本发明涉及有机合成药物
技术领域：
，具体是指取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物及其制备方法和用途。
背景技术：
：氨酰trna合成酶(aminoacyl-trnasynthetase,aars)在蛋白质合成过程中扮演着重要的作用。它们负责催化对应的氨基酸羧基与相应的trna3′端腺苷酸核糖上的羟基发生酯化反应，使trna氨基酰化，产生的氨基酰-trna是生物体在核糖体合成蛋白质的原料。反应的机制是，合成酶首先结合atp和相应的氨基酸(或者它的前体)，形成一个腺苷酸，释放无机焦磷酸盐(ppi)。然后氨基酸-氨酰化trna合成酶复合物结合到相应的trna分子上，aa-amp上氨基酸被转运到trna(a76)3′端的2'-或3'-oh。近年来随着生命科学和技术手段的飞速发展，人们对生物体内经典的生物大分子是否具有新功能提出了许多疑问，并成为研究的热点之一。而作为一个古老的酶家族：trna合成酶，人们并不想局限在这些酶的主要和基本功能(帮助将遗传物质翻译为构成蛋白质的氨基酸构件)，并逐渐发现其功能广泛涉及编校、rna剪切与转运、转录与翻译调控、调节dna和氨基酸的生物合成乃至细胞因子等功能。新近研究表明，酪氨酰trna合成酶(tyrrs)在神经退行性疾病具有重要联系，成为氨酰trna合成酶(aars)的主要研究热点之一。例如：storkebaum等人[2]通过引入与人体神经疾病相关的突变酪氨酰-trna合成酶，在果蝇中创建了一个人体神经疾病模型。这些显性突变并不会有损氨酰trna合成酶的蛋白质合成功能，表明神经疾病起源于酪氨酰trna合成酶的非蛋白质合成酶功能。研究表明酪氨酰-trna合成酶的基因中存在与编码神经系统功能有关的基因。wei等人[3]指出tyrrs的作用是识别指定酪氨酸的遗传代码。他们解释了tyrrs还有另一个主要功能：在细胞应激过程中保护dna。首先开始在几种细胞类型中制备不同的压力条件，只有“氧化”应激能够将tyrrs送入细胞核。在细胞核的许多变化中，那些与dna保护和修复相关的基因当中活性激增。将tyrrs排除在细胞核之外，能够阻止这种激增。sajish等人[4]证实了人类细胞中一种进化上古老的应激反应——tyrrs-parp-1信号通路，可以通过白藜芦醇强有力地激活。通过将tyrrs与白藜芦醇放置了在一起，并通过x射线晶体学等试验证实白藜芦醇确实模拟了酪氨酸，其能够紧密地装入到tyrrs的酪氨酸结合口袋中。tyrrs与白藜芦醇结合会使其脱离蛋白质翻译角色，将其引导到细胞核中发挥功能。在细胞核中追踪结合白藜芦醇的tyrrs，研究人员确定它抓住并激活了称作为parp-1的蛋白。parp-1是一种主要应激反应和dna修复因子，人们认为其对寿命具有重大的影响。tyrrs激活parp-1转而导致了一系列保护性基因，包括肿瘤抑制基因p53和长寿基因foxo3a与sirt6活化。近年来在人源tyrrs的这些新发现，使得这一古老的酶家族逐渐成为人们研究的热点。文献中报道tyrrs的抑制剂主要分为两类，一类是以细菌的tyrrs抑制剂，另一类是关于人源tyrrs抑制剂。细菌的tyrrs抑制剂已研究较为全面，并且已经报道了一些典型的抑制剂。人源tyrrs的抑制剂鲜有报道，至今为止只有sajish等人在研究papr-1通路的过程中，偶然发现了白藜芦醇可以模拟tyrrs的天然配体酪氨酸结合到其活性口袋中，起到抑制作用。白藜芦醇是目前发现的人源tyrrs唯一抑制剂，其ki值为22μm。因此，开发高活性和选择性的tyrrs抑制剂是当今国内外抗衰老和dna修复药物开发的研究热点。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种人源化，且作为高活性和选择性的tyrrs抑制剂进行使用的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物。本发明的另一个目的在于提供一种上述取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物的制备方法。本发明还有一个目的在于提供一种活性较高，选择性强，类药性显著的tyrrs抑制剂以及相应抗衰老的dna修复药物。本发明提供一种丙烯酰胺类衍生物，其通式如下：其中，x为独立的碳、氮、氧或硫；y为独立的x-r1或h；r1和r2为独立的h、苯环、五元芳杂环、六元芳杂环或五元饱和环、六元饱和环、卤素、苯环或苯环取代物、其具体合成路线如下：根据其合成路线可知，本发明使用5,7-二羟基黄酮作为初始原料，通过合成中间体1a，得到目的化合物1-12；通过合成中间体13a，进一步合成中间体13b，合成目的化合物14-22，并根据目的化合物14-22与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，制得目的化合物23-31。制备得到的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物能够激活tyrrs-parp-1信号通路，使得tyrrs激活parp-1转而导致了一系列保护性基因，包括肿瘤抑制基因p53和长寿基因foxo3a与sirt6活化。使用苯硫酚类化合物与取代5,7-二羟基黄酮的18或19位，合成若干该取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物的具体结构式，然后进行针对性的实验测试。本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：本发明合成了一种能够激活tyrrs-parp-1信号通路的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物，并证实了该取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物的一些实施方案中，能够激活tyrrs-parp-1信号通路，使得tyrrs激活parp-1转而导致了一系列保护性基因，包括肿瘤抑制基因p53和长寿基因foxo3a与sirt6活化，对抗衰老和dna修复药物具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择；同时，本发明提供的新化合物的制备方法简便，反应条件温和，便于操作和控制，能耗小，产率高，成本低，可适合产业化生产，制备得到的化合物生物活性较高，具有较高的高活性和选择性，类药性显著，具有广阔的市场前景。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其他特征、目的和优点将会变得更为明显：图1为本发明中采用差示扫描和差示荧光扫描方法测试化合物rsv,7,11andtyrwx-12与tyrrs结合的热位移图；图2为本发明中化合物7和11促进tyrrs在hela细胞中的进入细胞核内的实验结果图；图3为本发明中化合物7和11在顺铂的模型实验中的保护细胞内dna损伤的浓度依赖效果图。