本发明涉及新的trpv1拮抗剂及其药学可接受的盐、其制备方法和用途。
背景技术：
疼痛是临床上最常见的症状之一，由于其病理机制的复杂性，疼痛已成为未被满足的主要医学需求。目前临床上用于镇痛的药物主要有两类：阿片类药物和非甾体类抗炎药物(nsaids)。阿片类药物通过与阿片受体结合，激活阿片受体，进而产生镇痛作用。该类药物通常起效迅速，并能显著减轻或消除疼痛。但阿片类药物存在副作用：连续反复应用，会产生耐药性并致成瘾，一旦停药即出现戒断症状，危害极大。非甾体类抗炎药物的作用机制是通过抑制花生四烯酸环氧合酶来抑制前列腺素的生物合成。非甾体类抗炎药物的临床疗效较好，且不易产生耐受及成瘾性，由于其作用部位主要在外周，因此不能代替阿片类药物使用。此外，非甾体类抗炎药物的胃肠道反应、胃溃疡、胃出血以及变态反应等不良反应仍然令人生畏。
瞬时受体电位香草酸亚型1(trpv1)，属于阳离子通道瞬时受体通道家族(trp家族)的无选择性的配基控制的阳离子通道，在受神经支配的布满许多组织，包括皮肤、膀胱、气道和胃肠道的小直径感觉神经元的外周末端被高度表达。trpv1受体更明确地位于aδ子集和c纤维上，传入通常与疼痛有关(mezeyetal.，proc.nat1.acad.sci.97，3655-3660，2000)。该通道分子水平的特征使它作为识别香草酸(红辣椒的主要辛辣成分)的靶标(caterinaetal.nature389，816-824，1997)。在人类中，皮内暴露于辣椒素起初导致灼烧般疼痛的感觉是由于神经元的剌激，然后是感觉缺失的长的持续期间，据信是功能性敏感下降的结果(reviewedinbley，exp.opininvestigdrugs.13，1445-1456，2004)。这导致了trpv1拮抗剂作为潜在的镇痛化合物的发展。然而，这些化合物遭受许多的问题包括疼痛和在最初的应用的灼烧感。trpv1拮抗剂包括capsazepine(walkeretal.，j.pharm.exp.ther._304，56-62，2003)和bctc(pomonisetal.，j.phar.exp.ther.306，387-393，2004)证明对各种炎症和神经痛的临床前动物模型有活性。
技术实现要素：
在第一方面，本发明涉及式(i)的化合物或其药学上可接受的盐：
r选自-nme2，
本发明的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐也可以表示为下式(1)、(2)或(3)：
本发明式(1)化合物名称为：n,n-二甲基-3-(2-氧-5-苯基-2,3-二氢-1h-苯并[1,4]二氮杂卓-3-基)丙酰胺；本发明式(2)化合物名称为：3-(3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙基)-5-苯基-1,3-二氢-2h-苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮；本发明式(3)化合物名称为：3-(3-(苯甲酰基哌嗪-1-基)-3-羰基丙基)-5-苯基-1h-苯并[1,4]二氮杂卓。
根据本发明的一实施方案，本发明的药学可接受的盐为酸与化合物(i)中的含孤对电子的氮形成的盐，例如与无机酸或有机酸形成的盐。
根据本发明的另一实施方案，本发明化合物的“药学可接受的盐”可以是与无机酸形成的盐，例如与以下无机酸形成的盐：盐酸(hcl)、氢溴酸(hbr)、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸或硝酸；或者与有机酸形成的盐，例如与以下有机酸形成的盐：甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、肥酸、藻酸、马来酸、富马酸、d-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸。
在第二方面，本发明涉及式(i)的化合物或其药学上可接受的盐在作为trpv1拮抗剂中的应用，特别是在制备用于提供镇静、催眠、镇痛、麻醉药物中的应用。在该方法的一优选实施方案中，静脉内给药式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
一般地，已证明有利的量，为达到所需结果，每千克每24小时给药的式(1)化合物的总量为约0.01-800mg，优选的总量为0.1-80mg/kg。如果必要，以几次单剂量的形式给药。然而，如果必要，也可以偏离上述用量，即这取决于待治疗的受试者的类型和体重、个体对药物的行为、疾病的性质和严重性、制剂和给药的类型、以及给药时间和间隔。
在第三方面，本发明还涉及一种药物组合物，其包含式(i)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
在上述第三方面的一实施方案中，本发明涉及一种用于向个体提供镇静的方法，所述方法包括向所述个体给药式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。在该方法的一优选实施方案中，静脉内给药式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还包括药物制剂，该制剂包含作为活性剂的通式(i)化合物或其药用盐或药学上可接受的载体。上述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，是指一种或几种惰性的、非毒性的固体或液体填充物、稀释剂，助剂等，它们不逆向与活性化合物或病人发生作用。
