本发明涉及药物化学技术领域，尤其涉及一系列取代2-苯基吡唑衍生物及其制备方法和应用。
背景技术：
kdm5b是一种重要的表观调控蛋白-组蛋白赖氨酸去甲基化酶，其可以特异性的清除组蛋白赖氨酸2/3上的甲基(h3k4me2/3)。kdm5b在人类多种癌症中具有至关重要的调节作用，目前已发现kdm5b在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌等多种肿瘤细胞中高表达，且有助于癌细胞增殖、侵袭和转移，并促进药物耐受性的发展和维持肿瘤细胞的生长。因此，研究开发特异性靶向kdm5b的小分子抑制剂，对开展肿瘤靶向治疗的研究与开发具有重大的科学意义和实际应用价值。
技术实现要素：
鉴于此，本发明的目的在于提供一系列取代2-苯基吡唑衍生物及其制备方法和应用。本发明提供的具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物能够抑制kdm5b，具有抗肿瘤的作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物：
x为o、s或n；
r1为甲基、乙基、异丙基、苯基、吡啶环、呋喃环、噻吩环、噻唑环或喹啉环；
r2为氟、氯、溴、甲基、甲氧基、三氟甲基、硝基、异丙基单取代或双取代或三取代；
r3为苯基、苄基、取代苯基、取代苄基、
本发明还提供了上述技术方案所述的取代2-苯基吡唑衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式1所示结构的取代酮与乙醇混合后，依次加入具有式2所示结构的取代苯肼和乙酸钠进行回流反应，得到具有式3所示结构的腙类化合物，
其中r1为甲基、乙基、异丙基、苯基、吡啶环、呋喃环、噻吩环、噻唑环或喹啉环；
r2为氟、氯、溴、甲基、甲氧基、三氟甲基、硝基、异丙基单取代或双取代或三取代；
将具有式3所示结构的腙类化合物与n,n-二甲基甲酰胺混合后，在冰水浴条件下加入三氯氧磷进行加热反应后调节ph值为8，得到具有式4所示结构的醛类化合物，
将所述具有式4所示结构的醛类化合物与二氧六环-水复合溶剂混合后，依次加入氢氧化钠和高锰酸钾，常温反应后，再依次加入双氧水、过滤、去除二氧六环、加水、调节ph值为1～2，得到具有式5所示结构的羧酸类化合物，
将所述具有式5所示结构的羧酸类化合物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和二氯甲烷混合后，加入r3-nh2或r3-oh或r3-sh进行缩合反应，得到具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物，
r3为苯基、苄基、取代苯基、取代苄基、
优选地，所述具有式1所示结构的取代酮、具有式2所示结构的取代苯肼和乙酸钠的摩尔比为1:1～1.6:1.2～2。
优选地，所述回流反应的温度为80℃，时间为6～8h。
优选地，所述加热反应的温度为80℃，时间为4～6h。
优选地，所述二氧六环-水复合溶剂中二氧六环和水的体积比为4:1。
优选地，所述具有式4所示结构的醛类化合物、氢氧化钠和高锰酸钾的摩尔比为1:1.2:1.2。
优选地，所述具有式5所示结构的羧酸类化合物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和r3-nh2的摩尔比为1:1.5:1:1.1。
优选地，所述调节ph值为1～2使用盐酸。
本发明还提供了上述技术方案所述具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物在抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供了具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物。本发明提供的具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物能够特异性的清除组蛋白赖氨酸2/3上的甲基(h3k4me2/3)，其在蛋白水平的ic50为10～100nm，可作为进一步开发的候选化合物或者先导化合物应用于抗肿瘤临床治疗药物。
具体实施方式
本发明提供了一种具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物：
x为o、s或n；
r1为甲基、乙基、异丙基、苯基、吡啶环、呋喃环、噻吩环、噻唑环或喹啉环；
r2为氟、氯、溴、甲基、甲氧基、三氟甲基、硝基、异丙基单取代或双取代或三取代；
r3为苯基、苄基、取代苯基、取代苄基、
在本发明中，所述具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物优选为n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1-苯基-3-临甲基苯基吡唑-4-酰胺、3-(4-氯苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1-苯基吡唑-4-酰胺、3-(4-甲氧基苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1-苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基-1-对甲基苯基吡唑-4-酰胺、1-(4-氯苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基-1-临甲基苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基-1-间甲基苯基吡唑-4-酰胺、1-(4-乙丙苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-吗啉丙基)-3-苯基-1-对甲基苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