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。为使本发明的目的、工艺条件及优点作用更加清楚明白，结合以下实施实例，对本发明作进一步详细说明，此处所描述的具体实施实例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1：本实施例公开第一条合成黄酮衍生物的合成路线，其具体合成方法即：(1)以5,7-二羟基黄酮作为初始原料，在硝酸和醋酸的条件下，加入单质碘，制备中间体1a(5,6-二羟基-6,8-二碘-2-苯基-4氢-色酮)；(2)使用苯硫酚类化合物与中间体1a进行偶联反应从而生成相应的目的化合物。首先，进行5,6-二羟基-6,8-二碘-2-苯基-4氢-色酮(中间体1a)的制备：化合物1a的合成将5,7-二羟基黄酮(5.08g，20mmol)和单质碘(5.76g，20mmol)加入到250ml的单口瓶中，溶剂为20ml的二氯甲烷和20ml的冰醋酸，常温搅拌，与此同时将2g浓硝酸加入10ml的冰醋酸中，用恒压滴液漏斗缓慢的滴加到反应体系中，滴加时间为30分钟。在滴加过程中，溶液变成悬浮液，有黄色固体析出，继续搅拌2个小时。处理反应，先是过滤溶液，用10％的连二亚硫酸钠溶液继续洗涤，然后用水和冰甲醇和乙醚进行洗涤，抽干，得到黄色固体1a。产率为95％。化合物1a的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.50(s,1h),8.04(dd,j＝8.0,1.6hz,2h),7.66–7.58(m,3h),7.28(s,1h).然后进行目的化合物6,8-双((2-溴苯基)硫代)-5,7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物1)的制备：化合物1的合成将2-溴苯硫酚(54ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol)，657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体1，产率为88％。化合物1的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.28(s,1h),11.29(s,1h),7.90(s,2h),7.56(d,j＝41.7hz,5h),7.23(s,3h),7.07(s,2h),6.79(d,j＝33.6hz,2h).esi-msm/z:626.60[m-h]-.实施例2：在上述实施例的基础上进行目的化合物6,8-双((3-溴苯基)硫代)-5,7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物2)的制备：化合物2的合成将3-溴苯硫酚(64ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体2，产率为86％。化合物2的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,cdcl3)δ14.26(s,1h),7.81(d,j＝7.4hz,2h),7.53(dt,j＝14.7,7.1hz,3h),7.36(d,j＝14.4hz,2h),7.33–7.27(m,2h),7.20–7.06(m,4h),6.79(s,1h).esi-msm/z:626.59[m-h]-实施例3：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二羟基-6,8-双((2-甲氧苯基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物3)的制备：化合物3的合成将2-甲氧基苯硫酚(60ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体3，产率为82％。化合物3的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.16(s,1h),10.76(s,1h),7.89(d,j＝6.5hz,2h),7.62–7.43(m,3h),7.19(s,1h),7.15–6.97(m,4h),6.80(d,j＝8.6hz,2h),6.70(d,j＝6.8hz,1h),6.58(d,j＝7.1hz,1h),3.93(s,3h),3.88(s,3h).esi-msm/z:528.84[m-h]-.实施例4：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二羟基-6,8-双((3-甲氧苯基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物4)的制备：化合物4的合成将3-甲氧基苯硫酚(64ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体4，产率为54％。化合物4的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.16(s,1h),10.76(s,1h),7.89(d,j＝6.5hz,2h),7.62–7.43(m,3h),7.19(s,1h),7.15–6.97(m,4h),6.80(d,j＝8.6hz,2h),6.70(d,j＝6.8hz,1h),6.58(d,j＝7.1hz,1h),3.93(s,3h),3.88(s,3h).esi-msm/z:528.84[m-h]-.实施例5：在上述实施例的基础上进行目的化合物6,8-双((4-氟苯基)硫代)-5,7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物5)的制备：化合物5的合成将4-氟苯硫酚(53ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体5，产率为82％。化合物5的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,cdcl3)δ14.18(s,1h),7.82(dd,j＝18.6,6.3hz,2h),7.63–7.41(m,3h),7.31(s,2h),7.11(s,2h),6.97(m,4h),6.77(s,1h).esi-msm/z:504.89[m-h]-.实施例6：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二甲基-2-苯基-6,8-双((对-甲苯基)硫代)-4氢-色烯-4-酮(化合物6)的制备：化合物6的合成将4-甲基苯硫酚(50ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体6，产率为88％。