本发明组合物的剂型可以是片剂、胶囊、丸剂、栓剂、软胶囊、口服液、混悬剂、注射液等药剂学上常用的剂型。口服用药片和胶囊含有传统的赋形剂如填充物、稀释剂、润滑剂、分散剂以及粘合剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。以上活性剂的剂量将因配方而异。
本发明的有益效果
本发明以临床需求为导向，创新地将trpv1拮抗剂与苯二氮卓类化合物有机地结合在同一个分子中，在平稳患者情绪、缓解患者焦虑，发挥镇静、催眠活性的同时，还能起到镇痛、麻醉的效果，可以广泛应用于临床治疗。在10μm的浓度下，本发明对辣椒碱激活trpv1有明显的拮抗活性，舔足时间和扭体次数相对于空白组及现有技术(化合物a)均有明显的减少；在小鼠热水浴缩尾模型中，且与空白相比，本发明化合物均能显著提高小鼠的mpe％，具有减弱热诱导疼痛的作用。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。要说明的是，以上实施例只用于本发明进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。本发明所用原料及试剂均为市售产品。
制备例
实施例1：制备化合物(1)
制备路线：
将3-(2-氧-5-苯基-2,3-二氢-1h-苯并[1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸(a)(0.50g,1.62mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，依次加入edci(0.34g,1.78mmol)、催化量的dmap和二甲胺(0.072g,1.62mmol)，反应2h，减压蒸除溶剂，柱层析，得到淡黄色固体0.21g，产率39.6％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:8.34(d,j＝6.5hz,2h),8.27–8.09(m,2h),7.86(t,j＝7.3hz,2h),7.76–7.46(m,3h),6.15(s,1h),4.07(t,j＝6.6hz,1h),3.70(s,6h),2.47(d,j＝7.3hz,2h),1.86(s,2h)；esi-msm/z:336.5([m+h]+).
实施例2：制备化合物(2)
制备路线：
将3-(2-氧-5-苯基-2,3-二氢-1h-苯并[1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸(a)(0.50g,1.62mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，依次加入edci(0.34g,1.78mmol)、催化量的dmap和哌啶(0.138g,1.62mmol)，反应2h，减压蒸除溶剂，柱层析，得到淡黄色固体0.28g，产率46.8％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:8.34(d,j＝6.5hz,2h),8.27–8.09(m,2h),7.86(t,j＝7.3hz,2h),7.76–7.46(m,3h),6.15(s,1h),4.07(t,j＝6.6hz,1h),3.52(t,4h),2.47(d,j＝7.3hz,2h),1.86(s,2h),1.46(t,7h)；esi-msm/z:376.5([m+h]+).
实施例3：制备化合物(3)
制备路线：
将苯胺(1g,10mmol)溶于dmso(10ml)中，向溶液中加入n,n'-羰基二咪唑(2g,12mmol)，室温搅拌2h后，加入水(30ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃取分层，水层用乙酸乙酯洗涤(20ml×3)，合并有机层24h后,减压蒸除溶剂，得到油状物；上述条件下所得产物溶于二氯甲烷(20ml)中，加入1-boc-哌嗪(1.67g,9mmol)，室温搅拌2h，减压蒸除溶剂，得到油状物，柱层析，流动相配比为石油醚：乙酸乙酯＝4:1。将所得产物溶于饱和盐酸放入乙酸乙酯溶剂(20ml)中，室温反应2h，减压蒸除溶剂，得到白色固体化合物。将以上白色固体加入饱和nahco3溶液中，搅拌30min后，用乙酸乙酯洗涤(30ml×3)，合并有机层24h后，减压蒸除溶剂，得到油状物(d)1.2g；将3-(2-氧-5-苯基-2,3-二氢-1h-苯并[1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸(a)(0.50g,1.62mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，依次加入edci(0.34g,1.78mmol)、催化量的dmap和(d)(0.33g,1.62mmol)，反应2h，减压蒸除溶剂，柱层析，得到淡黄色固体0.339g，产率43.7％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:8.59–8.24(m,3h),8.24–8.01(m,2h),7.86(t,j＝7.6hz,2h),7.76–7.44(m,3h),4.07(t,j＝11.8hz,1h),3.63–3.09(m,8h),2.87(d,j＝5.5hz,2h),2.64(s,4h)；esi-msm/z:482.3([m+h]+).
