用于制备(±)-2-(二氟甲基)-1-(烷氧基羰基)-环丙烷甲酸和(±)-2-(乙烯基)-1-(烷氧基羰基)-环丙烷甲酸的酶促方法与流程

文档序号:19153288发布日期:2019-11-16 00:20阅读:来源:国知局

技术特征:

1.根据反应方案a的方法:

方案a

其中r1是(c1-c6)烷基;

r2是-cf2h或-ch=ch2;且

所述第一酶是bstee酯酶的突变体。

2.权利要求1的方法,其中r1是(c6)烷基。

3.权利要求1的方法,其中r1是(c5)烷基。

4.权利要求1的方法,其中r1是(c4)烷基。

5.权利要求1的方法,其中r1是(c3)烷基。

6.权利要求1的方法,其中r1是乙基。

7.权利要求1的方法,其中r1是甲基。

8.权利要求1-7中任一项的方法,其中r2是-cf2h。

9.权利要求1-7中任一项的方法,其中r2是-ch=ch2。

10.权利要求1-9中任一项的方法,其中所述bstee酯酶的突变体具有t25h的第一突变,l92h的第二突变,和选自c115s、c115a、k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、k121t、k121a、k121n、e123t、m126f、m126v、m126i、m126q、m126n、k164s、l166n、l166m、l166i、l166t、l166a、i170n、i170q、i170v、i170t、i170a、d172n、m194a、m194l、i195g、i195a、i195v和k215n的第三突变。

11.权利要求1-10中任一项的方法,其中所述bstee酯酶的突变体具有t25h的第一突变,l92h的第二突变,和选自k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126f、m126v、m126i、m126q、m194l、m194a、l166n、l166m、i170n和i170q的第三突变。

12.权利要求11的方法,其中所述第三突变选自k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q、m194l和l166m。

13.权利要求12的方法,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q和l166m。

14.权利要求13的方法,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d和k121l。

15.权利要求1-14中任一项的方法,其中与方案a中的起始材料相比,所述第一酶的装载量为约50wt%至约200wt%。

16.权利要求1-15中任一项的方法,其中所述第一溶剂包含一种或多种有机溶剂。

17.权利要求16的方法,其中所述第一溶剂包含庚烷和甲基叔丁基醚。

18.权利要求1-17中任一项的方法,其中所述第一溶剂进一步包含水性缓冲液。

19.权利要求1-18中任一项的方法,其中所述第一溶剂进一步包含碱。

20.权利要求19的方法,其中所述碱是二(烷基)胺,诸如二(环烷基)胺或二(芳烷基)胺。

21.权利要求20的方法,其中所述碱是二(环己基)胺或二(苄基)胺。

22.权利要求1-21中任一项的方法,其中所述第一ph为约5至约10。

23.权利要求1-22中任一项的方法,其中所述第一温度为约10℃至约60℃。

24.权利要求1-23中任一项的方法,其中所述第一时间段为约2h至约48h。

25.权利要求1-24中任一项的方法,其进一步包括使反应方案a的反应产物与碱接触以获得化合物的盐。

26.权利要求25的方法,其中所述碱是二(烷基)胺,诸如二(环烷基)胺或二(芳烷基)胺。

27.权利要求26的方法,其中所述碱是二(环己基)胺或二(苄基)胺。

28.权利要求1-27中任一项的方法,其中所述反应产物的非对映体过量为大于约90%。

29.权利要求28的方法,其中所述反应产物的非对映体过量为大于约95%。

30.权利要求1-29中任一项的方法,其进一步包括根据反应方案b的步骤:

方案b

其中:

r2是-cf2h;且

所述第二酶选自alcalase®2.4l、esperase®8.0l和savinase®16.0l。

31.权利要求30的方法,其中所述第二酶是alcalase®2.4l。

32.权利要求30或31的方法,其中与方案b中的起始材料相比,所述第二酶的装载量为约50wt%至约200wt%。

33.权利要求30-32中任一项的方法,其中所述第二溶剂包含水性缓冲液。

34.权利要求33的方法,其中所述第二溶剂包含碳酸氢钠/碳酸钠缓冲溶液。

35.权利要求33或34的方法,其中所述第二溶剂进一步包含有机溶剂,诸如丙酮。

36.权利要求30-35中任一项的方法,其中所述第二ph为约5至约10。

37.权利要求30-36中任一项的方法,其中所述第二温度为约10℃至约60℃。

38.权利要求30-37中任一项的方法,其中所述第二时间段为约2h至约48h。

39.多肽,其包含:

相对于seqidno:2具有至少两个氨基酸取代的氨基酸序列,其中所述氨基酸序列包含t25h的第一突变和l92h的第二突变。

40.权利要求39的多肽,其包含选自以下的的第三突变:c115s、c115a、k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、k121t、k121a、k121n、e123t、m126f、m126v、m126i、m126q、m126n、k164s、l166n、l166m、l166i、l166t、l166a、i170n、i170q、i170v、i170t、i170a、d172n、m194a、m194l、i195g、i195a、i195v和k215n。

41.权利要求40的多肽,其包含选自以下的第三突变:k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126f、m126v、m126i、m126q、m194l、m194a、l166n、l166m、i170n和i170q。

42.权利要求41的多肽,其中所述第三突变选自k121r、k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q、m194l和l166m。

43.权利要求42的多肽,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d、k121l、m126v、m126i、m126q和l166m。

44.权利要求42的多肽,其中所述第三突变选自k121y、k121h、k121d和k121l。

45.根据反应方案b的方法:

方案b

其中

r1是(c1-c6)烷基;

r2是-cf2h;且

所述第二酶选自alcalase®2.4l、esperase®8.0l和savinase®16.0l。

46.权利要求45的方法,其中所述第二酶是alcalase®2.4l。

47.权利要求45或46的方法,其中与方案b中的起始材料相比,所述第二酶的加载量为约50wt%至约200wt%。

48.权利要求45-47中任一项的方法,其中所述第二溶剂包含水性缓冲液。

49.权利要求48的方法,其中所述第二溶剂包含碳酸氢钠/碳酸钠缓冲溶液。

50.权利要求48或49的方法,其中所述第二溶剂进一步包含有机溶剂,诸如丙酮。

51.权利要求45-50中任一项的方法,其中所述第二ph为约5至约10。

52.权利要求45-51中任一项的方法,其中所述第二温度为约10℃至约60℃。

53.权利要求45-52中任一项的方法,其中所述第二时间段为约2h至约48h。


技术总结
公开了合成外消旋2‑(二氟甲基)‑1‑(烷氧基羰基)‑环丙烷甲酸和2‑(乙烯基)‑1‑(烷氧基羰基)‑环丙烷甲酸及其盐、诸如二环己胺盐的方法。还公开了用于制备对映体富集的(1R,2R)‑1‑((叔丁氧基羰基)氨基)‑2‑(二氟甲基)环丙烷‑1‑甲酸及其酯的方法。这些化合物是合成病毒蛋白酶抑制剂的有用中间体。

技术研发人员:M.J.阿布拉汉森;S.R.谢姆伯卡;A.B.基尔巴斯;R.D.钦克
受保护的技术使用者:艾伯维公司
技术研发日:2018.02.01
技术公布日:2019.11.15
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