化合物6的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.20(s,1h),10.91(s,1h),7.95(d,j＝7.5hz,2h),7.64–7.58(m,1h),7.53(t,j＝7.4hz,2h),7.19(s,1h),7.09(s,4h),7.03(d,j＝8.2hz,2h),2.23(s,3h),2.20(s,3h).esi-msm/z:497.89[m-h]-.实施例7：在上述实施例的基础上进行目的化合物6,8-双((3-氟苯基)硫代)-5,7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物7)的制备：化合物7的合成将3-氟苯硫酚(42ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体7，产率为88％。化合物7的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.34(s,1h),11.17(s,1h),7.96(d,j＝6.6hz,2h),7.56(dd,j＝20.0,6.3hz,3h),7.30(d,j＝6.3hz,2h),7.23(s,1h),6.95(dd,j＝42.7,25.2hz,6h).esi-msm/z:504.85[m-h]-.实施例8：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二甲基-2-苯基-6,8-双((间-甲苯基)硫代)-4氢-色烯-4-酮(化合物8)的制备：化合物8的合成将2-甲基苯硫酚(58ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后用压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体8，产率为86％。化合物8的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,cdcl3)δ14.14(s,1h),7.91(s,1h),7.72(d,j＝7.5hz,2h),7.51(d,j＝6.9hz,1h),7.44(t,j＝7.3hz,2h),7.19(t,j＝7.1hz,2h),7.14–6.93(m,4h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),6.79(d,j＝7.6hz,1h),6.76(s,1h),2.55(s,3h),2.53(s,3h).esi-msm/z:497.86[m-h]-.实施例9：在上述实施例的基础上进行目的化合物6,8-双((对-叔丁基)苯基)硫代)-5,7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物9)的制备：化合物9的合成将4-叔丁基苯硫酚(88ul，0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体9，产率为76％。化合物9的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,cdcl3)δ14.13(s,1h),8.09(s,1h),7.79(d,j＝7.5hz,2h),7.58–7.50(m,1h),7.47(d,j＝7.6hz,2h),7.28(m,3h),7.25–7.13(m,5h),6.75(s,1h),1.27(s,9h),1.25(s,9h).esi-msm/z:581.03[m-h]-.实施例10：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二羟基-2-苯基-6,8-二(吡啶-4-基硫基)-4h-色烯-4-酮(化合物10)的制备：化合物10的合成将吡啶-4-硫醇(0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体10，产率为86％。化合物10的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.35(s,1h),11.94(s,1h),8.27(s,4h),7.87(d,j＝7.3hz,2h),7.50(dd,j＝12.9,7.1hz,3h),7.13(s,2h),7.05(s,2h),6.91(s,1h).esi-msm/z:410.88[m-h]-.实施例11：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二羟基-6,8-双((3-羟基苯基)硫代)-2-苯基-4h-色烯-4-酮(化合物11)的制备：化合物11的合成将3巯基苯酚(0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体11，产率为83％。化合物11的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.19(s,1h),10.96(s,1h),9.34(s,1h),9.31(s,1h),7.90(d,j＝7.4hz,2h),7.54(d,j＝7.3hz,1h),7.49(t,j＝7.3hz,2h),7.01(dd,j＝16.0,8.0hz,3h),6.61(d,j＝8.0hz,1h),6.54–6.49(m,2h),6.44(s,3h).m/z:500.85[m-h]-.实施例12：在上述实施例的基础上进行目的化合物5,7-二羟基-6,8-双((2-羟基苯基)硫基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮(化合物12)的制备：化合物12的合成将2-巯基苯酚(0.5mmol)，1a(127mg，0.25mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体12，产率为82％。化合物12的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.13(s,1h),10.36(s,3h),7.99(d,j＝7.3hz,2h),7.60(s,1h),7.54(d,j＝7.6hz,2h),7.14(s,1h),6.98(d,j＝6.8hz,2h),6.90–6.57(m,6h).esi-msm/z:500.88[m-h]-.实施例13：本实施例公开第二条合成黄酮衍生物的合成路线，其具体合成方法即：(1)以5,7-二羟基黄酮作为初始原料，以dmf为溶剂，加入碘甲烷和碳酸钾，制备中间体13a(5,6-二甲氧基黄酮)；(2)再以三氟乙酸为溶剂，在中间体13a加入nis，在冰醋酸条件下加热回流，制备得到中间体13b(8-碘-5,7-二甲氧基黄酮)；(3)使用苯硫酚类化合物与中间体13b(8-碘-5,7-二甲氧基黄酮)进行偶联反应从而生成相应的目的化合物；首先，进行5,6-二甲氧基黄酮(中间体13a)的制备：中间体13a的合成将5,6-二羟基黄酮(2.54g，10mmol)，碘甲烷(1.87ml)和碳酸钾(4.15g，30mmol)加入到250ml单口瓶中，溶剂为dmf，常温搅拌过夜。