本发明属于养殖制剂领域，特别是涉及一种养殖微生物制剂及其制备方法。
背景技术：
随着养殖业产业化、规模化的不断发展，极大的满足了人们对肉食品的需求，也提高和改善了生活。当人们的生活得以改善和不断提高后，对肉的品质和风味有了更高的追求。总想找回农家土养方法时的肉食品质和风味。在这前题下，养殖行业为了满足人们对肉质品质和风味提高的需求，部分养殖场以还原家庭的养殖模式，不惜延长饲养时间来提高肉的品质和风味。有的采取放养和散养的方法来提高肉的品质和风味。求得满足大众对肉食品质与风味的追求。但是养殖模式的改变，也以为着养殖成本的增加，最终是肉食价格远远超出普通肉食价格，有的超出几倍，难于满足广大大众需求。
目前急需解决养殖业的产业化、规模化模式不变，出栏速度不延长，不增加养殖成本同时是畜禽肉质品质达到和超过土养法的畜禽肉质品质，使屠宰后畜禽肉无腥臊味，口感劲道，汤肉溢出自然鲜香。肉的价格与普通肉的价格持平，来极大的满足大众对高品质肉食和风味的需求。
技术实现要素：
本发明目的是针对上述现有技术的不足而提供一种养殖微生物制剂及其制备方法。
本发明实现上述目的所采取的技术方案是：一种养殖微生物制剂，它是由重量比为1:10的复合液体菌种和培养液扩培而成；所述培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖75-85份、红糖45-55份、磷酸二氢钾0.4-0.6份、尿素0.8-1.2份、多羟基羧酸钛4-6、开水990-1100份；所述复合液体菌种是由重量比为1:10的复合菌种液和菌种培养液扩培而成，所述菌种培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖75-85份，红糖45-55份，蛋白胨3-5份，酵母膏2-3份，硫酸镁0.3-0.7份，磷酸二氢钾0.7-0.8份，尿素0.8-1.2份，氯化钠1-2份，硫酸亚铁0.02-0.03份，硫酸锰0.008-0.012份、多羟基羧酸钛1毫升，蒸馏水990-1100份；（加热灭菌至无浮沫）！，所述复合菌种液以下菌种混合培养而成：米根霉、酵母菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、肠膜明串珠菌、小片球菌、粪链球菌、地衣芽孢杆菌、短小芽胞杆菌。
一种制备上所述养殖微生物制剂的方法，所述方法包括以下步骤：
（一）米根霉和酵母菌的扩培
将米根霉和酵母菌分别将试管菌接入直径94公分培养皿制备好的察氏培养基，每菌各4皿。置30℃恒温箱培养72h,选择生长旺盛健壮的2个培养皿，将两菌分别用30毫升无菌水洗脱至提前准备好的1000毫升三角瓶装200毫升通用增殖液体培养基，放入恒温箱进行增值扩培72h，培养至菌液浑浊有明显菌体，菌液ph值降至3.5-4终止备用，境检菌数达10个亿为合格。再将两菌按1:1的比例各取20毫升放入1000毫升提前制备好的增殖培养液400毫升内培养，镜检菌数达10个亿，置保藏箱备用。
（二）植物乳杆菌、短乳杆菌、肠膜明串珠菌、小片球菌、粪链球菌的扩培
a、将扩培营养基：蛋白胨5克、胰胨20克、酵母膏5克、西红柿汁200毫升、肝浸膏、葡萄糖3克、乳糖3克、吐温-800.05克、蒸馏水1升、琼脂20克加热搅拌溶解灭菌，无菌下浇已灭菌的培养皿，凝固后无菌接入以上各试管斜面菌，每菌各接入直径94公分平皿4皿，恒温箱30℃培养至菌落布满；
b、按以上培养基配制2000毫升不放琼脂，灭菌凉至25℃，分装在500毫升已灭菌的三角瓶中，每瓶200毫升，用灭菌蒸馏水30毫升在无菌环境选择培生长好的5种菌，分别用灭菌刷子洗脱菌落到对应的培养液中各自培养液，放30℃恒温箱培养至菌液浑浊，ph值至3.5-4时终止备用，镜检菌数达到10亿以上为合格。按原培养基制备1000毫升，分装至三个1000的三角瓶中灭菌，无菌环境分别取5种不同菌各10毫升加入3个三角瓶，置28℃恒温箱培养至菌液混浊，ph值降至4，镜检菌数达10亿以上为合格，放保藏箱备用。
