本发明涉及农业领域，尤其涉及一种金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法。
背景技术：
鱼是我国重要的水产资源之一，其产量居世界首位。但是，许多鱼加工过程仅局限在对鱼体肌肉的利用，而对鱼内脏、鱼骨、鱼头等副产品的加工利用较少，一般作为废弃物处理。我国综合利用鱼下脚料的整体水平还不高，往往含有较高蛋白质和脂肪含量的副产品没有得到合理有效的发挥，这不仅造成了资源的浪费，而且污染了环境，所以如何有效利用这些资源，变废为宝，将是一个非常重要的研究课题。海产鱼油中含有丰富的多不饱和脂肪酸，其主要成分是epa和dha，多不饱和脂肪酸具有抗炎、抗血栓、抗肿瘤以及促进大脑发育、增强记忆力等多种生理调节功能。国内目前提取鱼油大多采用皂化法、分子蒸馏法、尿素包合法、co2法等单一方法提取鱼油，在纯度及出油率方面都存在各自的缺点；另外国际上加工出的鱼油脱腥问题也没有得到很好的解决。因此，如何能充分利用这些鱼下脚料，最大程度的从中提取高质量的油脂、提高鱼类加工的附加值、减少对环境污染成为当今重要的课题。
技术实现要素：
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法，包括：
步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚料0.5-2倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；
用氯化钠配置质量浓度为0.3-0.5g/ml的盐水，将盐水加热至25-30℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:5-8；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；
步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为30-35℃，ph值为2-3，一次酶解时间为9-10小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2-2.5％，得到一次酶解液；
步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为1-2h，二氧化碳气体的流量为4-5m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1-2m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为55-60kv/cm，频率为100-150hz，脉冲宽度为20-25μs，处理时间为5-10s；
步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置30-60min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为40-45℃，ph值为8-9，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的2-3％，二次酶解时间为3-4小时，得到二次酶解液；
步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为2-3％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的65-70％，静置20-23小时；
步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为8000-9000r/min，离心处理的时间为26-33min。
优选的是，所述的金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法中，所述步骤2)中，在一次酶解过程中，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为1.5-2.5m/s，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为800-950khz。
优选的是，所述的金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法中，所述步骤4)中，在二次酶解过程中，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为3.5-5.5m/s，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为650-700khz。
优选的是，所述的金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法中，所述步骤4)中，所述中性蛋白酶为由胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为4-5:1-2:0.5-1。
优选的是，所述的金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法中，所述步骤4)中，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为4:1:0.5。
优选的是，所述的金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法中，所述步骤3)中，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为1h，二氧化碳气体的流量为4m/s，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1m/s。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明提供的一种金枪鱼下脚料的酶解和电场复合处理方法，包括：步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚料0.5-2倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；用氯化钠配置质量浓度为0.3-0.5g/ml的盐水，将盐水加热至25-30℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:5-8；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为30-35℃，ph值为2-3，一次酶解时间为9-10小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2-2.5％，得到一次酶解液；步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为1-2h，二氧化碳气体的流量为4-5m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1-2m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为55-60kv/cm，频率为100-150hz，脉冲宽度为20-25μs，处理时间为5-10s；步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置30-60min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为40-45℃，ph值为8-9，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的2-3％，二次酶解时间为3-4小时，得到二次酶解液；步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为2-3％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的65-70％，静置20-23小时；步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为8000-9000r/min，离心处理的时间为26-33min。
本发明对金枪鱼下脚料所制备的浆状物进行一次酶解、高压脉冲电场处理、二次酶解，一方面提高了对鱼油的提取率，另一方面减少了对epa和dha的破坏，提高了二者最终在鱼油中的含量；并且在一次酶解和二次酶解的过程中同时采用超声波处理，以提高酶解的效率，最终提高了鱼油的提取率。
本发明提高了对鱼油的提取率，提高了epa和dha在鱼油中的含量。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
实施例1
步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚料0.5倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；
用氯化钠配置质量浓度为0.3g/ml的盐水，将盐水加热至25℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:5；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；
步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为30℃，ph值为2，一次酶解时间为9小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2％，在一次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为800khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为1.5m/s，得到一次酶解液；
步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为1h，二氧化碳气体的流量为4m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为55kv/cm，频率为100hz，脉冲宽度为20μs，处理时间为5s；
步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置30min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为40℃，ph值为8，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的2％，二次酶解时间为3小时，在二次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为650khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为3.5m/s，得到二次酶解液；其中，所述中性蛋白酶为由胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为4:1:0.5；
步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为2％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的65％，静置20小时；
步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为8000r/min，离心处理的时间为26min；
步骤7)用所述步骤6)处理得到的鱼油中加入活性炭，所述活性炭的加入量为所述步骤6)处理得到的鱼油质量的3％；再采用离心设备将活性炭分离，从而得到鱼油。
实施例2
步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚料2倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；