处理反应，向反应体系中加入100ml的二氯甲烷进行稀释，然后向反应液加入到50ml的0.1m的稀盐酸中，萃取有机相，然后用水洗(50ml*3)，再用硫酸镁进行干燥，过滤得到有机相，减压蒸馏除去溶剂二氯甲烷，得到黄色固体，产率为88％。化合物13的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ8.05(dd,j＝7.6,1.9hz,2h),7.57(dd,j＝5.8,4.8hz,3h),6.87(d,j＝2.2hz,1h),6.78(s,1h),6.52(d,j＝2.2hz,1h),3.91(s,3h),3.84(s,3h).接着，进行8-碘-5,7-二甲氧基黄酮(中间体13b)的制备：中间体13b的合成将13a(1.41g，5mmol)和nis(1.35g，6mmol)加入到250ml的单口瓶中，溶剂为三氟乙酸，加热回流，搅拌过夜。后处理该反应，向反应体系中加入大量的乙酸乙酯，会发现有固体析出，于是抽滤，然后用饱和硫代硫酸钠进行洗涤三次，然后用饱和碳酸氢钠进行洗涤三次，再用水，乙醇，乙醚依次进行洗涤，得到白色固体。产率：90％。化合物13b的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ8.18(s,2h),7.59(s,3h),6.88(s,1h),6.72(s,1h),4.03(s,3h),3.95(s,3h).最后，进行目的化合物8-((3-溴苯基)硫代)-7-羟基-5-甲氧基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物14)的制备：化合物14的合成将3-溴苯硫酚(50ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体14，产率为80％。化合物14的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.40(s,1h),7.84(d,j＝7.1hz,2h),7.53–7.43(m,3h),7.29(dd,j＝7.2,0.9hz,2h),7.19(t,j＝8.1hz,1h),7.10(d,j＝7.7hz,1h),6.82(s,1h),6.65(s,1h),3.89(s,3h).esi-msm/z:452.98[m-h]-.实施例14：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行8-((3-氟苯基)硫代)-7-羟基-5-甲氧基-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物15)的制备：化合物15的合成将3-氟苯硫酚(52ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体15，产率为88％。化合物15的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.38(s,1h),7.88–7.81(m,2h),7.52–7.42(m,3h),7.28(s,1h),6.97–6.88(m,3h),6.83(s,1h),6.65(s,1h),3.89(s,3h).esi-msm/z:392.85[m-h]-.实施例15：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行8-((4-氟苯基)硫代)-7-羟基-5-甲氧苯基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物16)的制备：化合物16的合成将4-氟苯硫酚(58ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体16，产率为83％。化合物16的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.21(s,1h),7.99–7.76(m,2h),7.65–7.41(m,4h),7.24(d,j＝9.2hz,2h),6.93(d,j＝9.1hz,2h),6.80(s,1h),6.60(s,1h),3.83(s,3h),3.64(s,3h).esi-msm/z:392.90[m-h]-.实施例16：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行7-羟基-5-甲氧基-8-((3-甲氧基苯基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物17)的制备：化合物17的合成将3-甲氧基苯硫酚(46ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol)，657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体17，产率为83％。化合物17的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.25(s,1h),7.85(d,j＝7.4hz,2h),7.56–7.41(m,3h),7.15(t,j＝8.2hz,1h),6.81(s,1h),6.66(d,j＝12.9hz,4h),3.88(s,3h),3.66(s,3h).esi-msm/z:405.02[m-h]-.实施例17：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行8-((2-氟苯基)硫代)-7-羟基-5-甲氧苯基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物18)的制备：化合物18的合成将2-氟苯硫酚(40ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg1，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体18产率为89％。化合物18的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.39(s,1h),7.89–7.79(m,2h),7.48(dt,j＝22.0,7.1hz,3h),7.24(dd,j＝9.9,8.7hz,1h),7.19–7.09(m,1h),7.07–6.97(m,1h),6.82(s,1h),6.78(td,j＝7.9,1.5hz,1h),6.65(s,1h),3.88(s,3h).esi-msm/z:405.06[m-h]-.