-吗啉丙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺、3-(4-氯苯基)-n-(2-吗啉丙基)-1-苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-二异丙基氨乙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-二异丙基氨乙基)-3-苯基-1-对甲基苯基吡唑-4-酰胺、n-(2-二异丙基氨乙基)-1,3-e二对甲基苯基吡唑-4-酰胺、n-丙酸甲酯-3-苯基-1-对甲苯基吡唑-4-酰胺、n-丙炔-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺、n-对甲苯基-3-苯基-1-对甲苯基吡唑-4-酰胺、n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-3-苯基-1-对甲苯基吡唑-4酰胺、n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-3-苯基-1-对甲氧基苯基吡唑-4酰胺、n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-1,3-二苯基吡唑-4酰胺、n-(2-甲基-2-(4-苯基哌嗪)丙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺或n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-1,3-二对甲苯基吡唑-4酰胺。
本发明还提供了上述技术方案所述的取代2-苯基吡唑衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式1所示结构的取代酮与乙醇混合后，依次加入具有式2所示结构的取代苯肼和乙酸钠进行回流反应，得到具有式3所示结构的腙类化合物，
其中r1为甲基、乙基、异丙基、苯基、吡啶环、呋喃环、噻吩环、噻唑环或喹啉环；
r2为氟、氯、溴、甲基、甲氧基、三氟甲基、硝基、异丙基单取代或双取代或三取代；
将具有式3所示结构的腙类化合物与n,n-二甲基甲酰胺混合后，在冰水浴条件下加入三氯氧磷进行加热反应后调节ph值为8，得到具有式4所示结构的醛类化合物，
将所述具有式4所示结构的醛类化合物与二氧六环-水复合溶剂混合后，依次加入氢氧化钠和高锰酸钾，常温反应后，再依次加入双氧水、过滤、去除二氧六环、加水、调节ph值为1～2，得到具有式5所示结构的羧酸类化合物，
将所述具有式5所示结构的羧酸类化合物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和二氯甲烷混合后，加入r3-nh2或r3-oh或r3-sh进行缩合反应，得到具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物，
r3为苯基、苄基、取代苯基、取代苄基、
本发明将具有式1所示结构的取代酮与乙醇混合后，依次加入具有式2所示结构的取代苯肼和乙酸钠进行回流反应，得到具有式3所示结构的腙类化合物，
其中r1为甲基、乙基、异丙基、苯基、吡啶环、呋喃环、噻吩环、噻唑环或喹啉环；
r2为氟、氯、溴、甲基、甲氧基、三氟甲基、硝基、异丙基单取代或双取代或三取代。
在本发明中，所述具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物的制备原理如下式所示：
在本发明中，所述具有式1所示结构的取代酮、具有式2所示结构的取代苯肼和乙酸钠的摩尔比优选为1:1～1.6:1.2～2，更优选为1:1.1:1.5。本发明对所述具有式1所示结构的取代酮、具有式2所示结构的取代苯肼的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
在本发明中，所述回流反应的温度优选为80℃，时间优选为6～8h。
回流反应完成后，本发明优选蒸去所得回流反应产物中的乙醇，加水析出固体，抽滤，得到有式3所示结构的腙类化合物。本发明对所述蒸去乙醇、加水以及抽滤的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方式即可。
得到具有式3所示结构的腙类化合物后，本发明将具有式3所示结构的腙类化合物与n,n-二甲基甲酰胺混合后，在冰水浴条件下加入三氯氧磷进行加热反应后调节ph值为8，得到具有式4所示结构的醛类化合物，
在本发明中，所述加热反应的温度优选为80℃，时间优选为4～6h。
在本发明中，所述具有式3所示结构的腙类化合物与三氯氧磷的摩尔比优选为1:1.1:1.5。
加热反应完成后，本发明优选用水淬灭反应。
在本发明中，优选使用氢氧化钠溶液调节ph值为8。
调节ph值为8后，本发明优选将所得产物抽滤，得到具有式4所示结构的醛类化合物。
得到具有式4所示结构的醛类化合物后，本发明将所述具有式4所示结构的醛类化合物与二氧六环-水复合溶剂混合后，依次加入氢氧化钠和高锰酸钾，常温反应后，再依次加入双氧水、过滤、去除二氧六环、加水、调节ph值为1～2，得到具有式5所示结构的羧酸类化合物，
在本发明中，所述二氧六环-水复合溶剂中二氧六环和水的体积比优选为4:1。
在本发明中，所述具有式4所示结构的醛类化合物、氢氧化钠和高锰酸钾的摩尔比优选为1:1.2:1.2。
在本发明中，所述常温反应的温度优选为2h。
在本发明中，所述调节ph值为1～2优选使用盐酸。本发明对所述盐酸的浓度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的盐酸即可。
得到具有式5所示结构的羧酸类化合物后，本发明将所述具有式5所示结构的羧酸类化合物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和二氯甲烷混合后，加入r3-nh2进行缩合反应，得到具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物，
