本发明涉及核糖核酸提取技术领域，具体是指一种核糖核酸提取时的前处理方法，其可使在进行rna萃取时大大减少dna的污染。
背景技术：
在现行提取血液总核糖核酸(rna)的试剂盒中，若要避免基因组脱氧核糖核酸(genomicdna)污染，必须在提取总核糖核酸(rna)过程中或是核糖核酸(rna)洗脱产品中加入脱氧核糖核酸酶(dnase)，进行孵育15分钟之后加入20mmedta溶液后56℃加热5～10分钟，才可确保将脱氧核糖核酸酶的活性消除，如此不仅操作繁复耗时，还有可能操作不当造成后端的检测抑制进而需要重新提取样品，这样一来一往不仅造成实验操作上的困扰，还浪费了宝贵的时间及不易收集而来的血液样本。
基于此，本发明人对此问题深入研究，遂有本案产生。
技术实现要素：
本发明的主要目的在于提供一种核糖核酸提取时的前处理方法，其可以避免dna的污染，并且还可以大大提高提取效率，实现对血液样本的充分利用。
为了达成上述目的，本发明的解决方案是：
一种核糖核酸提取时的前处理方法，其中，包括如下步骤：
①取新鲜血液，并加入红细胞裂解液进行红细胞裂解；
②将白细胞沉淀并移除上清液；
③利用等渗透压缓冲液或低渗透压缓冲液与复合试剂以10：1的体积比例混合，并进行10-15min的孵育，以达到细胞核稳定不易受到破坏且细胞膜可以不受核糖核酸酶抑制剂影响且可透过细胞裂解液破坏的平衡状态下；所述复合试剂具有核糖核酸酶抑制剂和细胞膜固定剂。
进一步，在步骤③中低渗透缓冲液选自红细胞裂解液、磷酸液溶液或者生理食盐水。
进一步，在步骤②中采用慢数离心的方式来实现。
采用上述方案后，本发明在对核糖核酸提取之前，采用含有核糖核酸酶抑制剂和细胞膜固定剂复合试剂与等渗透压缓冲液或低渗透压缓冲液进行孵育，如此可以稳固细胞核裂解及减弱核糖核酸的活性。
上述反应时间如果过长，会使细胞膜受到复合试剂的影响而不易被细胞膜裂解液破坏，即反应时间过长导致核糖核酸萃取失败；
本发明的创新原理是：基于rna是位于细胞质里面的，基因组dna是位于细胞核里面的，本案的核心是让细胞核保护起来，这样在后续的白细胞裂解的过程，dna不会出来，从而避免了dna的污染。
与现有技术相比，本发明至少具有如下有益效果：
一、本发明在血液前处理阶段，就可以避免基因组脱氧核糖核酸(genomicdna)的污染，并且还可以有效抑制会影响提取总核糖核酸(rna)的核糖核酸酶(rnase)；
二、本发明不但可以节省提取的时间，而且还不需添加巯基乙醇(b-me)这类的毒化物质来抑制核糖核酸酶(rnase)活性；
三、本发明还可以防止因使用脱氧核糖核酸酶(dnase)而需添加20mmedta溶液后可能造成的edta这类金属螯合剂的残留而造成下游的实验造成抑制的现象。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本案作进一步详细的说明。
本发明涉及的一种核糖核酸提取时的前处理方法，其中，包括如下步骤：
①取新鲜血液，并加入红细胞裂解液进行红细胞裂解；
②将白细胞沉淀并移除上清液；
③利用等渗透压缓冲液或低渗透压缓冲液与复合试剂以10：1的体积比例混合，并进行10-15min的孵育，以达到细胞核稳定不易受到破坏且细胞膜可以不受核糖核酸酶抑制剂影响且可透过细胞裂解液破坏的平衡状态下；所述复合试剂具有核糖核酸酶抑制剂和细胞膜固定剂。
在本发明的一种具体实施例中，所述复合试剂选用台湾consgen公司生产的rpb试剂，其配方是：30g～100g的edta3k(抗凝剂、辅脢金属螯合剂)、200g～600g的idu(细胞膜固定剂)、0.05g～0.3g的bestain(蛋白质抑制剂)、0.05g～0.3g的aebsf(蛋白质抑制剂)以及0.05g～0.4g的glycine(电性调节物)，其子配方的主要物质是idu(5-碘-2-脱氧尿苷)，其主要的功能与甲醛作用于细胞的效应相似都为固定细胞的结构，而bestain、aebsf、edta3k都具有改变蛋白质结构的功用进而达到抑制蛋白质活性，glycine在此复合试剂的功用在于稳定及调节电性。
本发明的核心是将此rpb试剂中的核糖核酸酶抑制剂和细胞膜固定剂一起应用到核糖核酸提取时的前处理操作，这是本案的创新精神之所在。
具体的，在步骤③中低渗透缓冲液选自红细胞裂解液、磷酸液溶液或者生理食盐水。
在步骤②中采用慢数离心的方式来实现。
如此，本发明在对核糖核酸提取之前，采用含有核糖核酸酶抑制剂和细胞膜固定剂复合试剂与等渗透压缓冲液或低渗透压缓冲液进行孵育，如此可以稳固细胞核裂解及减弱核糖核酸的活性。
上述反应时间如果过长，会使细胞膜受到复合试剂的影响而不易被细胞膜裂解液破坏，即反应时间过长导致核糖核酸萃取失败；
本发明的创新原理是：基于rna是位于细胞质里面的，基因组dna是位于细胞核里面的，本案的核心是让细胞核保护起来，这样在后续的白细胞裂解的过程，dna不会出来，从而避免了dna的污染。
本发明对比于传统的方法，操作时间可缩短约率30min且不需额外添加金属螯合剂来停止试剂的反应，因此不会去影响下游的检测。
综上所述，本发明提供了一种在血液前处理阶段就可以避免基因组脱氧核醣核酸(genomicdna)污染，并且还可以有效抑制会影响提取总核醣核酸(rna)的核醣核酸酶(rnase)，不但可节省提取的时间之外还可以不须添加巯基乙醇(b-me)这类的毒化物质来抑制核醣核酸酶(rnase)活性以及防止因使用脱氧核醣核酸酶(dnase)而需添加20mmedta溶液后可能造成的edta这类金属螯合剂的残留而造成下游的实验造成抑制的现象。
以上所述仅为本发明的优选实施例，凡跟本发明权利要求范围所做的均等变化和修饰，均应属于本发明权利要求的范围。