（三）地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的扩培
a、扩培营养基：蛋白胨5克、牛肉浸取膏、氯化钠5克、硫酸锰5毫克、琼脂15克，蒸馏水1000ml。ph值7。加热溶解琼脂，灭菌趁热在无菌环境浇至已灭菌的10个培养皿（规格94cm），凝固后接入试管菌，置恒温箱35℃.培养至布满培养皿终止；
b、将扩培营养基取下琼脂，将其他营养物溶于1000ml蒸馏水中，分装3个三角瓶中灭菌，灭菌后置无菌环境凉至25℃，用无菌水30和无菌刷洗脱培养皿菌落至扩培液中，置35℃培养箱至菌液浑浊，ph降至4，境检菌数达10亿以上为合格，放保藏箱备用
（四）复合液体菌种的培养
a、用多羟基羧酸钛和蒸馏水热解葡萄糖、红糖、蛋白胨、酵母膏、硫酸镁、磷酸二氢钾、尿素、氯化钠、硫酸亚铁、（氯化钙）硫酸锰，调整溶液ph值为7；
b、将上步骤溶好的培养液平均分装在3个1000ml三角瓶各300ml灭菌处理，在无菌环境下将步骤一、二、三培养好的液体菌混合摇匀，按1:10的比例分别加入三个三角瓶培养液中，多层无菌纸封口，轻摇匀，置恒温培养箱培养，培养3-5天，菌液浑浊，ph值降至4以下，境检菌数达分别10亿以上为合格，保藏备用。
c、按复合菌扩培液配制方法制备3000ml灭菌，装入5个已灭菌1000ml三角瓶内各600ml，把以上三种制备好混合菌按1:10的比例分别同加入各三角瓶中，置培养30℃箱培养，培养3-5天ph值达4，境检总菌数达10亿以上为合格。即为共同培养复合液体菌种。
（五）生产用菌扩培：
将除多羟基羧酸钛的营养液的余料混合溶解，水温降至25℃时加入多羟基羧酸钛；将复合液体菌种和培养液按体积比为1:10的比例混合，置25℃的环境下培养三天，培养好的菌种制剂密封保存一年活力保持90%，即为合格。
所述增殖扩培液是由以下原料配制而成：蛋白胨5克，酵母膏2克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，羟基羧酸钛1毫升，纯水1000毫升。
本发明的原理及有益效果是：目前的集约化养殖使用的是全价配合饲料，养殖密度大，饲养周期短，饲料中添加的添加剂品种多，添加的防病药物多。集约化养殖的品种多是引进的外来品种。多种因素造成在养殖过程中畜禽体内的粪臭素积累远超土养法所用的饲料、环境、活动量等因素形成粪臭素的积累量。这就形成土养的畜禽与集约化养殖的畜禽在食用风味上有差别。土养的活动量大，饲养周期长，肌肉紧密劲道。集约化养殖的肉质口感松软无味。⑵、粪臭素对肉质的影响。在养殖畜禽中只要畜禽正常代谢，就有粪臭素产生，它随代谢物排出体外时严重污染空气和周边环境，也严重影响畜禽健康。在畜禽体内沉积肌肉中产生异臭味，体内的另一种物质雄烯酮同粪臭素一样在脂肪中沉积。粪臭素和雄烯酮对肉质异臭味的影响程度还取决于周期和体重，动物达到性成熟前沉积量增多，性成熟后沉积更多。粪臭素产生于动物的结肠，从大肠到直场粪臭素的含量不断增加。除进入肝脏后的部分被代谢排掉，其余的存留于肝脏、肾脏、血液、肌肉和脂肪。这是畜禽肉质中发出腥臊味的主要原因。⑶、粪臭素在血液中能导致肺组织的的损伤，排出体外的会危害畜禽的呼吸功能和生理机能，低浓度时能引起应急反应，降低畜禽生产性能，长时在有粪臭素的环境里会改变畜禽的神经内分泌功能。高浓度时，可引起畜禽急性中毒，出现发育障碍，过敏，机能衰退等。是严重污染养殖环境和畜禽体表挥发出粪臭味的主要成因。⑷、畜禽采食到含有粪臭素或可以转变为粪臭素的外源性食物进入体内，粪臭素将不可避免地与畜禽的体内消化酶发生作用，它对畜禽体内的a－淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶起到抑制作用。严重影响对饲料的消化和利用。