实施例18：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行8-((2-溴基)硫代)-7-羟基-5-甲氧苯基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物19)的制备：化合物19的合成将2-溴苯硫酚(38ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体19，产率为81％。化合物19的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.43(s,1h),7.84–7.75(m,2h),7.64(dd,j＝7.9,1.1hz,1h),7.49(d,j＝7.3hz,1h),7.42(t,j＝7.5hz,2h),7.20–7.11(m,1h),7.06–6.97(m,1h),6.82(s,1h),6.67(s,1h),6.63(dd,j＝8.0,1.4hz,1h),3.90(s,3h).esi-msm/z:452.96[m-h]-.实施例19：7-羟基-5-甲氧基-8-((2-甲氧基苯基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物20)的制备：化合物20的合成将2-甲氧基苯硫酚(46ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg1，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体20，产率为75％。化合物20的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.16(s,1h),7.77(d,j＝7.5hz,2h),7.49(t,j＝7.2hz,1h),7.42(t,j＝7.5hz,2h),7.11–6.99(m,2h),6.79(s,1h),6.76–6.69(m,1h),6.65(s,1h),6.52(d,j＝7.7hz,1h),3.94(s,3h),3.88(s,3h).esi-msm/z:405.12[m-h]-.实施例20：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行7-羟基-5-甲氧基-8-((4-甲氧基苯基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4-酮(化合物21)的制备：化合物21的合成将4-甲氧基苯硫酚(48ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体21，产率为88％。化合物21的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.19(s,1h),7.97–7.89(m,2h),7.57–7.46(m,3h),7.18–7.10(m,2h),6.83(d,j＝8.9hz,2h),6.81(s,1h),6.62(s,1h),3.85(s,3h),3.66(s,3h).esi-msm/z:405.03[m-h]-.实施例21：本实施例在上述实施例的制备方法基础上，进行8-((2-氯基)硫代)-7-羟基-5-甲氧苯基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物22)的制备：化合物22的合成将2-氯苯硫酚(46ul，0.60mmol)，13b(200mg，0.50mmol)，60748-47-2(2.3mg，0.0025mmol),657408-07-6(2.1mg，0.005mol)和碳酸铯(325mg1，1mmol)加入到50ml的三口瓶中，溶剂为dmf，抽真空，并用氮气进行置换三次，置于110度下反应，搅拌过夜。处理反应，首先用硅藻土滤去反应液的催化剂，配体和无机盐，得到黑色滤液，然后减压蒸馏除去溶剂n，n-二甲基甲酰胺，得到棕褐色固体，加入二氯甲烷，并用水进行萃取两次，有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，残余物柱层析纯化，得到黄棕色固体22，产率为80％。化合物22的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ11.42(s,1h),7.78(d,j＝7.5hz,2h),7.53–7.45(m,2h),7.42(t,j＝7.5hz,2h),7.17–7.04(m,2h),6.81(s,1h),6.69–6.63(m,2h),3.89(s,3h).esi-msm/z:409.02[m-h]-.实施例22：本实施例将实施例13获得的目的化合物14为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物8-((3-溴)硫代)-5，7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物23)的制备：化合物23的合成将化合物14(45mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向反应体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(2×10ml)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体23，产率位98％。化合物23的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.11(s,1h),10.47(s,1h),7.91(d,j＝7.0hz,2h),7.52(dd,j＝13.6,7.4hz,3h),7.19(dd,j＝20.1,12.5hz,3h),7.13(d,j＝1.7hz,1h),6.86(s,1h),6.05(s,1h).esi-msm/z:438.92[m-h]-.实施例23：本实施例将实施例14获得的目的化合物15为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物8-((3-氟)硫代)-5，7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物24)的制备：化合物24的合成将化合物15(39mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着向反应体系中加入10ml的水，进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体24，产率位95％。