r3为苯基、苄基、取代苯基、取代苄基、
在本发明中，所述具有式5所示结构的羧酸类化合物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)和r3-nh2的摩尔比优选为1:1.5:1:1.1。本发明对所述r3-nh2的具体来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
在本发明中，所述缩合反应的温度优选为常温，所述缩合反应优选在搅拌条件下进行。
在本发明中，优选所述具有式5所示结构的羧酸类化合物、edci、hatu和二氯甲烷混合30min后再加入r3-nh2。
缩合反应完成后，本发明优选将所得缩合反应产物通过柱层析纯化得到具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物。本发明对所述柱层析纯化的具体操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方式即可。
本发明还提供了上述技术方案所述具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物在抗肿瘤药物中的应用；在本发明中，所述具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物优选作为kdm5b抑制剂及抗肿瘤药物使用，也可以作为制备抗肿瘤药物的有效成分。
下面结合实施例对本发明提供的一系列取代2-苯基吡唑衍生物及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-1,3-diphenyl-1h-pyrazole-4-carbox-amide(a3)
1)将1eq的苯乙酮溶于适量乙醇中于50ml烧瓶，依次加入1.1eq的苯肼和1.5eq的乙酸钠，加热80℃回流反应，6h反应完全，停止反应蒸去溶剂乙醇，加水析出固体，抽滤，得到的腙类化合物α-甲基苄稀-2-苯基肼；
2)以dmf为溶剂，冰浴下缓慢加入三氯氧磷，搅拌1h后加入上步的腙类化合物于80℃加热反应4h，反应结束后，将体系用水淬灭，加1m氢氧化钠溶液调ph＝8，抽滤得醛类化合物1,3-二苯基吡唑-4甲醛。
3)以二氧六环/水(4:1)为溶剂，依次1eq醛类化合物1,3-二苯基吡唑-4甲醛、1.2eq的氢氧化钠和1.2eq的高锰酸钾，常温反应2h，完全转化后，缓慢加入双氧水，过滤掉体系中的固体杂质，真空去除二氧六环，加水后用1m的hcl调ph值为1，析出白色固体，过滤得到羧酸类化合物1,3-二苯基吡唑-4甲酸。
4)依次将1eq羧酸类化合物1,3-二苯基吡唑-4甲醛、1.5eqedci与1eqhatu溶于二氯甲烷中，30分钟后加入1.1eq2-甲基-2-吗啉丙基胺，室温搅拌，待反应完全后通过柱层析纯化得到最终化合物a3。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率79％，mp:165.9-166.4℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.53(s,1h),7.79–7.70(m,4h),7.54–7.44(m,5h),7.34(t,j＝7.4hz,1h),6.41(s,1h),3.30(t,j＝14.8hz,4h),3.26(d,j＝4.5hz,2h),2.32–2.24(m,4h),0.95(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.90,150.84,139.38,132.58,131.22,129.53,129.20,128.92,127.27,119.38,118.31,67.26,55.35,47.09,45.36,21.08.ms(esi):m/z405.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc24h28n4o2[m+h]+m/z:405.2290,found:405.2289.
实施例2
n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1-苯基-3-临甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-1-phenyl-3-(o-tolyl)-1h-pyrazole-4-car-boxamide(9c)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用2-甲基苯乙酮替换苯乙酮，得到最终化合物9c。
进行检测，结果如下：
淡黄色固体，产率76％，mp:154.9-156.1℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.60(s,1h),7.76(d,j＝7.9hz,2h),7.52–7.44(m,3h),7.35(m,4h),6.08(s,1h),3.44(s,4h),3.19(s,2h),2.31(s,3h),2.25(s,4h),0.82(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.72,150.22,139.40,137.98,132.18,130.88,130.57,129.57,127.23,126.46,119.43,119.18,67.24,55.05,47.13,45.40,20.87,20.08.ms(esi):m/z419.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc25h30n4o2,[m+h]+m/z:hmass:419.2447,found:419.2448.
