本发明属于化学医药领域，具体涉及一种具有ido激酶抑制活性的二氮杂并咔唑类化合物，以及含有该化合物的药物组合物和该化合物或组合物在药物制备中的应用。
背景技术：
：吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)是肝脏以外唯一催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶，已被证实与肿瘤、阿尔兹海默病、抑郁症和老年性白内障等多种人类重大疾病密切相关，而ido得表达或活性的异常增高，是导致上述疾病的一个重要因素，因此，筛选高效的ido抑制剂可以为这些疾病提供有效治疗药物。近年来，研究证实ido在多种实体瘤中如肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤组织中表达明显增强，且与预后密切相关。因此，使用ido抑制剂可能成为一种治疗肿瘤的有效方法。因此，开发ido抑制剂具有广阔的临床应用前景。技术实现要素：本发明的一个目的在于提供具有ido激酶抑制活性的式(i)所示化合物的枸橼酸盐或其溶剂合物、结晶或前药，所述化合物具有良好的溶解性和稳定性，为剂型研究提供了更好的选择，本发明的另一个目的在于提供含有式(i)所示化合物的枸橼酸盐或其溶剂合物、结晶或前药和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的再一个目的在于提供式(i)所示化合物的枸橼酸盐或其溶剂合物、结晶或前药或其药物组合物在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。针对上述目的，本发明提供以下技术方案：第一方面，本发明提供式(i)所示化合物的枸橼酸盐或其溶剂合物、结晶或前药，根据本发明，所述式i化合物与枸橼酸的摩尔比为1:0.5-1，优选地，所述式i化合物与枸橼酸的摩尔比为1:0.9-1。根据本发明，所述式i化合物的枸橼酸盐结构如式ii所示：第二方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明式(i)所示化合物的枸橼酸盐或其溶剂合物、结晶或前药和药学上可接受的载体。可以将本发明式(i)所示化合物的枸橼酸盐、溶剂合物、结晶或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。第三方面，本发明提供本发明式(i)所示化合物的枸橼酸盐、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用，包括向肿瘤易发人群或肿瘤患者施用本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物，以有效降低肿瘤发生率、延长肿瘤患者生命。具体实施方式下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。实施例11-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-乙氧羰基)苯基脲步骤12-溴-3-((3-氧代环己-1-烯-1-基)氨基)苯甲酸甲酯的合成称取3.58g3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯、1.68g环己烷-1,3-二酮于反应瓶中，加入乙酸20ml溶解，80℃反应8h，反应结束后，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝325。步骤24-氧代-2,3,4,9-四氢-1h-咔唑-5-羧酸甲酯的合成称取1.62g步骤1所得物、0.23g乙酸钯、1.22g三(邻甲苯基)膦和0.63g三乙胺于密封管中，加入乙腈15ml，氮气氛围下100℃密封反应20小时，反应结束后，冷却，加入水15ml稀释，二氯甲烷萃取(50ml*3)，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝244。步骤32,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮的合成称取0.73g步骤2所得物、1.5ml乙酸和8.6ml水合肼于反应瓶中，加入甲醇40ml，回流反应8小时，趁热过滤，水、乙酸乙酯和二氯甲烷洗涤，得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝226。步骤410-(2-叔丁氧羰基氨基)乙基-2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮称取10gn-叔丁氧羰基氨基乙醇和23.96gtscl于反应瓶中，加入吡啶50ml溶解，室温反应过夜，反应结束后，减压蒸除吡啶，加水20ml，乙酸乙酯萃取(50ml*3)，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化得(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙醇-(4-甲苯磺酸)酯。称取0.67g步骤3所得物和0.3gnah于反应瓶中，加入10mldmf溶解，45℃反应2h后，加入2.81g所得(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙醇-(4-甲苯磺酸)酯，室温搅拌16h，反应结束后，加水10ml，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，柱层析纯化得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝369。