本发明涉及功能食品领域，具体地说，涉及一种羊乳乳清蛋白免疫调节肽与其复配物及其应用。
背景技术：
：目前，随着社会的发展，环境污染、社会压力、人口老龄化等问题日益严重。在这些因素的影响下，机体就会不可避免地出现免疫力下降的现象，从而引发一系列的健康问题。近年来，乳源免疫活性肽备受关注。乳源免疫活性肽是利用蛋白酶水解乳蛋白分离得到的短肽，它是继吗啡肽之后在乳蛋白中发现的第二类生物活性肽。羊乳具有天然的食品营养特性，羊乳蛋白富含多种生物活性序列，研究表明，从羊乳蛋白中分离得到的肽段具有抑菌降血压、抗氧化、抑制dpp-4等多种生物活性。目前，羊乳蛋白肽的制备及应用得到了广泛的研究。如陈合等在中国专利201310132352.8中公布了一种含ace抑制肽羊乳饮料的制备方法；李志成等在中国专利201410247225.7中公布了一种山羊乳酪蛋白源抗菌肽的制备方法。目前，关于酶水解羊乳蛋白的专利技术大多是以酪蛋白为原料，对于乳清蛋白却少有涉及。而与酪蛋白相比，乳清蛋白溶解性更好、致敏性更低，因此更适合用于活性肽的制备。另外，羊乳蛋白水解后，疏水性氨基酸基团暴露，会带有一定程度的苦味，因此需要对其进行脱苦处理。目前，常用的脱苦方法是活性炭吸附法，但是这会造成多肽中功能成分的损失。此外，多肽中含有氨基基团，易与碳水化合物发生美拉德反应，降低其生物活性、改变食品色泽，从而限制了其在食品领域中的应用。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是，针对上述现有技术的不足，提供一种羊乳乳清蛋白免疫调节肽与其复配物及其应用。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明之羊乳乳清蛋白免疫调节肽，由以下步骤制备而成：1)将羊乳乳清蛋白加水溶解后，调节ph值为5.0～7.0，然后加入蛋白酶，采用超声波处理后，使羊乳乳清蛋白和蛋白酶在40～60℃条件下进行酶解反应；其中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶；2)步骤1)中所述酶解反应进行3～5h后，升高温度至70～90℃，保持10～20min，其中的蛋白酶失活；冷却后，离心除去杂质，保留上清液；3)调节步骤2)所得上清液ph值至6.0～8.0，并通过截流分子量为10kda的超滤膜，收集滤过液，得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽。进一步，步骤1)中，羊乳乳清蛋白的质量与水的体积的比例为1:15～30，单位为g/ml或kg/l；所述蛋白酶按照每100g羊乳乳清蛋白200～800ku蛋白酶的比例加入，1u定义为40℃下每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸的量；所用超声波条件为：频率15～30khz，功率700～900w，时间5～10min。进一步，步骤1)和步骤3)中，调节ph值所用碱液为食品级碳酸钠或碳酸氢钠溶液中的任意一种，所用酸液为食品级乳酸或柠檬酸溶液中的任意一种。本发明之羊乳乳清蛋白免疫调节肽在具有免疫调节活性的食品或保健食品(如饼干、蛋糕、饮料等)中的应用。本发明之羊乳乳清蛋白免疫调节肽的复配物，由以下步骤制备而成：向上述所得的羊乳乳清蛋白免疫调节肽中加入香菇多糖、海参多糖、壳寡糖、人参皂苷、咖啡绿原酸或葛根黄酮，在20～50℃下水浴振荡20～30min，冷冻干燥，即得羊乳乳清蛋白免疫调节肽与不同活性物质的复配物。进一步，所述羊乳乳清蛋白免疫调节肽与香菇多糖、海参多糖、壳寡糖、人参皂苷、咖啡绿原酸或葛根黄酮的质量比例为5～10:1。本发明之羊乳乳清蛋白免疫调节肽的复配物在具有免疫调节活性的食品或保健食品(如饼干、蛋糕、饮料等)中的应用。本发明的有益效果：1.本发明在水解之前采用超声波对羊乳乳清蛋白与蛋白酶的混合物进行处理，可提高蛋白酶的催化活性，有利于活性肽段更好地释放。2.本发明将羊乳乳清蛋白免疫调节肽与香菇多糖、海参多糖、壳寡糖、人参皂苷、咖啡绿原酸或葛根黄酮进行复配，可提高其免疫调节活性。3.采用本发明制备得到的微囊化羊乳乳清蛋白免疫调节肽及其复配物食用安全性高、无副作用、吸收效果好，具有非常好的免疫调节活性。