为解决这些存在的问题，利用微生物特有的功效进行解决，所得结果几乎消除了目前畜禽养殖存在的共性问题。其方法选用有霉菌、酵母菌与乳酸菌共生的菌群进行培养，将培养好的液体菌群按比例0.5-1%加入到粉状饲料中。也可按例比1:100加到饮水中。在不断的采食和饮入水中菌。也可以用固体物厌氧培养复合菌，培养好后与全价配合饲料，按5%或10%饲喂不同的畜禽。在不断的采食和饮入水中菌群进入畜禽消化系统，它所产生的功能表现在几个方面。
①调节畜禽胃肠道ph值，复合菌群在培养液ph值降至3.5时，菌群进入休眠状态，当进入ph值和温度适宜的畜禽胃和肠道环境，它能较快复活和进行代谢乳酸、丙酸、乙酸、丁酸等，在它的代谢活动中能帮助畜禽调节胃肠道ph值，当畜禽胃肠道降至ph4-5时，在此水平的胃肠道能激活蛋白质和淀粉有关的消化酶。解除了畜禽体内对α－淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶的抑制。经验证，当畜禽胃肠道ph>6时胃蛋白酶失活，这时有利于有害大肠杆菌的存活和代谢。ph≦5酸性时有利于有益的乳酸菌和链球菌、双歧杆菌存活和代谢。给畜禽补充复合乳酸菌群协助畜禽降低胃肠道ph值为目的，对提高畜禽对饲料的消化吸收能力和降低养殖成本具有重要意义。
②经验证，当畜禽胃肠道ph﹦8时约78%的色氨酸转化为粪臭素，22%色氨酸转为吲哚，ph﹦6.5时约有42%的色氨酸转化为粪臭素，58%色氨酸转为吲哚，ph﹦5时只有16%色氨酸转化为粪臭素而84%的色氨酸转化为吲哚。粪臭素的产生是饲粮和内源蛋白质在畜禽盲肠和大肠厌氧微生物作用下产生的，尤其是有害大肠杆菌、梭状芽孢杆菌、变形杆菌等腐败产氨菌能降解l-色氨酸形成吲哚-3-乙酸脱羧而成粪臭素。用复合菌群调节畜禽胃肠道ph值，能起到有效控制粪臭素在畜禽肝脏、肾脏、血液、肌肉和脂肪的积累。是色氨酸更多的转化为吲哚。吲哚是香料中的一个成分，在微量的浓度时对畜禽肉品风味提高有较大帮助。吲哚与乙酸化合为吲哚乙酸成为一种生长促进剂，它对畜禽的生长是有促进和帮助作用。
③复合菌群除健胃、调整肠道等功能外，其代谢过程中会产生许多有益物质，产生的乳酸菌素功能特殊。乳酸菌素的抗菌功能主要是利用其蛋白质结构上的不同位点电荷数的不同，可抑杀有害大肠杆菌、沙门氏菌等造成目标菌细胞膜结构部分改变，具有类似清洁剂功能。一般而言，其杀菌机制是先吸附在目标菌的细胞膜上、再侵入膜内而形成通透孔道，以引起膜内物质变化而导致有害菌死亡。乳酸菌素的作用类似抗生素，完全不产生抗药性及毒性，而且不易被小肠胰蛋白酶破坏，可有效抑制病原菌的生长。它可以替代抗生素起到抗病防病的作用，是畜禽的肉质更加绿色无药残。
通过给畜禽饲料中补加复合菌剂和饮水系统连续不断的补充复合菌剂，（所产生的2—羟基丙酸，它是一种羧酸），维持了畜禽胃肠道的ph值处于较低状态，抑制了粪臭素的过量产生，是畜禽肉的品质和风味得以改变和提升。以养成的生猪屠宰感受肉质的品质变化。出栏的猪退毛屠宰，入水烫毛时没有刺鼻臊味，开膛后无腥味、胀气、臊味溢出。肝脏鲜红明亮，肺色粉红干净，肠壁较薄。①、肉质鲜红，ph值5.7–6.2与对照组相同。②、肉质加压保水力前肩比对照组高7.5%、中段高出7.8%、后腿高出3.1%。③、脂肪熔点高出对照组>1.5℃，膘油熔出少，膘肉炒出口感发脆不油腻。④、肉中脂肪酸c20:4(n–6)花生四烯酸高于对照组，这一成分是肉食香味的前体物质。脂肪酸c22:6(n–3)dha高于对照组,俗称“脑白金”。⑤、肉中超氧化物岐化酶（sod）﹥0.1%高于对照组。这可减缓脂质氧化，起到保护肉质的作用。⑥、水煮鲜肉清汤无腥味，煮肉不加佐料。直接食用肉质鲜香、筋道。有回归食用土养畜禽肉的品味，但又超出了土养猪肉的鲜香和筋道⑦、鲜肉冷冻后再解冻肉色不变，肉质不变，口感不变。