化合物24的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.24(s,1h),11.58(s,1h),7.91(d,j＝7.6hz,2h),7.62–7.54(m,1h),7.50(t,j＝7.5hz,2h),7.29(dd,j＝14.4,8.0hz,1h),7.10(s,1h),7.01–6.88(m,3h),6.48(s,1h).esi-msm/z:378.72[m-h]-.实施例24：本实施例将实施例15获得的目的化合物16为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物8-((4-氟)硫代)-5，7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物25)的制备：化合物25的合成将化合物16(39mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体25，产率位95％。化合物25的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.22(s,1h),11.51(s,1h),7.95(s,2h),7.53(s,3h),7.21(s,2h),7.10(s,3h),6.47(s,1h).esi-msm/z:378.78[m-h]-.实施例25：本实施例将实施例16获得的目的化合物17为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物5，7-二羟基-8-((3-羟基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物26)的制备：化合物26的合成将化合物17(41mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体26，产率位85％。化合物26的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ10.21(s,1h),9.38(s,1h),7.91(d,j＝7.0hz,2h),7.57–7.44(m,3h),7.20(s,1h),7.01(s,1h),6.83(s,1h),6.57(d,j＝8.0hz,1h),6.45(d,j＝6.9hz,1h),6.00(s,1h).esi-msm/z:376.85[m-h]-.实施例26：本实施例将实施例117获得的目的化合物18为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物8-((2-氟)硫代)-5，7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物27)的制备：化合物27的合成将化合物18(39mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体27，产率位89％。化合物27的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.23(s,1h),11.66(s,1h),7.92(d,j＝7.3hz,2h),7.56(d,j＝7.2hz,1h),7.51(t,j＝7.4hz,2h),7.23(d,j＝9.3hz,1h),7.15(d,j＝7.1hz,1h),7.11(s,1h),7.02(t,j＝7.6hz,1h),6.86(dd,j＝7.9,1.3hz,1h),6.48(s,1h).esi-msm/z:378.98[m-h]-.实施例27：本实施例将实施例18获得的目的化合物19为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物8-((2-溴)硫代)-5，7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物28)的制备：化合物28的合成将化合物19(45mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体28，产率位86％。化合物28的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.22(s,1h),11.64(s,1h),7.91–7.83(m,2h),7.64(dd,j＝7.9,1.1hz,1h),7.55(d,j＝7.3hz,1h),7.48(t,j＝7.6hz,2h),7.21–7.13(m,1h),7.11(s,1h),7.02(td,j＝7.7,1.5hz,1h),6.69(dd,j＝8.0,1.4hz,1h),6.51(s,1h).esi-msm/z:438.96[m-h]-.实施例28：本实施例将实施例19获得的目的化合物20为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物5，7-二羟基-8-((2-羟基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物29)的制备：化合物29的合成将化合物20(41mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体29，产率位75％。化合物29的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.12(s,1h),11.34(s,1h),9.28(s,1h)，7.91(d,j＝7.1hz,2h),7.64(dd,j＝7.9,1.1hz,1h),7.55(d,j＝7.3hz,1h),7.28(t,j＝7.6hz,2h),7.11–7.03(m,1h),6.91(s,1h),6.82(td,j＝7.9,1.6hz,1h),6.49(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),6.45(s,1h).esi-msm/z:376.93[m-h]-.实施例29：本实施例将实施例20获得的目的化合物21为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物5，7-二羟基-8-((4-羟基)硫代)-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物30)的制备：化合物30的合成将化合物21(41mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体30，产率位82％。化合物30的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.16(s,1h),11.37(s,1h),9.41(s,1h),8.01(d,j＝7.0hz,2h),7.61–7.52(m,3h),7.12–7.04(m,3h),6.66(d,j＝8.6hz,2h),6.45(s,1h).esi-msm/z:376.96[m-h]-.