具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1本实施例之羊乳乳清蛋白免疫调节肽，由以下步骤制备而成：称取15g羊乳乳清蛋白，溶于300ml水中，在50℃水浴下调节ph至6.0，加入木瓜蛋白酶30ku，在频率为20khz、功率为750w条件下超声处理5min；然后在保持温度、ph值不变的条件下酶解3h，所得酶解液升温至85℃，保持10min；待酶解液冷却后于4500r/min离心20min，取上清液，调节上清液ph值至7.0，通过截留分子量为10kda的超滤膜，收集滤过液，得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液，干燥得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽粉。实施例2本实施例之羊乳乳清蛋白免疫调节肽，由以下步骤制备而成：称取10g羊乳乳清蛋白，溶于300ml水中，在60℃水浴下调节ph至7.0，加入木瓜蛋白酶30ku，在频率为20khz、功率为750w条件下超声处理10min；然后在保持温度、ph值不变的条件下酶解3h；所得酶解液升温至90℃，保持15min；待酶解液冷却后于5000r/min离心15min，取上清液，调节上清液ph值至6.0，通过截留分子量为10kda的超滤膜，收集滤过液，得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液，干燥得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽粉。实施例3本实施例之羊乳乳清蛋白免疫调节肽-香菇多糖复配物,由以下步骤制备而成：称取10g羊乳乳清蛋白，溶于200ml水中，在60℃水浴下调节ph至7.0，加入木瓜蛋白酶40ku，在频率为30khz、功率为800w条件下超声处理10min；然后在保持温度、ph值不变的条件下酶解4h；所得酶解液升温至90℃，保持15min；待酶解液冷却后于4500r/min离心15min，取上清液，调节上清液ph值至7.0，通过截留分子量为10kda的超滤膜，收集滤过液，得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液；向羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液中加入2g香菇多糖，在30℃下水浴振荡20min，干燥得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽-香菇多糖复配物。实施例4本实施例之羊乳乳清蛋白免疫调节肽-人参皂苷复配物,由以下步骤制备而成：称取15g羊乳乳清蛋白，溶于300ml水中，在50℃水浴下调节ph至6.0，加入木瓜蛋白酶50ku，在频率为20khz、功率为800w条件下超声处理5min；然后在保持温度、ph值不变的条件下酶解5h；所得酶解液升温至85℃，保持10min；待酶解液冷却后于5000r/min离心15min，取上清液，调节上清液ph值至7.0，通过截留分子量为10kda的超滤膜，收集滤过液，得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液；向羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液中加入3g人参皂苷，在20℃下水浴振荡30min，干燥得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽-人参皂苷复配物。实施例5本实施例之羊乳乳清蛋白免疫调节肽-咖啡绿原酸复配物,由以下步骤制备而成：称取20g羊乳乳清蛋白，溶于400ml水中，在60℃水浴下调节ph至7.0，加入木瓜蛋白酶100ku，在频率为30khz、功率为700w条件下超声处理10min；然后在保持温度、ph值不变的条件下酶解3h，所得酶解液升温至90℃，保持10min；待酶解液冷却后于5000r/min离心20min，取上清液，调节上清液ph值至7.0，通过截留分子量为10kda的超滤膜，收集滤过液，得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液；向羊乳乳清蛋白免疫调节肽溶液中加入2g咖啡绿原酸，在40℃下水浴振荡30min，干燥得到羊乳乳清蛋白免疫调节肽-咖啡绿原酸复配物。