实施例3
3-(4-氯苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1-苯基吡唑-4-酰胺
3-(4-chlorophenyl)-n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-1-phenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9d)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用4-氯苯乙酮替换苯乙酮，得到最终化合物9d。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率81％，mp:165.9-166.7℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.52(s,1h),7.75(d,j＝7.8hz,2h),7.70(d,j＝8.3hz,2h),7.49(t,j＝7.9hz,4h),7.35(t,j＝7.3hz,1h),6.40(s,1h),3.38(s,4h),3.28(s,2h),2.34(s,4h),0.99(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.74,139.28,135.29,131.28,130.65,129.61,129.04,127.43,119.39,67.16,46.99,45.45,21.12.ms(esi):m/z439.1[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc24h27cln4o2[m+h]+m/z:439.1901,found:439.1902.
实施例4
3-(4-甲氧基苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-1-苯基吡唑-4-酰胺
3-(4-methoxyphenyl)-n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-1-phenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9e)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用4-甲氧基苯乙酮替换苯乙酮得到最终化合物9e。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率79％，mp:211.1-212.3℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),7.75(d,j＝7.8hz,2h),7.64(d,j＝8.6hz,2h),7.47(t,j＝7.9hz,2h),7.33(t,j＝7.4hz,1h),7.03(d,j＝8.7hz,2h),6.43(s,1h),3.85(s,3h),3.32(s,4h),3.26(d,j＝4.5hz,2h),2.34–2.24(m,4h),0.96(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.95,160.39,150.66,139.42,131.13,130.82,129.54,127.17,124.77,119.32,118.20,114.39,67.24,55.33,47.06,45.40,21.11.ms(esi):m/z435.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc25h30n4o3,[m+h]+m/z:hmass:435.2396,found:435.2395.
实施例5
n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基-1-对甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-3-phenyl-1-(p-tolyl)-1h-pyrazole-4-carboxamide(9b)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基苯肼替换苯肼，得到最终化合物9b。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率65％，mp:184.7-186.6℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.48(s,1h),7.71(d,j＝6.8hz,2h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.53–7.44(m,3h),7.27(d,j＝4.0hz,2h),6.38(s,1h),3.30(s,4h),3.25(d,j＝4.4hz,2h),2.39(s,3h),2.31–2.22(m,4h),0.93(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.94,150.58,137.20,137.14,132.67,131.12,130.06,129.52,129.33,129.13,128.90,119.38,119.32,118.07,67.28,55.26,47.08,45.35,21.09,20.98.ms(esi):m/z419.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc25h30n4o2,[m+h]+m/z:hmass:419.2447,found:419.2448.
实施例6
1-(4-氯苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基吡唑-4-酰胺
1-(4-chlorophenyl)-n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-3-phenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9f)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对氯苯肼替换苯肼，得到最终化合物9f。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率79％,mp:207.5-208.9℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.50(s,1h),7.71(d,j＝7.1,4.9hz,4h),7.61–7.35(m,6h),6.38(s,1h),3.30(s,4h),3.26(s,2h),2.27(s,4h),0.93(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.64,151.07,137.91,132.85,132.36,131.15,129.68,129.40,128.96,120.46,118.73,67.28,55.25,47.11,45.37,21.08.ms(esi):m/z439.1[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc24h27cln4o2,[m+h]+m/z:hmass:439.1901found:439.1903.
实施例7
n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基-1-临甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-3-phenyl-1-(o-tolyl)-1h-pyrazole-4-carboxamide(9g)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用2-甲基苯肼替换苯肼，得到最终化合物9g。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率77％，mp:107.5-108.3℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),7.71(d,j＝7.0hz,2h),7.62(s,1h),7.48(m,4h),7.35(t,j＝7.8hz,1h),7.15(d,j＝7.5hz,1h),6.37(s,1h),3.31(s,4h),3.25(d,j＝4.3hz,2h),2.43(s,3h),2.27(s,4h),0.93(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.87,150.71,139.73,139.33,132.64,131.27,129.53,129.34,129.18,128.93,128.07,120.18,118.22,116.39,67.29,55.25,47.10,45.36,21.46,21.09.ms(esi):m/z419.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc25h30n4o2,[m+h]+m/z:hmass:419.2447,found:419.2448.