生物学实施例
实施例4：化合物对trpv1受体的拮抗活性
将trpv1受体表达在人胚肾细胞上，trpv1激动后，非选择性阳离子通道开放，胞外钙离子迅速内流，胞浆钙离子浓度上升。使用fura-2钙离子荧光探针，加入温孵液中被细胞摄取。当胞浆钙离子和fura-2结合后，其最大激发波长从380nm移至340nm，发射波长保持在510nm。通过340nm/380nm双激发波长时扫描发射波长的强度的比值r340/r380，可以计算出胞浆钙离子的浓度。
本实验分为两组：空白对照组、实验组，实验组的给药浓度为10μm。受体化合物的trpv1拮抗活性筛选实验做法为：在辣椒碱作用于受体之前10min加入受试化合物，通过计算r340/r380的值来表征胞内钙离子相对浓度，以预测化合物对辣椒碱的拮抗程度，预测化合物对trpv1受体的拮抗活性程度，结果见表1。
表1目标化合物对trpv1受体拮抗活性的筛选
在10μm的浓度下，本发明中涉及的化合物均表现出对辣椒碱激活trpv1的拮抗活性，其中制备原料化合物a的抑制率不足50％；化合物2的抑制率与化合物a相比有所提高，为68.56％；化合物3的抑制率与化合物a相比有较大提高，为87.68％；-n(ch3)2取代的化合物1抑制率最高，达到了95.44％。
实施例5：化合物的体内镇痛实验
小鼠舔足实验
小鼠按体重随机分组，每组6只。测试前30分钟口服灌胃给药(30mg/kg，10ml/kg)，空白组给予等体积的0.5％cmc-na。测试时在小鼠右足背的皮下注射浓度为1.6μg/20μl的辣椒碱溶液20μl，记录5分钟内小鼠舔右足的总时长(单位：秒)。
小鼠扭体实验
小鼠按体重随机分组，每组6只。测试前30分钟口服灌胃给药(30mg/kg，10ml/kg)，空白组给予等体积的0.5％cmc-na。测试时小鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液，记录小鼠15分钟内出现扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)的次数。
小鼠缩尾实验
小鼠按体重随机分组，每组6只。小鼠尾巴末端三分之一浸入52℃热水浴中，记录小鼠缩尾响应时间，间隔10分钟测量两次，平均值作为小鼠的基础痛阈，小鼠尾巴浸入热水中的时间不要超过15s。测定基础痛阈后30分钟，每组口服灌胃给药(60mg/kg，10ml/kg)，空白组给予等体积的0.5％cmc-na。给药后半小时参考基础痛阈的测定，测试给药半小时后的缩尾响应时间，其平均值为给药后痛阈。并计算各组的percentmaximalpossibleeffect(mpe％)＝(基础痛阈-给药后痛阈/(cut-offtime-基础痛阈)×100，其中cut-offtime为12s。
表2化合物在三种小鼠疼痛模型中的镇痛活性
注：t检验，*p＜0.05，**p＜0.01,***p＜0.001与空白组比较。
表2中化合物代号对应的化学结构同实施例。
在辣椒碱诱导的小鼠舔足模型中，化合物2相对于空白组及化合物a而言，舔足时间和扭体次数均有一定程度的减少；在醋酸诱导的小鼠扭体模型中，化合物1、3能显著减少小数的扭体次数；在小鼠热水浴缩尾模型中，且与空白相比，本发明中涉及的化合物均能显著提高小鼠的mpe％，具有减弱热诱导疼痛的作用。
实施例6含活性剂2的片剂：
按常规方法将原辅料混合，制粒，干燥，压片。
除非另有说明，本说明书(包括权利要求书)中使用的所有表示成分、比例、条件等的量的数字应当理解为在所有条件下受到术语“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，数值参数为近似值，并且可以根据通过本发明的期望特性而变化。本领域技术人员会认识到本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同物，并且其涵盖在所附权利要求书的范围内。可以进行本发明的许多修改和变化而不背离其精神和范围。