本发明涉及生物蛋白
技术领域：
，具体是一种功能性蛋白肽产品的加工方法。
背景技术：
：随着社会和经济的发展，人们的健康意识越来越强烈，对食品的品质营养也越来越关注和重视。生物活性肽是源于蛋白质的多功能化合物，在生命活动中起着重要的调节作用，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血压、降血脂、降血糖等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。目前，功能性多肽研究已列入国家重点支持的高新
技术领域：
。鲫鱼（学名：carassiusauratus，简称鲫，俗名鲫瓜子、月鲫仔、土鲫、细头、鲋鱼、寒鲋）在欧亚地区为常见淡水鱼，为辐鳍鱼纲鲤形目鲤科鲫属的其中一种鱼类。鲫鱼主要是以植物为食的杂食性鱼，喜群居而行，择食而居。肉质细嫩，肉营养价值很高，每百克肉含蛋白质13克、脂肪11克，并含有大量的钙、磷、铁等矿物质。鲫鱼药用价值极高，其性平味甘，入胃、肾，具有和中补虚、除羸、温胃进食、补中生气之功效。鲫鱼主要用于食用，在烹饪过程中鲫鱼中的营养物质流失较多。且因产量过多或体积过小，鲫鱼出现滞销现象，造成资源的浪费。从天然蛋白中提取具有营养性和生理活性的功能肽，并将这些功能肽应用到保健食品和强化营养食品中，不但能够全面利用食品及食品加工中的优质蛋白，而且能够有效的提高来源广泛的蛋白质原料的附加值，同时大大提升传统食品的科技含量。现有技术如授权公告号为cn104250285b的中国发明专利，公开了一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽及用途，其特征在于：该抗氧化肽为五肽化合物，氨基酸序列为tyr-leu-met-ser-arg，esi-ms检测给出分子量651.77da（[m+h]+652.45da）。该抗氧化肽制备方法包括匀浆、酶解、超滤和层析等步骤。制备得到的高活性抗氧化肽tyr-leu-met-ser-arg对dpph自由基、羟基自由基、abts自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用。上述抗氧化肽产品制备时间较长，有腥味并呈淡黄色，产品品质有待提高。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种无腥味、呈白色，能促进胰脏分泌胰岛素的功能性蛋白肽产品的加工方法。本发明针对
背景技术：
中提到的问题，采取的技术方案为：一种功能性蛋白肽产品的加工方法，包括以下步骤：胰凝乳蛋白酶酶解：在鲫鱼鱼肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量为0.1~0.3%，酶解温度为45~55℃，ph为7.5~8.5，酶解时间为15~25min。微波辅助酶解，微波功率为100~120w，频率为20~30khz。酶解结束后沸水浴2~5min灭酶。微波辅助酶解能大幅缩短蛋白酶酶解时间，减少时间成本和人工成本，降低生产成本。胰凝乳蛋白酶将粘稠的鱼肉肉糜酶解成粘度和分子量较小的固液混合物，将更多的酶切位点暴露出来，为下一步酶解作准备；木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量为0.2~0.5%，酶解温度为50~60℃，ph为5.0~6.5，酶解时间为15~25min。微波辅助酶解，微波功率为100~120w，频率为20~30khz。酶解结束后灭酶。采用分步酶解方式对鱼肉肉糜进行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶对胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物进行进一步酶解，鲫鱼鱼肉蛋白分子量进一步减小，得到大量小分子蛋白质和多肽；等电点沉淀：过滤酶解液，取滤液，调节ph值为2.3~2.6，离心取沉淀。当溶液ph值为2.3~2.6时，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式从溶液中析出，蛋白肽的活性不被破坏；脱色脱腥：在所得沉淀中加水，混合均匀后加脱色脱腥剂，搅拌，离心取上清液；纯化：将上清液依次进行超滤和层析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列为：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽对胰岛β细胞有修复作用，促进胰岛素结构基因转录形成前胰岛素原的信使核糖核酸（mrna），在内质网的核蛋白体中合成胰岛素。因此，上述功能性蛋白肽产品对糖尿病有较好的防治效果。作为优选，脱色脱腥剂成分及其重量份为：皂土10~15份、活性白土4~9份、碱性钙基膨润土20~25份和活性炭10~15份。在物理吸附和化学吸附双重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脱色率达92%以上，氮保留率为85%以上，活性保持度高。作为优选，超滤步骤为：将上清液ph调至6.0~6.5，用截留分子量1~1.5kda的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1~1.5kda部分。通过超滤，去除分子量大于1~1.5kda的杂质，对功能性蛋白肽作初步的纯化。作为优选，层析步骤为：将超滤液用双蒸水配成20~30mg/ml的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用双蒸水、0.45~0.55mol/l和0.90~1.10mol/lnacl溶液进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，并利用反相液相色谱进行纯化，得到功能性蛋白肽。层析操作对功能性蛋白肽进一步纯化，得到高纯度功能性蛋白肽。