含有羊乳乳清蛋白免疫调节肽的饼干的制备过程所用配料为：3份实施例1所得羊乳乳清蛋白免疫调节肽，50份面粉，9份鸡蛋液，10份花生油，10份白砂糖，1份小苏打，1份食用盐，10份水。先将羊乳乳清蛋白免疫调节肽与面粉混合均匀，加入鸡蛋液、花生油、白砂糖、小苏打、食用盐、水，调制成面团。将面团静置20min后辊轧成型。将成型后的饼干放入烤箱，上火180℃，下火180℃焙烤5min。冷却后即得含有微囊化羊乳乳清蛋白免疫调节肽的饼干。含有羊乳乳清蛋白免疫调节肽-香菇多糖复配物的蛋糕的制备过程所用配料为：8份实施例3所得羊乳乳清蛋白免疫调节肽-香菇多糖复配物，90份蛋糕专用粉，90份鸡蛋液，8份白砂糖，1份食盐。先将鸡蛋液与白砂糖放入打蛋器中预混，再加入食盐，快速搅打，直至混合物为乳白色，体积达到原来的3倍。将蛋糕专用粉与羊乳乳清蛋白免疫调节肽-香菇多糖复配物混匀，加入到打发的蛋糊中，搅拌成均匀的面糊。向焙烤模具中注入调制好的面糊，放入烤箱，调节上火为180℃，下火为180℃，烘烤25min。取出烘烤好的蛋糕，冷却至室温，即得含有羊乳乳清蛋白免疫调节肽-香菇多糖复配物的饼干。含有羊乳乳清蛋白免疫调节肽-咖啡绿原酸复配物的饼干的制备过程所用配料为：9份实施例5所得羊乳乳清蛋白免疫调节肽-咖啡绿原酸复配物，100份面粉，1.5份食盐，3份白砂糖，3份酵母，60份水。将所有配料混合均匀，揉成面团。将面团在温度为30℃、相对湿度为70％条件下发酵120min。发酵面团用整型机整型后在温度为40℃、相对湿度为80％条件下醒发50min。最后放入烘烤炉中，调节温度为200℃，烘烤25min，冷却后即得含有羊乳乳清蛋白免疫调节肽-咖啡绿原酸复配物的饼干。含有羊乳乳清蛋白免疫调节肽-人参皂苷复配物的饮料的制备过程所用配料为：3份实施例4所得羊乳乳清蛋白免疫调节肽-人参皂苷复配物、25份浓缩苹果果汁、5份白砂糖、1份柠檬酸、0.5份稳定剂、25份纯净水。将所有配料混合均匀，在温度35℃、压力20mpa条件下均质，85℃灭菌15min，迅速罐装，冷却后即得成品。试验例1羊乳乳清蛋白免疫调节肽对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响：将5周龄雄性c57bl/6j小鼠颈椎脱臼处死，在无菌条件下取下脾脏，在rpmi-1640培养基中磨碎，过200目不锈钢筛网，得细胞悬液。细胞悬液在1000r/min条件下离心5min，弃去上清液，收集细胞。用含血清得完全rpmi-1640培养基调整细胞密度味2×106个/ml。在96孔细胞培养板中加入脾细胞悬浮液。实验组添加终浓度5.0μg/ml的cona和终浓度为1.0mg/ml的实施例1所得羊乳乳清蛋白免疫调节肽(终浓度分别为0.25，0.5，1.0mg/ml)，阳性对照组添加10μlcona(终浓度5.0μg/ml)，阴性对照组添加终浓度为1.0mg/ml的实施例1所得羊乳乳清蛋白免疫调节肽。细胞孵育48h后，每孔加入20μlmtt(浓度5mg/ml)，继续培养4h后，小心吸去上清，每孔加入150μldmso，于570nm处检测od值。按公式1计算刺激指数(si)。si值越大说明免疫调节活性越强。公式1：si＝(od样品-od阴性对照)/(od阳性对照-od阴性对照)实验结果见表1。表1不同浓度羊乳乳清蛋白免疫调节肽对cona诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响si0.25mg/ml免疫调节肽处理组1.37±0.05c0.5mg/ml免疫调节肽理组1.82±0.04b1.0mg/ml免疫调节肽处理组2.24±0.06a注：数值以平均值±标准差的形式表示；不同字母代表具有显著性差异，p<0.05。采用0.25，0.5，1.0mg/ml羊乳乳清蛋白免疫调节肽处理后，cona诱导的小鼠脾淋巴细胞si值分别提高至1.37±0.05，1.82±0.04，2.24±0.06。表明本发明制备的羊乳乳清蛋白免疫调节肽对小鼠脾淋巴细胞增殖活性具有非常明显的促进作用，且呈现出一定的剂量依赖效应。当前第1页12