一种封闭式多重荧光PCR检测用卡盒的制作方法

本发明涉及一种生物核酸分子提取及检测用卡盒，具体为一种封闭式多重荧光pcr检测用卡盒。

背景技术：

核酸提取及检测是分子诊断的一项重要工作，但是在核酸的提取及检测过程中，易产生气溶胶污染，使结果出现假阳性，常规的分子诊断需要在特定的分子诊断实验室内进行，严重制约了这项技术的应用和推广。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是克服现有的常规分子诊断需要在特定的分子诊断实验室内进行，严重制约了这项技术的应用和推广的缺陷，提供一种封闭式的卡盒，可用于poct类分子诊断仪器产品的研发。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种封闭式多重荧光pcr检测用卡盒，包括上盖、壳体、中轴、滤芯吸头和底座，上盖、壳体和底座构成形成一个封闭空间，中轴上端穿出上盖的中心孔与驱动机构连接，下端插入底座的中心孔内，中轴中部通过横臂与滤芯吸头连接，中轴与上盖和底座的连接处套均设有限位圈，底座与横臂之间的中轴上设置有弹簧；底座上设置有若干个pcr管和试剂槽；所述滤芯吸头与抽吸装置连接。

进一步的，所述的抽吸装置由柔性气管和注射器组成。上盖上设置有上气路接口，横臂上设置有下气路接口，所述柔性气管通过上气路接口和下气路接口与滤芯吸头连接。

优选的，所述上气路接口两端采用宝塔头结构，便于与柔性气管联接和密封；

优选的，所述下气路接口上端采用宝塔头结构，便于与柔性气管联接和密封；下端采用锥形结构，并有密封圈，可以与滤芯吸头紧密结合，不会出现漏气；

优选的，所述中轴采用下圆上方的结构，优选采用硬质材料制成。

进一步的，所述壳体为用圆柱形壳体。

进一步的，试剂槽、pcr管，采用透明、半柔性、耐高温的材料。

当中轴在驱动机构的作用下做旋转运动时，上盖和滤芯吸头做同步转动，同时，在中轴和弹簧作用下，滤芯吸头还可以随中轴一起上下运动，从而完成对不同试剂槽和pcr管内的液体进行转移。由于上盖和滤芯吸头做同步转动，可以节省卡盒的空间。

试剂槽和pcr管中可以加入不同检测试剂，旋转中轴，利用滤芯吸头吸取试剂槽的液体、或对试剂槽液体进行吹吸混匀，配合磁性材料可以实现磁珠与核酸的结合、多次清洗、洗脱，完成核酸提取及纯化。之后可将提取和纯化后的核酸加入到pcr管内，添加试剂并配合与之配套的荧光定量pcr检测仪的热井，可用于荧光定量pcr检测。

本发明的封闭式多重荧光pcr检测用卡盒可以将磁珠法核酸提取和荧光定量pcr检测两个步骤，在一个小的密闭的盒体内完成，可用于没有分子诊断实验室环境下的核酸提取和荧光pcr检测，具有结构紧凑、易于操作、结构简单、易装配等优点，有效提高分子诊断类产品的环境适应度。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的结构示意图；

图2是本发明的部分结构示意图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例

如图1所示，一种封闭式多重荧光pcr检测用卡盒，包括上盖1、圆柱形壳体9、中轴13、滤芯吸头6和底座12，上盖1、圆柱形壳体9和底座12构成形成一个封闭空间，中轴13上端穿出上盖1的中心孔与驱动机构连接，下端插入底座12的中心孔内，中轴13中部通过横臂5与滤芯吸头6连接，中轴13与上盖1和底座12的连接处套均设有限位圈7，底座12与横臂5之间的中轴13上设置有弹簧8；底座12上设置有6个pcr管10和试剂槽11；滤芯吸头6与柔性气管3连接。上盖1上设置有上气路接口2，横臂5上设置有下气路接口4；柔性气管一端3通过上气路接口2和下气路接口4与滤芯吸头6连接，另一端与注射器连接。