实施例30：本实施例将实施例21获得的目的化合物22为原料，与干燥的dcm混合，加入三溴化硼，进行目的化合物8-((2-氯)硫代)-5，7-二羟基-2-苯基-4氢-色烯-4酮(化合物31)的制备：化合物31的合成将化合物22(41mg，0.1mmol)加入干燥的dcm(10ml)中，并向体系中加入三溴化硼(0.5ml)，常温搅拌过夜。处理反应，缓慢加入冰甲醇用来猝灭反应，直到反应体系中没有气体产生，然后向反应体系中加入饱和碳酸氢钠溶液，调节ph到10左右，紧接着用水进行萃取两次(10ml×2)，并用饱和食盐水进行洗涤，得到有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，滤液旋干，得到黄色固体31，产率位98％。化合物5的1hnmr数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ13.26(s,1h),11.57(s,1h),10.48(s,1h),7.93–7.79(m,2h),7.50(dd,j＝14.8,12.3hz,4h),7.18–7.00(m,2h),6.85(s,1h),6.67(d,j＝7.3hz,1h),6.06(s,1h).esi-msm/z:394.83[m-h]-.实施例31：本实施例提供本发明中的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物体外的酶活性实验，具体如下：本实验的目的是测定部分本发明中部分黄酮衍生物体外对tyrrs酶活性的抑制效果。1)实验材料spin-x离心过滤器(康宁)，na[32p]ppi(pe公司)，atp、kcl和hclo4购买与sigma公司2)实验方法atp–pyrophosphateexchangeassay(三磷酸腺苷-焦磷酸盐交换测试)：通过使用酪氨酸依赖性三磷酸腺苷-焦磷酸(ppi)交换法测量酪氨酰腺苷酸复合物。混合物物中包括：100mmhepes(ph＝7.5)、20mmkcl、2mmatp、1mmnappi、2mmdtt、250-500mml-酪氨酸、10mmmgcl2和0.01mciml-1na[32p]ppi，将混合物加入到50-100nm纯化的tyrrs(0.5eumg/ml)中，在0-1mm的白藜芦醇，温度为4℃预孵育30分钟。atp-ppi的交换反应置于22-25℃的室温条件下，除去在指定的时间间隔的等分试样，于含有40mmnappi、1.4％hclo4、0.4％hcl和8％(w/v)活性炭中猝灭。在完全混合后，过滤出活性炭，并用7％hclo4和包含0.45μm单孔乙酸纤维素滤镜的spin-x离心过滤器(康宁)处理的200mmnappi混合溶液清洗活性炭。活性炭晾干后，加入到闪烁瓶，与活性炭结合的放射性atp混合物通过闪烁计数器测量。3)化合物的抑制常数ki测试结果通过以上测试方法，测试了本发明中的化合物与tyrrs的抑制率。抑制常数ki的计算由测试出化合物的ic50值通过公式ki＝ic50/(1+[s]/km)计算得到。其中ki代表抑制常数，ic50代表化合物抑制酶活性50％的化合物浓度，s代表底物酪氨酸的浓度，km代表米氏常数。测试结果如表一所示：表一各化合物与tyrrs在100μm的抑制率cpd化合物1化合物2化合物3化合物4化合物5化合物6inhibitionrate@100μm(％)68.2464.3751.1466.1372.2453.83cpd化合物7化合物8化合物9化合物10化合物11化合物12inhibitionrate@100μm(％)80.7364.0764.7169.5295.4370.08cpd化合物14化合物15化合物16化合物17化合物18化合物19inhibitionrate@100μm(％)40.5851.4963.6348.1646.2450.45cpd化合物20化合物21化合物22化合物23化合物24化合物25inhibitionrate@100μm(％)60.0966.1252.1438.6064.8873.75cpd化合物26化合物27化合物28化合物29化合物30化合物31inhibitionrate@100μm(％)36.8452.9667.5658.1261.4552.93根据表一，我们选择抑制率较高的化合物7、化合物11、化合物12作为重点研究对象，并以化合物resveratrol(rsv)作为阳性对照组，测试其抑制常数ki(μm)及其热位移δtm(℃)，如表二所示：表二本发明化合物7，11和12的ki值和热位移idnumberki(μm)δtm(℃)resveratrol89.21.8478.81.49116.81.301214.61.32由表二可知，本发明中化合物7，11和12的抑制常数均远小于阳性对照组(rsv)，且热位移均较小，因此，本发明中化合物的活性明显优于阳性对照组(rsv)的活性。实施例32：本实施例提供本发明中的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物体外与酶结合稳定性实验：本实验的目的是测定部分发明化合物7，11，12和阳性对照分子白藜芦醇在体外与tyrrs酶结合后的稳定性实验。1)实验材料及仪器dsc示差扫描量热仪器(通用电气医疗集团生命科学)，rt-pcr仪器(bio-radcfx96)，羟乙基哌嗪乙硫磺酸(hepes，生工)，氯化钠(生工)。2)实验方法dsc示差扫描量热仪法将1mg/ml的tyrrs蛋白加入到含有20mmhepes7.4,400mmnacl的缓冲溶液中，分别依次加入化合物rsv,7,11andtyrwx-12，终浓度为200um，放置在仪器的4℃孵育箱中，孵育30分钟，然后设置仪器参数，以200℃/h的速率进行扫描，扫描温度设置为20–110℃。dsf示差荧光扫描量热仪法在含有2um的tyrrs蛋白的缓冲液中，分别依次加入化合物rsv,7,11andtyrwx-12，终浓度为200um，然后加入5x的sypro橙色染料，用含有缓冲20mmhepes7.4,400mmnacl的缓冲溶液把总体积补足到10ul，避光放置在定量聚合酶链反应仪器中，设置仪器的扫描速度为1℃/min，扫描温度为25–95℃。3)实验结果dsf示差荧光扫描量热仪法由图1中的a-d，我们可以看出，化合物rsv,7,11andtyrwx-12与tyrrs蛋白的比例分别是25：1的时候，熔融温度的位移差分别是1.6，1.12，1.0和0.56℃。dsc示差扫描量热仪法由图1中的e和f，我们可以看出，化合物rsv,7,11andtyrwx-12可以明显的稳定tyrrs蛋白的三位结构，熔融温度的位移差分别是1.84,1.49,1.30,and1.32℃。