步骤510-氨乙基-2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮的合成称取1.0g步骤4所得物于反应瓶中，加入二氯甲烷15ml溶解，室温搅拌下加入10ml三氟乙酸，反应5h，反应结束后，减压蒸除溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液至ph至8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤干燥得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝269。步骤64-氨基苯甲酸乙酯的制备量取10ml乙醇于反应瓶中，加入0.4g3-氨基苯甲酸，搅拌溶解后，0℃下缓慢滴加二氯亚砜，滴毕，升至室温搅拌反应8h，反应结束后，减压蒸除溶剂，饱和碳酸氢钠溶液调节ph至7-8，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物，用于投下一步。步骤71-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-乙氧羰基)苯基脲的合成称取0.40g步骤6所得物于反应瓶中，加30ml体积比为1:1的二氯甲烷/饱和碳酸氢钠水溶液的混合溶剂，0℃、搅拌下加入0.22g三聚光气，0℃下继续反应30min，反应结束后，分液，收集有机层，干燥后，加入10ml二氯甲烷溶解后，加入0.15g步骤5所得物，0℃下继续搅拌10h，反应结束后，柱层析纯化得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):7.88-7.86(m,2h),7.80-7.77(m,3h),7.59-7.57(m,1h),7.54-7.53(m,1h),7.38(m,1h),7.24-7.21(m,2h),4.69-4.67(m,2h),4.30-4.29(m,2h),3.65-3.63(m,2h),2.78-2.76(m,2h),2.10-2.08(m,2h),1.89-1.87(m,2h),1.31-1.29(m,3h)。lc-msm/z:[m+h]+＝460。实施例21-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-乙氧羰基)苯基脲枸橼酸盐的合成称取1.0g实施例1化合物于反应瓶中，加入20ml氯仿溶解，加入0.42g枸橼酸，室温搅拌3h，减压蒸除溶剂，得标题化合物。实施例31-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-乙氧羰基)苯基脲枸橼酸盐的合成称取1.0g实施例1化合物于反应瓶中，加入20ml氯仿溶解，加入0.21g枸橼酸，室温搅拌3h，减压蒸除溶剂，得标题化合物。实验例1稳定性实验称取0.5g实施例2化合物3份，分别在光照4500lx条件下，rh70％60℃条件下和rh70％室温条件下放置1个月，hplc检测有效成分含量见表1。表1实验结果表明，本发明实施例2化合物具有非常高的稳定性。实验例2溶解度实验溶解度测定结果见表2。表2实验例3体外酶活性评价建立ido1/2酶活性抑制分子筛选模型，检测阳性对照药epacadostat(incb024360)在此模型上的抑制ic50值，结果表明epacadostat对ido1的ic50值为90nm左右，对ido2的ic50值为3.0um左右，与文献报道相近，说明筛选模型构建成功。在室温环境下，将40nm的ido酶及900um的l-色氨酸混合，并加入反应缓冲液(20mmascorbate,3.5ummethyleneblueand0.2mg/mlcatalasein50mmpotassiumphosphatebufferph6.5)，在室温反应3小时，然后在酶标仪上进行紫外测定，检测波长为321nm。酶活性百分率(％)＝(od值给药孔－od值本底)/(od值对照孔－od值本底)×100％，然后用prismgraphpadsofeware软件拟合计算ic50值，结果见表1.表1化合物ido1(nm)ido2(um)epacadostat903.0实施例1化合物860.8实施例2化合物800.8从以上实验结果可以看出，本发明的化合物对ido1和ido2激酶具有较好的抑制活性。实验例4本发明化合物的体外细胞活性评价采用磺酰罗丹明b(srb)比色法，将对数生长期的ht29人结肠癌细胞吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板(5x103细胞/孔)，每孔加入培养基200μl，于37℃、5％co2培养箱中培养过夜；待细胞贴壁后，加入适当浓度的受试化合物和阳性对照药后在培养箱中再培养72小时。加入10％三氯醋酸后于4℃下固定1小时。用双蒸水洗涤5次，干燥后，每孔加入70微升srb溶液(4mg/ml)，室温染色20分钟，1％醋酸洗涤5次，干燥。每孔加入100μl10mmtris-base溶液使srb溶解。酶标仪检测各孔od值，记录结果，按下列公式计算抑制率：抑制率(％)＝(od对照－od给药)/od对照×100％，并计算ic50。结果见表2。表2化合物ht29细胞ic50值epacadostat50.1实施例1化合物20.5实施例2化合物15.4从以上实验结果可以看出，本发明的化合物对结肠癌细胞具有较高的抑制活性。尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。当前第1页12