与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明采用微波辅助酶解，微波辅助酶解能大幅缩短蛋白酶酶解时间，减少时间成本和人工成本，降低生产成本；2）本发明采用分步酶解法酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本，依次采用胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，得到大量小分子蛋白质和多肽；3）得到的功能性蛋白肽对胰岛β细胞有修复作用，促进胰岛素结构基因转录形成前胰岛素原的信使核糖核酸（mrna），在内质网的核蛋白体中合成胰岛素。因此，上述功能性蛋白肽产品对糖尿病有较好的防治效果。具体实施例下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：实施例1：一种功能性蛋白肽产品的加工方法，包括以下步骤：1）胰凝乳蛋白酶酶解：在鲫鱼鱼肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量为0.1~0.3%，酶解温度为45~55℃，ph为7.5~8.5，酶解时间为15~25min。微波辅助酶解，微波功率为100~120w，频率为20~30khz。酶解结束后沸水浴2~5min灭酶。微波辅助酶解能大幅缩短蛋白酶酶解时间，减少时间成本和人工成本，降低生产成本。胰凝乳蛋白酶将粘稠的鱼肉肉糜酶解成粘度和分子量较小的固液混合物，将更多的酶切位点暴露出来，为下一步酶解作准备；2）木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量为0.2~0.5%，酶解温度为50~60℃，ph为5.0~6.5，酶解时间为15~25min。微波辅助酶解，微波功率为100~120w，频率为20~30khz。酶解结束后灭酶。采用分步酶解方式对鱼肉肉糜进行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶对胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物进行进一步酶解，鲫鱼鱼肉蛋白分子量进一步减小，得到大量小分子蛋白质和多肽；3）等电点沉淀：过滤酶解液，取滤液，调节ph值为2.3~2.6，离心取沉淀。当溶液ph值为2.3~2.6时，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式从溶液中析出，蛋白肽的活性不被破坏；4）脱色脱腥：在所得沉淀中加水，混合均匀后加脱色脱腥剂，搅拌，离心取上清液；5）纯化：将上清液依次进行超滤和层析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列为：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽对胰岛β细胞有修复作用，促进胰岛素结构基因转录形成前胰岛素原的信使核糖核酸（mrna），在内质网的核蛋白体中合成胰岛素。因此，上述功能性蛋白肽产品对糖尿病有较好的防治效果。脱色脱腥剂成分及其重量份为：皂土10~15份、活性白土4~9份、碱性钙基膨润土20~25份和活性炭10~15份。在物理吸附和化学吸附双重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脱色率达92%以上，氮保留率为85%以上，活性保持度高。超滤步骤为：将上清液ph调至6.0~6.5，用截留分子量1~1.5kda的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1~1.5kda部分。通过超滤，去除分子量大于1~1.5kda的杂质，对功能性蛋白肽作初步的纯化。层析步骤为：将超滤液用双蒸水配成20~30mg/ml的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用双蒸水、0.45~0.55mol/l和0.90~1.10mol/lnacl溶液进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，并利用反相液相色谱进行纯化，得到功能性蛋白肽。层析操作对功能性蛋白肽进一步纯化，得到高纯度功能性蛋白肽。实施例2：一种功能性蛋白肽产品的加工方法，包括以下步骤：1）胰凝乳蛋白酶酶解：在鲫鱼鱼肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量为0.2%，酶解温度为50℃，ph为8.0，酶解时间为20min。微波辅助酶解，微波功率为110w，频率为25khz。酶解结束后沸水浴4min灭酶。微波辅助酶解能大幅缩短蛋白酶酶解时间，减少时间成本和人工成本，降低生产成本。胰凝乳蛋白酶将粘稠的鱼肉肉糜酶解成粘度和分子量较小的固液混合物，将更多的酶切位点暴露出来，为下一步酶解作准备；2）木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量为0.4%，酶解温度为55℃，ph为5.4，酶解时间为20min。微波辅助酶解，微波功率为110w，频率为25khz。酶解结束后灭酶。采用分步酶解方式对鱼肉肉糜进行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶对胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物进行进一步酶解，鲫鱼鱼肉蛋白分子量进一步减小，得到大量小分子蛋白质和多肽；3）等电点沉淀：过滤酶解液，取滤液，调节ph值为2.5，离心取沉淀。当溶液ph值为2.5时，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式从溶液中析出，蛋白肽的活性不被破坏；4）脱色脱腥：在所得沉淀中加水，混合均匀后加脱色脱腥剂，搅拌，离心取上清液；5）纯化：将上清液依次进行超滤和层析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列为：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽对胰岛β细胞有修复作用，促进胰岛素结构基因转录形成前胰岛素原的信使核糖核酸（mrna），在内质网的核蛋白体中合成胰岛素。