实施例8
n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基-1-间甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-3-phenyl-1-(m-tolyl)-1h-pyrazole-4-carboxamide(9h)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用间甲基苯肼替换苯肼，得到最终化合物9h。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率75％，mp:136.6-137.6℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.19(s,1h),7.71(d,j＝6.9hz,2h),7.53–7.43(m,3h),7.40(d,j＝7.6hz,1h),7.36–7.28(m,3h),6.41(s,1h),3.32(s,4h),3.27(d,j＝4.5hz,2h),2.34(s,3h),2.31–2.26(m,4h),0.95(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ163.03,150.22,139.17,135.10,133.56,132.66,131.45,129.54,129.05,128.95,128.84,126.74,126.02,117.13,67.32,55.29,47.08,45.37,21.11,18.20.ms(esi):m/z419.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc25h30n4o2,[m+h]+m/z:hmass:419.2447,found:419.2448.
实施例9
1-(4-乙丙苯基)-n-(2-甲基-2-吗啉丙基)-3-苯基吡唑-4-酰胺
1-(4-isopropylphenyl)-n-(2-methyl-2-morpholinopropyl)-3-phenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9i)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用4-丙叉基苯肼替换苯肼，得到最终化合物9i。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率82％，mp:151.5-153.8℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.48(s,1h),7.71(d,j＝6.8hz,2h),7.66(d,j＝8.5hz,2h),7.47(m,3h),7.32(d,j＝8.4hz,2h),6.37(s,1h),3.31(s,4h),3.25(s,2h),2.96(m,1h),2.32–2.23(d,j＝4.4hz,4h),1.28(d,j＝6.9hz,6h),0.91(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.94,150.57,148.21,137.35,132.70,131.12,129.53,129.12,128.89,127.47,119.46,118.07,67.29,55.25,47.09,45.36,33.72,23.93,21.09.ms(esi):m/z447.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc27h34n4o2,[m+h]+m/z:hmass:447.2760,found:447.2762.
实施例10
n-(2-吗啉丙基)-3-苯基-1-对甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-morpholinoethyl)-3-phenyl-1-(p-tolyl)-1h-pyrazole-4-carboxamide(9r)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基肼替换苯肼，用2-吗啉丙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9r。
进行检测，结果如下：
淡黄色固体，产率81％，mp:144.6-144.7℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.46(s,1h),7.70(d,j＝7.9,1.5hz,2h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.53–7.43(m,3h),7.27(t,j＝4.0hz,2h),6.27(s,1h),3.52–3.37(m,6h),2.42–2.35(m,5h),2.26(d,j＝4.2hz,4h).13cnmr(100.13mhz,dmso)δ162.66,150.29,136.83,136.29,132.39,130.02,129.74,128.37–127.83,118.50,117.79,66.14,57.29,53.22,36.04,20.45.ms(esi):m/z391.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc23h26n4o2,[m+h]+m/z:hmass:391.2134,found:391.2135.
实施例11
n-(2-吗啉丙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-morpholinoethyl)-1,3-diphenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9a)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用2-吗啉丙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9a。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率82％，mp:161.6-162.5℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),7.73(dd,j＝20.2,7.3hz,4h),7.48(d,j＝6.9hz,5h),7.34(t,j＝7.2hz,1h),6.27(s,1h),3.51–3.37(m,6h),2.37(t,j＝5.6hz,2h),2.25(s,4h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.62,150.90,139.40,132.45,131.01,129.47,129.13,128.80,127.30,119.41,118.30,66.72,56.58,53.04,35.65.ms(esi):m/z377.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc22h24n4o2,[m+h]+m/z:hmass:377.1977,found:377.1976.