按此法养殖肉鸡、肉鸭所得肉质无腥臊味、筋道、具有原始的自然鲜香。这种方法解决了不以牺牲规模化养殖又能改变畜禽肉质的品质和风味，即消除了抑制畜禽消化吸收的有害因子，提高了生产效能，改善了养殖环境。解决了人们对高品质畜禽肉的需求，平抑了价高而偏离市场供需矛盾。
具体实施方式
本发明以下将结合实施例做进一步的描述。
实施例1
本发明的养殖微生物制剂，它是由重量比为1:10的复合液体菌种和培养液扩培而成；所述培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖76份、红糖47份、磷酸二氢钾0.4份、尿素0.9份、多羟基羧酸钛4份、开水995份；所述复合液体菌种是由重量比为1:10的复合菌种液和菌种培养液制备而成，所述菌种培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖77份，红糖46份，蛋白胨3份，酵母膏2份，硫酸镁0.4份，磷酸二氢钾0.73份，尿素0.9份，氯化钠1份，硫酸亚铁0.023份，硫酸锰0.009份、多羟基羧酸钛1毫升，蒸馏水998份；所述复合菌种液以下菌种混合培养而成：米根霉、酵母菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、肠膜明串珠菌、小片球菌、粪链球菌、地衣芽孢杆菌、短小芽胞杆菌。
上所述养殖微生物制剂的制备方法包括以下步骤：
（一）米根霉和酵母菌的扩培
将米根霉和酵母菌分别用察氏培养基扩培，扩培后的米根霉和酵母菌用增值扩培液放入恒温箱进行增值扩培，培养至菌液浑浊有明显菌体，菌液ph值降至3.5-4终止备用，境检菌数；
（二）植物乳杆菌、短乳杆菌、肠膜明串珠菌、小片球菌、粪链球菌的扩培
a、将扩培营养基：蛋白胨5克、胰胨20克、酵母膏5克、西红柿汁200毫升、肝浸膏、葡萄糖3克、乳糖3克、吐温-800.05克、蒸馏水1升、琼脂20克加热搅拌溶解灭菌，无菌下浇已灭菌的培养皿，凝固后无菌接入以上各试管斜面菌各4皿，恒温箱30℃培养36-72h至菌落布满；
b、按以上培养基配制1000ml，不放琼脂，灭菌凉至25℃，分到5个已灭菌的500ml三角瓶中，每瓶200ml，将培养好的5种菌抽出生长最好的，各用30ml无菌水洗和灭菌刷子将菌落洗脱到对应的培养液中培养皿，放30℃恒温箱培养72h至菌液浑浊，ph值至3.5-4时,镜检菌数≥10个亿，终止备用。
按原培养基配制1000ml，分至2个1000ml三角瓶各500ml灭菌，在无菌环境接入已培养好5种菌，每菌各取10ml加到同一个三角瓶，将加好菌的三角瓶用无菌纸多层封口，置30℃恒温箱培养72h，外感菌液混浊，测ph值3.5-4，境检菌数≥10个亿，置4℃保藏箱备用。
（三）地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的扩培
a、扩培营养基：蛋白胨5克、牛肉浸取膏、氯化钠5克、硫酸锰5毫克、琼脂15克，蒸馏水1升。ph值7。加热溶解琼脂，灭菌趁热在无菌环境浇至已灭菌的培养皿，凝固后接入试管菌，置恒温箱35℃.培养至布满培养皿终止；
b、将扩培营养基取下琼脂，将其他营养物按量溶于蒸馏水中，配制1000ml,分到4个1000ml三角瓶中各300ml灭菌，灭菌后置无菌环境凉至25℃，将培养好培养皿用无菌水30ml和无菌刷洗脱培养皿菌落至对应的三角瓶，置35℃培养箱至菌液浑浊，ph降至4，境检菌数≥10个亿备用。
按三角瓶使用的培养液配制1000ml分至2个1000ml三角瓶各500ml灭菌，在无菌环境凉至25℃，两种菌各取25毫升加到同一个三角瓶，制备两瓶置35℃恒温箱培养72h，菌液混浊，ph值3.5-4，镜检菌数≥10亿，置4℃冷藏箱备用。
（四）复合液体菌种的培养
a、用多羟基羧酸钛和蒸馏水热解葡萄糖、红糖、蛋白胨、酵母膏、硫酸镁、磷酸二氢钾、尿素、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸锰，调整溶液ph值为7；
