1.根据反应方案a的方法:
方案a
其中r1是(c1-c6)烷基;
r2是-cf2h或-ch=ch2;且
所述第一酶是bstee酯酶的突变体。
2.权利要求1的方法,其中r1是(c6)烷基。
3.权利要求1的方法,其中r1是(c5)烷基。
4.权利要求1的方法,其中r1是(c4)烷基。
5.权利要求1的方法,其中r1是(c3)烷基。
6.权利要求1的方法,其中r1是乙基。
7.权利要求1的方法,其中r1是甲基。
8.权利要求1-7中任一项的方法,其中r2是-cf2h。
9.权利要求1-7中任一项的方法,其中r2是-ch=ch2。
10.权利要求1-9中任一项的方法,其中所述bstee酯酶的突变体具有t25h的第一突变,l92h的第二突变,和选自c115s、c115a、k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、k121t、k121a、k121n、e123t、m126f、m126v、m126i、m126q、m126n、k164s、l166n、l166m、l166i、l166t、l166a、i170n、i170q、i170v、i170t、i170a、d172n、m194a、m194l、i195g、i195a、i195v和k215n的第三突变。
11.权利要求1-10中任一项的方法,其中所述bstee酯酶的突变体具有t25h的第一突变,l92h的第二突变,和选自k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126f、m126v、m126i、m126q、m194l、m194a、l166n、l166m、i170n和i170q的第三突变。
12.权利要求11的方法,其中所述第三突变选自k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q、m194l和l166m。
13.权利要求12的方法,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q和l166m。
14.权利要求13的方法,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d和k121l。
15.权利要求1-14中任一项的方法,其中与方案a中的起始材料相比,所述第一酶的装载量为约50wt%至约200wt%。
16.权利要求1-15中任一项的方法,其中所述第一溶剂包含一种或多种有机溶剂。
17.权利要求16的方法,其中所述第一溶剂包含庚烷和甲基叔丁基醚。
18.权利要求1-17中任一项的方法,其中所述第一溶剂进一步包含水性缓冲液。
19.权利要求1-18中任一项的方法,其中所述第一溶剂进一步包含碱。
20.权利要求19的方法,其中所述碱是二(烷基)胺,诸如二(环烷基)胺或二(芳烷基)胺。
21.权利要求20的方法,其中所述碱是二(环己基)胺或二(苄基)胺。
22.权利要求1-21中任一项的方法,其中所述第一ph为约5至约10。
23.权利要求1-22中任一项的方法,其中所述第一温度为约10℃至约60℃。
24.权利要求1-23中任一项的方法,其中所述第一时间段为约2h至约48h。
25.权利要求1-24中任一项的方法,其进一步包括使反应方案a的反应产物与碱接触以获得化合物的盐。
26.权利要求25的方法,其中所述碱是二(烷基)胺,诸如二(环烷基)胺或二(芳烷基)胺。
27.权利要求26的方法,其中所述碱是二(环己基)胺或二(苄基)胺。
28.权利要求1-27中任一项的方法,其中所述反应产物的非对映体过量为大于约90%。
29.权利要求28的方法,其中所述反应产物的非对映体过量为大于约95%。
30.权利要求1-29中任一项的方法,其进一步包括根据反应方案b的步骤:
方案b
其中:
r2是-cf2h;且
所述第二酶选自alcalase®2.4l、esperase®8.0l和savinase®16.0l。
31.权利要求30的方法,其中所述第二酶是alcalase®2.4l。
32.权利要求30或31的方法,其中与方案b中的起始材料相比,所述第二酶的装载量为约50wt%至约200wt%。
33.权利要求30-32中任一项的方法,其中所述第二溶剂包含水性缓冲液。
34.权利要求33的方法,其中所述第二溶剂包含碳酸氢钠/碳酸钠缓冲溶液。
35.权利要求33或34的方法,其中所述第二溶剂进一步包含有机溶剂,诸如丙酮。
36.权利要求30-35中任一项的方法,其中所述第二ph为约5至约10。
37.权利要求30-36中任一项的方法,其中所述第二温度为约10℃至约60℃。
38.权利要求30-37中任一项的方法,其中所述第二时间段为约2h至约48h。
39.多肽,其包含:
相对于seqidno:2具有至少两个氨基酸取代的氨基酸序列,其中所述氨基酸序列包含t25h的第一突变和l92h的第二突变。
40.权利要求39的多肽,其包含选自以下的的第三突变:c115s、c115a、k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、k121t、k121a、k121n、e123t、m126f、m126v、m126i、m126q、m126n、k164s、l166n、l166m、l166i、l166t、l166a、i170n、i170q、i170v、i170t、i170a、d172n、m194a、m194l、i195g、i195a、i195v和k215n。
41.权利要求40的多肽,其包含选自以下的第三突变:k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126f、m126v、m126i、m126q、m194l、m194a、l166n、l166m、i170n和i170q。
42.权利要求41的多肽,其中所述第三突变选自k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q、m194l和l166m。
43.权利要求42的多肽,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q和l166m。
44.权利要求42的多肽,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d和k121l。
45.根据反应方案b的方法:
方案b
其中
r1是(c1-c6)烷基;
r2是-cf2h;且
所述第二酶选自alcalase®2.4l、esperase®8.0l和savinase®16.0l。
46.权利要求45的方法,其中所述第二酶是alcalase®2.4l。
47.权利要求45或46的方法,其中与方案b中的起始材料相比,所述第二酶的加载量为约50wt%至约200wt%。
48.权利要求45-47中任一项的方法,其中所述第二溶剂包含水性缓冲液。
49.权利要求48的方法,其中所述第二溶剂包含碳酸氢钠/碳酸钠缓冲溶液。
50.权利要求48或49的方法,其中所述第二溶剂进一步包含有机溶剂,诸如丙酮。
51.权利要求45-50中任一项的方法,其中所述第二ph为约5至约10。
52.权利要求45-51中任一项的方法,其中所述第二温度为约10℃至约60℃。
53.权利要求45-52中任一项的方法,其中所述第二时间段为约2h至约48h。