1.一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征在于:本发明使用自主研发的组织裂解液sg1buffer和sg2buffer,迅速释放小鼠组织中的基因组dna,裂解产物直接用做pcr扩增的模板,使用pcr预混合溶液2×pcrmastermix(withdye),按照本发明方法优化的实验体系和条件,对目标dna片段进行扩增,然后进行凝胶电泳,可快速鉴定转基因小鼠基因型。
2.根据权利要求1所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,本方法自主研发的组织裂解液配方为:sg1buffer为2.5-3.5mm的edta(ph=8.0)、20-30mm的naoh,sg2buffer为40-50mm的tris-hcl(ph在7.5-7.8之间)。
3.根据权利要求1所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征是,包括以下实验步骤:
s1:剪取转基因小鼠组织(鼠耳/鼠趾/鼠尾)置于干净的ep管;
s2:加入100μlsg1buffer,95℃水浴或金属浴中消化5-10min;
s3:上述s2冷却至室温后,加入8.6μlsg2buffer;
s4:取上述s3上清1-2μl,作为pcr反应的模板;
s5:进行pcr反应;
s6:产物进行凝胶电泳,于凝胶成像仪中观察显带。
4.根据权利要求3所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征是,s1所述转基因小鼠取样部位和取样量如下:
鼠耳:打直径3mm的圆孔或者剪下近似大小的耳朵;
鼠趾:约2mm长左右的脚趾(不含指甲的长度);
鼠尾:约2mm的尾尖。
5.根据权利要求3所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征是,按s2操作进行消化,消化完成后,组织外观上仍然完整,但足量的基因组dna已经释放,不影响后续的pcr实验。
6.根据权利要求3所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征是,s5所述的pcr反应液组成为:2xpcrmastermix10μl;裂解液模板1μl;引物1(10μm)0.5μl;引物2(10μm)0.5μl;ddh2o8μl;总体积20μl。
7.根据权利要求3所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征是,s5所述的pcr反应条件为:温度95℃时预变性5min;温度95℃变性30秒,温度55-65℃(具体以特异性引物退火温度为准)退火30秒,温度72℃延伸30秒,合计35个循环;最后温度72℃延伸7min。
8.根据权利要求3所述的一种转基因小鼠基因型的快速鉴定方法,其特征是,s6所述的凝胶电泳采用浓度为1.5%的琼脂糖凝胶。