因此，上述功能性蛋白肽产品对糖尿病有较好的防治效果。脱色脱腥剂成分及其重量份为：皂土13份、活性白土5份、碱性钙基膨润土23份和活性炭13份。在物理吸附和化学吸附双重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脱色率达93%，氮保留率为86%，活性保持度高。超滤步骤为：将上清液ph调至6.3，用截留分子量1.2kda的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1.2kda部分。通过超滤，去除分子量大于1.2kda的杂质，对功能性蛋白肽作初步的纯化。层析步骤为：将超滤液用双蒸水配成24mg/ml的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用双蒸水、0.5mol/l和1mol/lnacl溶液进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，并利用反相液相色谱进行纯化，得到功能性蛋白肽。层析操作对功能性蛋白肽进一步纯化，得到高纯度功能性蛋白肽。实施例3：一种功能性蛋白肽产品的加工方法，包括以下步骤：1）胰凝乳蛋白酶酶解：在鲫鱼鱼肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量为0.3%，酶解温度为50℃，ph为8.0，酶解时间为16min。微波辅助酶解，微波功率为110w，频率为25khz。酶解结束后沸水浴4min灭酶。微波辅助酶解能大幅缩短蛋白酶酶解时间，减少时间成本和人工成本，降低生产成本。胰凝乳蛋白酶将粘稠的鱼肉肉糜酶解成粘度和分子量较小的固液混合物，将更多的酶切位点暴露出来，为下一步酶解作准备；2）木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量为0.5%，酶解温度为55℃，ph为5.4，酶解时间为15min。微波辅助酶解，微波功率为110w，频率为25khz。酶解结束后灭酶。采用分步酶解方式对鱼肉肉糜进行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶对胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物进行进一步酶解，鲫鱼鱼肉蛋白分子量进一步减小，得到大量小分子蛋白质和多肽；3）等电点沉淀：过滤酶解液，取滤液，调节ph值为2.5，离心取沉淀。当溶液ph值为2.5时，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式从溶液中析出，蛋白肽的活性不被破坏；4）脱色脱腥：在所得沉淀中加水，混合均匀后加脱色脱腥剂，搅拌，离心取上清液；5）纯化：将上清液依次进行超滤和层析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列为：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽对胰岛β细胞有修复作用，促进胰岛素结构基因转录形成前胰岛素原的信使核糖核酸（mrna），在内质网的核蛋白体中合成胰岛素。因此，上述功能性蛋白肽产品对糖尿病有较好的防治效果。脱色脱腥剂成分及其重量份为：皂土14份、活性白土4份、碱性钙基膨润土25份和活性炭12份。在物理吸附和化学吸附双重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脱色率达93.4%，氮保留率为85.7%，活性保持度高。超滤步骤为：将上清液ph调至6.3，用截留分子量1.2kda的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1.2kda部分。通过超滤，去除分子量大于1.2kda的杂质，对功能性蛋白肽作初步的纯化。层析步骤为：将超滤液用双蒸水配成24mg/ml的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用双蒸水、0.5mol/l和1mol/lnacl溶液进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，并利用反相液相色谱进行纯化，得到功能性蛋白肽。层析操作对功能性蛋白肽进一步纯化，得到高纯度功能性蛋白肽。实施例4：选择血糖值为12.0~14.0的50名糖尿病患者，随机选择25名糖尿病患者作为试验组，让其每次饭后服用0.2g实施例3得到的功能性蛋白肽产品，另外25名糖尿病患者作为对照组不服用，并且控制50名糖尿病患者的饮食相同。经过60天的试验，记录试验组每位糖尿病患者胰岛素的注射频率，并取其平均值，记录对照组每位糖尿病患者胰岛素的注射频率，并取其平均值。表1糖尿病患者胰岛素的注射频率组名对照组试验组胰岛素平均注射频率次/天1.80.6由表1可看出，本发明功能性蛋白肽对糖尿病有防治效果，可有效减轻糖尿病症状，具有良好的市场前景。本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。sequencelisting<110>浙江丰宇海洋生物制品有限公司<120>一种功能性蛋白肽产品的加工方法<130>1<160>1<170>patentinversion3.5<210>1<211>33<212>prt<213>人工合成<400>1sercysalaserargcyslysserargcysargalaargargcysarg151015alaargcysglytyrpheglylysargcysilecyslyscysphearg202530cys当前第1页12