间体（ive）：2-四氢吡咯甲醇硝酸酯，收率49%；
中间体（ivf）：2-氨基-3-甲基-丁醇硝酸酯，收率71%；
中间体（ivg）：2-氨基-对羟苯丙醇硝酸酯，收率64%。
实施例4
化合物（1）的制备
取564mg（1mmol)中间体（iiia）和117mg（1.1mmol)中间体（iva），溶于10mldmf中，加入165mg（1.2mmol)k2co3和1mgki，加热，40-50℃反应6h，冷却，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析纯化（v石油醚：v乙酸乙酯=4:1），得到化合物（1），收率79%。esi-ms(m/z):634[m]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.65(m,2h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),11.88(s,1h)。
实施例5
化合物（2）的制备
用215mg（1.1mmol)中间体（ivb）代替117mg（1.1mmol)中间体（iva），其它操作同实施例4，得到化合物（2），收率81%。esi-ms(m/z):724[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.79(m,2h),2.98(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),7.11(m,5h),11.88(s,1h)。
实施例6
化合物（3）的制备
用205mg（1.1mmol)中间体（ivc）代替117mg（1.1mmol)中间体（iva），其它操作同实施例4，得到化合物（3），收率71%。esi-ms(m/z):714[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.81(m,2h),2.98(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),6.81(s,1h),7.44(s,1h),11.88(s,1h),13.40(s,1h)。
实施例7
化合物（4）的制备
用132mg（1.1mmol)中间体（ivd）与579mg（1.0mmol)中间体（iiib）反应，其它操作同实施例4，得到化合物（4），收率79%。esi-ms(m/z):662[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：0.91(s,6h),2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.65(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,1h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),11.88(s,1h)。
实施例8
化合物（5）的制备
用161mg（1.1mmol)中间体（ive）与452mg（1.0mmol)中间体（iiic）反应，其它操作同实施例4，得到化合物（5），收率70%。esi-ms(m/z):562[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：1.42-1.54(m,2h),1.64-1.67(m,2h),2.20-2.30(m,2h),2.38(m,1h),3.46(m,1h),3.62(s,2h),3.71(m,1h),3.91(s,9h),3.93(s,3h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.42(s,2h),11.86(s,1h)。
实施例9
化合物（6）的制备
用163mg（1.1mmol)中间体（ivf）与452mg（1.0mmol)中间体（iiic）反应，其它操作同实施例4，得到化合物（6），收率76%。esi-ms(m/z):564[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：1.01(s,6h),2.05(m,1h),2.68(m,1h),3.61(s,2h),3.63(m,2h),3.91(s,9h),3.93(s,3h),4.41(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.42(s,2h),11.86(s,1h)。
实施例10
化合物（7）的制备
用233mg（1.1mmol)中间体（ivg）代替117mg（1.1mmol)中间体（iva）与564mg（1.0mmol)中间体（iiia）反应，其它操作同实施例4，得到化合物（7），收率81%。esi-ms(m/z):740[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.23(s,12h),2.75(m,2h),3.09(m,1h),3.56(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.00(s,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),6.68-6.95(m,4h),11.88(s,1h)。
实施例11
化合物（8）的制备
n2保护下，将1mmol的化合物（1）加入到10ml30%乙二胺的dmf溶液中，加热至40℃，反应12h，减压浓缩，硅胶层析柱纯化（淋洗剂：v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得到化合物（8），收率81%，esi-ms(m/z):466[m]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):2.65(m,2h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.88(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.91(s,1h),6.39(s,2h),8.21(s,1h),8.91(s,2h),10.81(s,1h),11.87(s,1h)。
实施例12
化合物（9）的制备
n2保护下，将1mmol的化合物（4）加入到10ml30%乙二胺的dmf溶液中，加热至40℃，反应12h，减压浓缩，硅胶层析柱纯化（淋洗剂：v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得到化合物（9），收率79%，esi-ms(m/z):494[m]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):0.91(s,6h),2.65(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,1h),4.40(d,j=11hz,1h),4.88(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.91(s,1h),6.39(s,2h),8.21(s,1h),8.91(s,2h),10.81(s,1h),11.87(s,1h)。
实施例13
化合物（1-9）盐酸盐的制备
分别将1mmol的化合物（1-9）溶于dmf溶液中，0℃下加入饱和hcl-乙酸乙酯溶液，搅拌1h，50℃反应1h，蒸除溶剂，分别得到化合物（1-9）的盐酸盐。
实施例14
含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物对乙肝病毒（hbv）dna的抑制活性
将hepg2细胞（20万个/ml）接种24孔培养板，每孔100ul，37℃,5%co2培养箱中培养24h，待细胞贴壁后，每孔给200ul药液。含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物设160,80,40ug/ml3个浓度，每浓度3孔。以等量dmso培养液代替药液为对照组，拉米夫定为阳性对照，浓度设为80ug/ml，每3天换原浓度药液，培养6天后，提取hbvdna，经荧光定量pcr测定其dna含量，计算样品对细胞中hbvdna复制的抑制率，计算ic50（表1）。结果显示，所述含硝酸酯基二氢杨梅素衍生物对hbvdna具有抑制作用。