b、将上步骤溶好的培养液平均分装在三个营养液容器中灭菌处理后，在无菌环境下将步骤一、二、三培养好的液体菌混合摇匀，按1:10的比例分别加入三个营养液容器，多层无菌纸封口，轻摇匀，置恒温培养箱培养，培养3天，菌液浑浊，ph值降至3.5-4，境检菌数达十亿以上符合复配用菌；
c、按以上液体培养液的配制方法配制灭菌，装入三角瓶，把以上三种菌按1:10的比例分别同加入三角瓶中，置培养箱培养，培养三天ph值为3.5-4，境检总菌数达十亿以上即为复合液体菌种；
（五）生产用菌扩培：
将除多羟基羧酸钛的营养液的余料混合溶解，水温降至25℃时加入多羟基羧酸钛；将复合液体菌种和培养液按体积比为1:10的比例混合，置25℃的环境下培养三天，培养好的菌种制剂密封保存一年活力保持90%，即为扩培用菌原种。
所述增值扩培液是由以下原料配制而成：蛋白胨5克，酵母膏2克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，羟基羧酸钛1毫升，纯水1000毫升。
实施例2
本发明的一种养殖微生物制剂，它是由重量比为1:10的复合液体菌种和培养液扩培而成；所述培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖80份、红糖50份、磷酸二氢钾0.5份、尿素1份、多羟基羧酸钛5份、开水1000份；所述复合液体菌种是由重量比为1:10的复合菌种液和菌种培养液制备而成，所述菌种培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖80份，红糖50份，蛋白胨4份，酵母膏2.5份，硫酸镁0.5份，磷酸二氢钾0.75份，尿素1份，氯化钠2份，硫酸亚铁0.025份，硫酸锰0.01份、多羟基羧酸钛1毫升，蒸馏水1000份；所述复合菌种液以下菌种混合培养而成：米根霉、酵母菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、肠膜明串珠菌、小片球菌、粪链球菌、地衣芽孢杆菌、短小芽胞杆菌；其制备方法同实施例1。
实施例3
本发明的一种养殖微生物制剂，它是由重量比为1:10的复合液体菌种和培养液扩培而成；所述培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖85份、红糖55份、磷酸二氢钾0.6份、尿素1.2份、多羟基羧酸钛6份、开水1100份；所述复合液体菌种是由重量比为1:10的复合菌种液和菌种培养液制备而成，所述菌种培养液是由以下重量份数的原料制备而成：葡萄糖75-85份，红糖55份，蛋白胨5份，酵母膏3份，硫酸镁0.7份，磷酸二氢钾0.8份，尿素1.2份，氯化钠2份，硫酸亚铁0.03份，硫酸锰0.012份、多羟基羧酸钛1毫升，蒸馏水1100份；所述复合菌种液以下菌种混合培养而成：米根霉、酵母菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、肠膜明串珠菌、小片球菌、粪链球菌、地衣芽孢杆菌、短小芽胞杆菌，其制备方法同实施例1。
以上实施例中菌种的选用和来源：中科院微生物菌种保藏中心（编号bi0)、北纳生物菌种保藏中心（bnc、bncc)：米根霉：bncc-339462、酵母菌：bi0-64682、植物乳杆菌:bnc339515、短乳杆菌：bncc337373、肠膜明串珠菌：bi0-67753、小片球菌：bi0-67910、粪链球菌：bi0-18763、地衣芽孢杆菌bi0-60464、短小芽胞杆菌:bi0-59404。
本发明的使用方法是：1、粉状料：每吨料加5公斤制剂搅拌均匀；2、粉状湿拌料:每吨料配5公斤制剂配适量水的拌匀；3、饲喂颗粒料:每吨饮水中加1-2公斤制剂。4、用固体发酵菌剂按5%-10%替代全价料。