实施例12
3-(4-氯苯基)-n-(2-吗啉丙基)-1-苯基吡唑-4-酰胺
3-(4-chlorophenyl)-n-(2-morpholinoethyl)-1-phenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9j)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对氯苯乙酮替换苯乙酮，用2-吗啉丙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9j。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率82％，mp:163.6-164.0℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),7.71(dd,j＝23.5,8.0hz,4h),7.48(m,4h),7.35(t,j＝7.3hz,1h),6.25(s,1h),3.50(s,4h),3.46–3.39(m,2h),2.41(t,j＝5.6hz,2h),2.29(s,4h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.48,149.79,139.29,135.23,131.12–130.59,129.63,128.94,127.46,119.42,118.31,66.73,56.54,53.10,35.55.ms(esi):m/z411.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc22h23cln4o2,[m+h]+m/z:hmass:411.1588,found:411.1586.
实施例13
n-(2-二异丙基氨乙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-(diisopropylamino)ethyl)-1,3-diphenyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9n)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用2-二异丙基氨乙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9n。
进行检测，结果如下：
黄色固体，产率44％，mp:197.2-198.5℃.mp:132.5℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.77(s,1h),7.85–7.75(m,4h),7.44(ddd,j＝11.1,8.6,5.4hz,5h),7.32(t,j＝7.4hz,1h),3.54(s,2h),3.18(s,2h),2.84(d,j＝32.2hz,2h),1.10(s,12h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ163.14,139.37,132.45,130.34,129.53,129.23,128.78,128.40,127.14,119.32,51.62,45.39,38.04,29.69,19.35.ms(esi):m/z391.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc24h30n4o,[m+h]+m/z:hmass:391.2498,found:391.2497.
实施例14
n-(2-二异丙基氨乙基)-3-苯基-1-对甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-(diisopropylamino)ethyl)-3-phenyl-1-(p-tolyl)-1h-pyrazole-4-carboxamide(9s)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基苯肼替换苯肼，用2-二异丙基氨乙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9s。
进行检测，结果如下：
黄色固体，产率52％，mp:189.6-190.9℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.58(s,1h),7.75(d,j＝7.0hz,2h),7.65(d,j＝8.2hz,2h),7.43(td,j＝14.0,6.7hz,3h),7.26(d,j＝7.2hz,2h),3.44(s,2h),3.03(s,2h),2.67(s,2h),2.38(s,3h),1.25–0.71(m,12h).13cnmr(100.13mhz,dmso)δ162.77,136.73,136.50,132.35,130.09,128.55,128.21,127.89,118.49,45.41,20.45,8.48.ms(esi):m/z405.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc25h32n4o,[m+h]+m/z:hmass:405.2654,found:405.2655.
实施例15
n-(2-二异丙基氨乙基)-1,3-e二对甲基苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-(diisopropylamino)ethyl)-1,3-di-p-tolyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9k)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基苯乙酮替换苯乙酮，用对甲基苯肼替换苯肼，用2-二异丙基氨乙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9k。
进行检测，结果如下：
淡黄色固体，产率52％，mp:134.5-137.0℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.43(s,1h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.59(d,j＝8.0hz,2h),7.27(d,j＝2.4hz,2h),7.25(d,j＝3.3hz,2h),6.31(s,1h),3.32(dd,j＝14.1,9.0hz,2h),2.85(s,2h),2.51(s,2h),2.39(d,j＝2.2hz,6h),0.84(d,j＝6.1hz,12h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.94,138.82,137.24,136.98,130.57,130.01,129.51,129.48,129.06,119.25,38.54,21.30,20.97,20.50.ms(esi):m/z419.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc26h34n4o,[m+h]+m/z:hmass:419.2811,found:419.2812.
实施例16
n-丙酸甲酯-3-苯基-1-对甲苯基吡唑-4-酰胺
methyl3-(3-phenyl-1-(p-tolyl)-1h-pyrazole-4-carboxamido)propanoate(9t)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基苯肼替换苯肼，23-氨基丙酸甲酯替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9t。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率79％，mp:139.6-140.0℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.43(s,1h),7.67(dd,j＝7.5,1.8hz,2h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.51–7.44(m,3h),7.27(s,1h),7.25(s,1h),6.15(s,1h),3.60(s,3h),3.59–3.53(m,2h),2.52(t,j＝6.1hz,2h),2.39(s,3h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ172.37,162.75,150.73,137.25,137.13,132.24,130.75,130.05,129.18,129.07,128.84,119.36,117.77,51.69,34.82,33.85,20.97.ms(esi):m/z364.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc21h21n3o3,[m+na]+m/z:hmass:386.1481,found:386.1483.