实施例33：本实施例提供本发明中的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物7和11体外细胞内促进tyrrs入核检测实验本实验的目的是检测本发明化合物处理细胞后，tyrrs在细胞质和细胞核内的定位分布情况，采用的方法为蛋白质免疫印迹(westernblot,wb)。1)实验材料：主要试剂：rpmi-1640培养基购自gibcobrl公司(invitrogencorporation，usa)，胎牛血清购自pan-biotech公司(germany)，dmso(二甲亚砜)为sigma公司(usa)产品，生理盐水购自四川科伦药业股份有限公司，ripa裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司，cocktail(蛋白酶抑制剂)和pmsf(苯甲基磺酰氟)购自sigma公司，bca蛋白定量试剂盒购自西安赫特生物科技有限公司。tyrrs抗体购自abcam公司，货号是ab150429，gapdh抗体购自proteintech公司，货号是60004-1-ig，laminb1抗体购自proteintech公司，货号是1298.7-1-ap。hrp(辣根过氧化酶)标记的二抗购自北京中山金桥公司，pvdf膜(聚偏二氟乙烯膜)和显影底物购自millipore公司。化合物用100％dmso配制成10mm储存液，置-20℃冰箱避光保存备用，临用时用完全培养液稀释至所需浓度。细胞系及培养：细胞株hela使用含20％胎牛血清的imdm完全培养基在5％co2、37℃条件下培养。2)实验方法：将待测细胞接种到6孔板中，扩增到合适的细胞密度后，加入不同浓度的受试化合物，在37℃，5％co2条件下培养1个小时。将细胞离心收集起来，用预冷的生理盐水洗涤细胞两次，并同时将细胞转移到1.5ml离心管中，吸取并弃除上清，加入适当体积的ripa裂解液(含1％cocktail和1％pmsf)。涡旋以使细胞完全重悬在裂解液中，并立即置于冰上裂解。约15min后，用超声破碎仪器进行细胞破碎。随后将处理后的细胞置于低温高速离心机中离心(13000r/min，15min)以除去细胞碎片。用bca(二喹啉甲酸)法进行蛋白定量，同时用bsa(牛血清蛋白)标准蛋白制作标准曲线，根据标准曲线计算各组蛋白浓度，统一各组蛋白样品的浓度后，向其中加入5×蛋白上样缓冲液，随后放入100℃干式恒温器中保持10min，使蛋白变性。处理好的蛋白样品按所需量分装后保存于-20℃备用。蛋白样品避免反复冻融。待检测样品时，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离蛋白。电泳分离完毕，采用槽式湿转法将蛋白转移至pvdf膜上，再将pvdf膜置于含5％(m:v)脱脂奶粉的tbs/t(三羟甲基氨基甲烷-盐酸/吐温缓冲盐溶液)中封闭2h，剪开不同分子量的蛋白条带，按相应抗体说明书推荐的稀释比例稀释一抗并在4℃冰箱孵育条带过夜。次日，取出各条带，用tbs/t缓冲液漂洗后加入1:5000稀释的hrp标记的二抗，在37℃孵育1h，随后，用tbs/t洗脱除去过量抗体，在pvdf膜上均匀滴加hrp底物后，置于快速凝胶成像系统中显影。3)实验结果：如图2所示，血清饥饿组(ss)和阳性对照化合物白藜芦醇可以促进tyrrs进入细胞核内。化合物7和11也可以调控tyrrs在细胞内的分布，且随着浓度的变化增大，细胞核内的tyrrs也逐渐增多。实施例34：本实施例提供本发明中的取代基的6,8-二巯基-2-苯基-4h-色烯-4-酮衍生物7和11体外水平上细胞内保护dna损伤检测实验本实验的目的是检测本发明化合物处理细胞后，tyrrs在细胞核内的定位增多后可以激活相关通路，保护dan损伤，采用的方法为蛋白质免疫印迹(westernblot，wb)。1)实验材料：主要试剂：rpmi-1640培养基购自gibcobrl公司(invitrogencorporation，usa)，胎牛血清购自pan-biotech公司(germany)，dmso(二甲亚砜)为sigma公司(usa)产品，生理盐水购自四川科伦药业股份有限公司，ripa裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司，cocktail(蛋白酶抑制剂)和pmsf(苯甲基磺酰氟)购自sigma公司，bca蛋白定量试剂盒购自西安赫特生物科技有限公司。组蛋白h2a.xs139ph(phosphoser139)抗体购自genetex公司，货号是gtx127340，β-actin抗体购自proteintech公司，货号是60008-1-ig。hrp(辣根过氧化酶)标记的二抗购自北京中山金桥公司，pvdf膜(聚偏二氟乙烯膜)和显影底物购自millipore公司。化合物用100％dmso配制成10mm储存液，置-20℃冰箱避光保存备用，临用时用完全培养液稀释至所需浓度。细胞系及培养：细胞株hela使用含20％胎牛血清的imdm完全培养基在5％co2、37℃条件下培养。2)实验方法：将待测细胞接种到6孔板中，扩增到合适的细胞密度后，加入不同浓度的受试化合物，在37℃，5％co2条件下培养1个小时。将细胞离心收集起来，用预冷的生理盐水洗涤细胞两次，并同时将细胞转移到1.5ml离心管中，吸取并弃除上清，加入适当体积的ripa裂解液(含1％cocktail和1％pmsf)。涡旋以使细胞完全重悬在裂解液中，并立即置于冰上裂解。约15min后，用超声破碎仪器进行细胞破碎。随后将处理后的细胞置于低温高速离心机中离心(13000r/min，15min)以除去细胞碎片。用bca(二喹啉甲酸)法进行蛋白定量，同时用bsa(牛血清蛋白)标准蛋白制作标准曲线，根据标准曲线计算各组蛋白浓度，统一各组蛋白样品的浓度后，向其中加入5×蛋白上样缓冲液，随后放入100℃干式恒温器中保持10min，使蛋白变性。处理好的蛋白样品按所需量分装后保存于-20℃备用。蛋白样品避免反复冻融。待检测样品时，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离蛋白。电泳分离完毕，采用槽式湿转法将蛋白转移至pvdf膜上，再将pvdf膜置于含5％(m:v)脱脂奶粉的tbs/t(三羟甲基氨基甲烷-盐酸/吐温缓冲盐溶液)中封闭2h，剪开不同分子量的蛋白条带，按相应抗体说明书推荐的稀释比例稀释一抗并在4℃冰箱孵育条带过夜。次日，取出各条带，用tbs/t缓冲液漂洗后加入1:5000稀释的hrp标记的二抗，在37℃孵育1h，随后，用tbs/t洗脱除去过量抗体，在pvdf膜上均匀滴加hrp底物后，置于快速凝胶成像系统中显影。3)实验结果：如图3所示，模型组为加入30μm的顺铂使细胞造成dna损伤。加入化合物7和11后，可以明显的保护细胞内的dna损伤，且随着浓度的变化增大，细胞内的dna损伤比例越小。dmso为空白对照组，mod为加入顺铂化合物导致细胞损伤组。阳性对照化合物白藜芦醇也可以保护细胞内dna。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。当前第1页12