上气路接口2两端采用宝塔头结构，便于与柔性气管联接和密封；下气路接口4上端采用宝塔头结构，便于与柔性气管联接和密封；下端采用锥形结构，并有密封圈，可以与滤芯吸头紧密结合，不会出现漏气；中轴采用硬质材料制成的下圆上方的结构，试剂槽11和pcr管10，采用软性耐高温材料制成。上盖、底座、中轴、横臂、上气管接口、下气管接口和圆形外壳均采用硬质透明塑料注塑加工而成。

在试剂槽1内放置裂解、结合和磁珠的混合液(1000μl)，并加入待测样本300μl，试剂槽2内放置洗涤液1(300μl)，试剂槽3孔内放置洗涤液2(300μl)，试剂槽4内不加液，试剂槽5内放置洗脱液(100μl)，试剂槽6孔内放置矿物油(1000μl)，pcr管内分别放置可以检测不同目的核酸片段的pcr反应液(40μl)。在中轴上依次套入限位圈、横臂、限位圈，用柔性导管将上气管接口的下端口与下气管接口的上端口联接，将滤芯吸头插到下气管接口的下端口，并插牢，并做密封处理，确保不漏气。在底座上放置圆柱型外壳，将配合好的中轴先插入上盖组成装配体，再整体从圆形外壳上方装入，上气管接头的上端口与注射器用柔性气管联接，完成整个卡盒的装配。

体操作流程如下：

1、旋转中轴，将滤芯吸头对准试剂槽1，然后向下压中轴，将吸头插入孔内的液体内，抽拉注射器，对孔内的液体进行吹吸混匀后，静置10分钟，待测样本内的细胞裂解，核酸被释放到液体内，磁珠在结合液的作用下，与核酸结合；

2、在试剂槽1底部放置磁铁，对磁珠进行吸附，吸附后，滤芯吸头将试剂槽1内液体吸出，转移至4孔内，与核酸结合的磁珠被保留在试剂槽内；

3、用滤芯吸头将试剂槽2孔内的洗涤液1全部加入到试剂槽1孔内，移走磁铁，用滤芯吸头对孔内液体进行吸吹混匀，对磁珠表面结合除核酸外的其他杂质进行清洗；

4、清洗后，将磁铁放置在试剂槽1的底部，对磁珠进行吸附，吸附后，滤芯吸头将试剂槽1内液体吸出，转移至试剂槽2内；

5、用滤芯吸头将试剂槽3孔内的洗涤液2全部加入到试剂槽1内，移走磁铁，用滤芯吸头进行吸吹混匀，将磁珠表面结合除核酸外的其他杂质进行二次清洗；

6、清洗后，将磁铁放置在试剂槽1的底部，对磁珠进行吸附，吸附后，滤芯吸头将试剂槽1内液体吸出，转移至试剂槽3内；

7、用滤芯吸头将试剂槽5内的洗脱全部加入到试剂槽1内，移走磁铁，用滤芯吸头对孔内液体进行吸吹混匀，将磁珠表面结合的核酸洗脱；

8、洗脱后，将磁铁放置在试剂槽1的底部，对磁珠进行吸附，吸附后，滤芯吸头将试剂槽1内液体吸出，转移至试剂槽5内，试剂槽5内的液体包含了提取和纯化后的核酸，可用于荧光定量pcr检测；

9、利用滤芯吸头，从试剂槽5中分别取10μl的纯化的核酸溶液，加入到每个pcr管内(注意吸头不能插入到pcr管内的液体内)；

10、然后利用滤芯吸头，从试剂槽6中分别取50μl的矿物油，加入到每个pcr管内(注意吸头不能插入到pcr管内的液体内)，完成pcr反应体系的制备；

11、将卡盒放置于与之配套的荧光定量pcr检测仪的热井内，开始进行荧光定量pcr的检测。

这套机构可以让吸头在密的盒体内，可对不同试剂槽和pcr管内的液体进行转移。卡盒可用于没有分子诊断实验室环境下的核酸提取和荧光pcr检测，具有结构紧凑、易于操作、环境容忍度高、可检测多个指标等优点。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。