实施例17
n-丙炔-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺
1,3-diphenyl-n-(prop-2-yn-1-yl)-1h-pyrazole-4-carboxamide(9o)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用3-氨基丙炔替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9o。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率87％，mp:186.1.6-186.9℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),7.75(d,j＝7.7hz,2h),7.71(dd,j＝7.8,1.6hz,2h),7.54–7.44(m,5h),7.35(t,j＝7.4hz,1h),5.89(s,1h),4.18–4.03(m,2h),2.18(t,j＝2.5hz,1h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.28,150.94,139.28,131.95,131.21,129.59,129.36,129.25,129.01,127.42,119.44,117.43,79.12,71.54,29.10.ms(esi):m/z302.1[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc19h15n3o,[m+na]+m/z:hmass:324.1113,found:324.1112.
实施例18
n-对甲苯基-3-苯基-1-对甲苯基吡唑-4-酰胺
3-phenyl-n,1-di-p-tolyl-1h-pyrazole-4-carboxamide(9u)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基苯肼替换苯肼，用对甲基苯胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9u。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率80％，mp:154.6-154.9℃.1hnmr(400mhz,dmso)δ10.11(s,1h),9.02(s,1h),7.84(t,j＝8.3hz,4h),7.58(d,j＝8.2hz,2h),7.43(t,j＝7.1hz,2h),7.38(t,j＝7.9hz,3h),7.15(d,j＝8.2hz,2h),2.37(s,3h),2.27(s,3h).13cnmr(100.13mhz,dmso)δ161.35,150.71,136.81,136.65,136.40,132.37,132.31,130.15,130.07,129.05,128.23,128.12,128.09,119.70,118.53,117.85,20.46.ms(esi):m/z368.2[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc24h21n3o,[m+h]+m/z:hmass:368.1763,found:368.1764.
实施例19
n-(2-甲基-2-(4-苯基哌嗪)丙基)-1,3-二苯基吡唑-4-酰胺
n-(2-methyl-2-(4-phenylpiperazin-1-yl)propyl)-1,3-diphenyl-1h-pyraz-ole-4-carboxamide(9p)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用(2-甲基-2-(4-苯基哌嗪)丙基胺替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9p。
进行检测，结果如下：
淡黄色固体，产率52％，mp:174.7-176.0℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.52(s,1h),7.75(d,j＝7.7hz,2h),7.70–7.63(m,2h),7.51–7.37(m,5h),7.33(t,j＝7.4hz,1h),7.27–7.21(m,2h),6.86(t,j＝8.6hz,3h),6.42(s,1h),3.31(d,j＝4.4hz,2h),2.82(d,j＝19.0hz,4h),2.56–2.38(m,4h),0.98(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ162.90,151.24,150.85,139.39,132.56,131.13,129.54,129.47,129.26,129.05,128.99,127.23,119.66,119.37,118.39,115.96,55.21,49.53,47.51,44.93,21.38.ms(esi):m/z480.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc30h33n5o,[m+h]+m/z:hmass:480.2763,found:480.2764
实施例20
n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-3-苯基-1-对甲苯基吡唑-4酰胺
(3-phenyl-1-(p-tolyl)-1h-pyrazol-4-yl)(4-(2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)piperazin-1-yl)methanone(9v)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲基苯肼替换苯肼，4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9v。
进行检测，结果如下：
白色固体，产率35％，mp:67.9-74.9℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(s,1h),7.74(d,j＝7.9hz,2h),7.60(d,j＝7.9hz,2h),7.48(t,j＝7.8hz,2h),7.33(t,j＝7.3hz,1h),7.23(d,j＝7.9hz,2h),3.78(s,2h),3.21(s,2h),3.07(m,4h),2.89(s,2h),2.66(t,j＝6.2hz,2h),2.49(s,2h),2.39(s,3h),1.99(s,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ164.56,150.22,139.56,138.61,129.55,129.44,128.28,127.49,127.04,119.28,116.64,54.39,52.64,23.27,21.36.ms(esi):m/z444.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc27h33n5o,[m+h]+m/z:hmass:444.2763,found:444.2762