用氯化钠配置质量浓度为0.5g/ml的盐水，将盐水加热至30℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:8；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；
步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为35℃，ph值为3，一次酶解时间为10小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2.5％，在一次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为950khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为2.5m/s，得到一次酶解液；
步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为2h，二氧化碳气体的流量为5m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为2m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为60kv/cm，频率为150hz，脉冲宽度为25μs，处理时间为10s；
步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置60min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为45℃，ph值为9，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的3％，二次酶解时间为4小时，在二次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为700khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为5.5m/s得到二次酶解液；其中，所述中性蛋白酶为由胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为5:2:1；
步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为3％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的70％，静置23小时；
步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为9000r/min，离心处理的时间为33min；
步骤7)用所述步骤6)处理得到的鱼油中加入活性炭，所述活性炭的加入量为所述步骤6)处理得到的鱼油质量的4％；再采用离心设备将活性炭分离，从而得到鱼油。
实施例3
步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚2倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；
用氯化钠配置质量浓度为0.3g/ml的盐水，将盐水加热至25℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:6；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；
步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为35℃，ph值为3，一次酶解时间为10小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2.5％，在一次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为950khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为1.5m/s，得到一次酶解液；
步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为2h，二氧化碳气体的流量为4m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为56kv/cm，频率为120hz，脉冲宽度为22μs，处理时间为8s；
步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置30min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为43℃，ph值为8，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的2％，二次酶解时间为3小时，在二次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为650khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为4m/s，得到二次酶解液；其中，所述中性蛋白酶为由胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为5:2:0.5；
步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为3％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的70％，静置23小时；
步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为8500r/min，离心处理的时间为26min；
步骤7)用所述步骤6)处理得到的鱼油中加入活性炭，所述活性炭的加入量为所述步骤6)处理得到的鱼油质量的3％；再采用离心设备将活性炭分离，从而得到鱼油。
实施例4
步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚料2倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；
用氯化钠配置质量浓度为0.3g/ml的盐水，将盐水加热至25℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:5；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；
步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为35℃，ph值为3，一次酶解时间为10小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2.5％，在一次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为900khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为2m/s，得到一次酶解液；
步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为1h，二氧化碳气体的流量为4m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为55kv/cm，频率为130hz，脉冲宽度为20μs，处理时间为8s；
步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置40min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为43℃，ph值为8，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的2％，二次酶解时间为3小时，在二次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为680khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为3.5m/s，得到二次酶解液；其中，所述中性蛋白酶为由胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为4:1:1；
步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为3％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的70％，静置23小时；
步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为9000r/min，离心处理的时间为33min；
步骤7)用所述步骤6)处理得到的鱼油中加入活性炭，所述活性炭的加入量为所述步骤6)处理得到的鱼油质量的4％；再采用离心设备将活性炭分离，从而得到鱼油。
实施例5
步骤1)用清水将金枪鱼下脚料清洗干净，打碎，加入相当于所述金枪鱼下脚料2倍的水混合成浆状物，将所述浆状物搅拌均匀；
用氯化钠配置质量浓度为0.5g/ml的盐水，将盐水加热至30℃，将盐水加入至所述浆状物中，所述盐水和所述浆状物的质量比为1:8；对加入盐水的浆状物进行持续地搅拌，使所述浆状物与盐水混合均匀；静置备用；
步骤2)向所述步骤1)制备得到的浆状物中加入胃蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为35℃，ph值为3，一次酶解时间为10小时，其中，所述胃蛋白酶的加入量为所述步骤1)制备得到的浆状物质量的2.5％，在一次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为870khz，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为2.5m/s，得到一次酶解液；
步骤3)将经过所述步骤2)处理得到的一次酶解液置于一容器内，向所述一次酶解液中持续通入二氧化碳气体，通入二氧化碳气体的时间为2h，二氧化碳气体的流量为4.5m/s，之后将所述容器置于高压脉冲电场中进行处理，在所述高压脉冲电场处理过程中，继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量为1m/s，在所述高压脉冲电场处理结束之后，还继续通入二氧化碳气体，二氧化碳气体的流量与所述高压脉冲电场处理过程中的流量保持一致，所述高压脉冲电场的电场强度为55kv/cm，频率为100hz，脉冲宽度为20μs，处理时间为5s；
步骤4)将所述步骤3)处理得到的料液放置30-60min，再加入中性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为45℃，ph值为9，所述中性蛋白酶的加入量为所述步骤3)处理得到的料液质量的3％，在二次酶解过程中，同时进行超声波处理，所述超声波处理的超声频率为700khz，二次酶解时间为4小时，同时向所述浆状物中持续通入氮气，氮气的流量为3.5m/s，得到二次酶解液；其中，所述中性蛋白酶为由胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的质量比为5:2:1；
步骤5)向所述二次酶解液中加入质量浓度为3％的盐酸，将所述二次酶解液的ph调节至4-5，继续加入无水乙醇，所述无水乙醇在所述二次酶解液中的加入量为所述二次酶解液体积的70％，静置23小时；
步骤6)将所述步骤5)制备得到的料液置于离心设备中进行离心分离，离心转数为8800r/min，离心处理的时间为26min；
步骤7)用所述步骤6)处理得到的鱼油中加入活性炭，所述活性炭的加入量为所述步骤6)处理得到的鱼油质量的3％；再采用离心设备将活性炭分离，从而得到鱼油。
效果验证：
采用实施例1至实施例5的方法对金枪鱼鱼油进行提取。其中，每个实施例处理1000g金枪鱼下脚料。实施例1至实施例5所提取的鱼油的指标见表1。本发明提高了对金枪鱼鱼油的提取率，提高了epa和dha在鱼油中的含量。
表1
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。