实施例21
n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-3-苯基-1-对甲氧基苯基吡唑-4酰胺
(1-(4-methoxyphenyl)-3-phenyl-1h-pyrazol-4-yl)(4-(2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)piperazin-1-yl)methanone(9l)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用对甲氧基苯肼替换苯肼，4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9l。
进行检测，结果如下：
黄色液体，产率26％.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(s,1h),7.73(d,j＝9.9hz,2h),7.65(d,j＝5.7hz,2h),7.48(t,j＝7.9hz,2h),7.32(t,j＝15.2,7.9hz,1h),6.95(d,j＝8.8hz,2h),3.85(s,3h),3.82–3.68(m,2h),3.38–3.03(m,6h),2.98(t,j＝5.9hz,2h),2.73(t,j＝6.2hz,2h),2.49(s,2h),2.01(d,j＝34.9hz,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ164.59,160.06,149.91,139.51,129.55,128.87,128.19,127.00,124.85,119.21,116.28,114.18,55.40,54.32,53.48,52.57,52.09,23.15.ms(esi):m/z460.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc27h33n5o2,[m+h]+m/z:hmass:460.2712,found:460.2713
实施例22
n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-1,3-二苯基吡唑-4酰胺
(1,3-diphenyl-1h-pyrazol-4-yl)(4-(2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)piperazin-1-yl)methanone(9q)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于用4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9q。
进行检测，结果如下：
黄色固体，产率34％，mp:81.9-82.7℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.14(s,1h),7.75(d,j＝7.4hz,2h),7.71(d,2h),7.47(t,j＝7.9hz,2h),7.41(t,j＝7.2hz,2h),7.37(dd,j＝6.5,3.8hz,1h),7.32(d,j＝7.4hz,1h),3.77(s,2h),3.25(s,2h),3.06(dd,j＝18.6,11.2hz,4h),2.97(t,j＝6.1hz,2h),2.58(t,j＝6.2hz,2h),2.47(s,2h),2.01(d,j＝24.7hz,6h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ164.51,150.10,139.47,132.22,129.58,128.79,128.72,128.25,127.58,127.15,119.27,116.64,54.59,54.16,52.52,23.13.ms(esi):m/z430.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc26h31n5o,[m+h]+m/z:hmass:430.2607,found:430.2609.
实施例23
n-(4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪)-1,3-二对甲苯基吡唑-4酰胺
(1,3-di-p-tolyl-1h-pyrazol-4-yl)(4-(2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)piperazin-1-yl)methanone(9m)
制备方法与实施例1相同，区别仅在于对甲基苯肼替换苯肼，用对甲基苯乙酮代替苯乙酮，用4-(2-吡咯烷基)乙基哌嗪替换2-甲基-2-吗啉丙基胺，得到最终化合物9m。
进行检测，结果如下：
黄色固体，产率33％，mp:91.9-93.7℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07(s,1h),7.60(dd,j＝11.7,8.3hz,4h),7.25(s,2h),7.21(d,j＝7.9hz,2h),3.76(s,2h),3.45(s,2h),3.23(s,2h),3.04–2.91(m,4h),2.89(t,j＝6.2hz,2h),2.56(t,j＝6.4hz,2h),2.44(d,j＝24.1hz,2h),2.38(d,j＝4.7hz,6h),2.01(s,2h),1.94(s,4h).13cnmr(100.13mhz,cdcl3)δ164.68,149.91,138.49,137.29,136.94,130.05,129.42,128.12,127.40,119.19,116.22,54.62,52.76,23.17,21.32,20.96.ms(esi):m/z458.3[m+h]+.hr-ms(esi)calcdforc28h35n5o,[m+h]+m/z:hmass:458.2920,found:458.2919.
抗肿瘤活性实验方法：在384孔板(perkinelmer,usa)中，加入4nmkdm5b重组物孵育候选化合物(即本发明实施例1～23制得的最终产物)10min，而后加入反应底物肽和64nm荧光标记的h3k4me3于37℃恒温孵育10min。将链霉素供体珠子(lance,perkinelmer,usa)和eu-w1024-标记的h3k4me1-2抗体作为受体珠，后用荧光酶标仪(envision,perkinelmer,usa)lance模式下检测荧光强度。最后的数据以空白组为对照，用graphpadprism6拟合非线性回归曲线得到ic50，检测结果如表1所示，由表1可以看出，本发明提供的具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物蛋白水平的ic50为10～100nm，可作为进一步开发的候选化合物或者先导化合物应用于抗肿瘤临床治疗药物。
表1具有式i所示结构的取代2-苯基吡唑衍生物抗肿瘤活性数据
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。