本发明涉及药物化学领域，特别涉及一系列新型的2-氨基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。本发明还涉及该类化合物用于制备治疗和/或预防恶性血液疾病和其它增生性疾病的药物中的用途。
背景技术：
恶性血液病是造血系统障碍引起的血液系统肿瘤性疾病，主要包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合症以及多发性骨髓瘤等疾病。由于恶性血液疾病患者造血功能异常，加之化疗或放疗抑制了患者骨髓造血及免疫功能，且易合并医院感染，从而导致病情加重甚至死亡。
jak激酶(januskinase)是一种细胞内非受体型酪氨酸蛋白激酶，而jak2是jak激酶家族中的重要成员之一。jak2可与stat家族的多个成员构成细胞信号转导通路，如jak2-stat3和jak2-stat5等。正常生理情况下，促红细胞生成素、白介素、促血小板生成素等多种细胞因子与受体结合，使受体发生同源或异源的寡聚化，从而激活与受体偶联的jak2激酶发生自磷酸化。活化的jak2催化受体上的酪氨酸残基磷酸化并与周围的氨基酸形成“停泊位点”，使含有sh2结构域的stat蛋白与其结合并发生磷酸化。活化的stats能形成同源或异源的二聚体并迅速进入细胞核内，诱导基因的转录。jak2-stats信号通路是细胞信号转导的重要途径，对调节人体正常的生理和病理反应发挥重要作用。jak2异常的活性会使jak2-stats信号通路调控失常，从而导致各种恶性疾病的发生。
flt3是iii型受体酪氨酸激酶家族的成员之一，在造血细胞和淋巴细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥重要作用。flt3基因突变会导致激酶的异常活化，在不依赖于配体的情况下，发生自身磷酸化，从而激活一系列下游信号通路，导致造血细胞和淋巴细胞异常增殖，引发多种恶性血液疾病。因此，抑制flt3激酶及其突变体是治疗相关血液疾病特别是aml的有效方法。
jak2和flt3激酶的异常活性与恶性血液疾病的发生密切相关，且mf、淋巴瘤和aml在恶性血液病中的医疗需求未得到满足。因此，jak2/flt3抑制剂的研究成为治疗此类疾病的新领域。
目前针对jak2/flt3抑制剂的相关文献报道较少，且没有批准上市的jak2/flt3小分子抑制剂，但有些活性突出且治疗效果好的化合物已处于临床前及临床研究阶段，如：pacritinib、fedratinib、lestaurtinib等。文献报道的momelotinib是由吉利德公司开发的一种2-氨基嘧啶类jak1和jak2激酶抑制剂，ic50分别为11nm和18nm。该药目前处于临床ⅲ期研究阶段，用于治疗骨髓纤维化，红细胞增多症及血小板增多症。
本发明人在参考文献的基础上，设计并合成了一系列2-氨基嘧啶类衍生物，经体外jak2和flt3激酶抑制活性测试，结果表明均具有抑制活性。
技术实现要素：
本发明涉及通式i所示的2-氨基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或其前药，
其中，
r1选自氢，卤素，(c1-c6)烷基，氰基，硝基或氨基；
r2为(c1-c6)烷基，(c1-c6)烷氧基，3-12元饱和或部分不饱和碳环，包含n、o和/或s的4-7元杂环，-nr3r4，-conr3r4，-nhconr3r4，-o(ch2)mnr3r4，-so2(ch2)nnr3r4，-so2(ch2)nconr3r4；
其中，r3和r4相同或不同，分别独立的选自氢，(c1-c6)烷基，(c3-c7)环烷基，(c1-c6)烷基酰基，(c1-c6)烷氧基，(c2-c6)烯基，(c2-c6)炔基；
或r3和r4与和它们所连接的氮原子一起形成4-10元杂环基或5-10元杂芳基，所述杂环基或杂芳基除了与r3和r4连接的氮原子外，任选含有0-4个选自n、o和/或s的杂原子，除了与r3和r4连接的氮原子外，所述杂环基任选包括0-2个碳碳双键或碳碳三键，所述杂环基或杂芳基任选被0-3个相同或不同的r5取代；
r5为(c1-c6)烷基，(c3-c7)环烷基。
m为1-3的整数；
n为0-3的整数；
r6为(c1-c6)烷基，(c3-c7)环烷基，6-10元芳基，5-10元杂芳基，6-10元芳基甲基，5-10元杂芳基甲基，所述芳基或者杂芳基任选被0-3个相同或不同的r7取代。
r7为羟基，卤素，卤代(c1-c6)烷基，卤代(c1-c6)烷氧基，硝基，氨基，氰基，(c1-c6)烷基，(c2-c6)烯基，(c2-c6)炔基，(c1-c6)烷氧基，任选被羟基，氨基或卤代的(c1-c6)烷基或(c1-c6)烷氧基，被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基，(c1-c6)烷基酰胺基，游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基，(c1-c6)烷基亚磺酰基，(c1-c6)烷基磺酰基，(c1-c6)烷氧基，(c1-c6)烷基，(c1-c6)烷基酰基，(c1-c6)氨基甲酰基，被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基甲酰基，(c1-c3)亚烷基二氧基，烯丙基。
按照本发明，优选通式(i)的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或其前药，
其中，
r1选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、氰基、硝基或氨基；
r2为-nr3r4、-conr3r4、-nhconr3r4、-o(ch2)mnr3r4、-so2(ch2)nnr3r4、-so2(ch2)nconr3r4；
其中，r3和r4与和它们所连接的氮原子一起形成4-10元杂环基，所述杂环基除了与r3和r4连接的氮原子外，任选含有0-4个选自n、o和/或s的杂原子，且被0-3个相同或不同的r5取代；
r5为(c1-c4)烷基、(c3-c6)环烷基
m为1-3的整数；
n为0-3的整数；
r6为(c1-c4)烷基、(c3-c6)环烷基、苯基、5-6元杂芳基、苯甲基、5-6元杂芳基甲基，所述苯基或者杂芳基任选被0-3个相同或不同的r7取代。
r7为羟基，，卤素，卤代(c1-c6)烷基，卤代(c1-c6)烷氧基，硝基，氨基，氰基，(c1-c6)烷基，(c2-c6)烯基，(c2-c6)炔基，(c1-c6)烷氧基，任选被羟基，氨基或卤代的(c1-c6)烷基或(c1-c6)烷氧基，被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基，(c1-c6)烷基酰胺基，游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基，(c1-c6)烷基亚磺酰基，(c1-c6)烷基磺酰基，(c1-c6)烷氧基，(c1-c6)烷基，(c1-c6)烷基酰基，(c1-c6)氨基甲酰基，被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基甲酰基，(c1-c3)亚烷基二氧基，烯丙基。
本发明更为优选通式(i)的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或其前药，其中
r1选自氢、甲基；
r2为-nr3r4、-o(ch2)mnr3r4；
m为1～3之间的整数；
r3和r4与和它们所连接的氮原子一起形成
r6为(c3-c6)环烷基、苯基、5-6元杂芳基，所述苯基或者杂芳基任选被0-3个相同或不同的r7取代；
r7为羟基、卤素、卤代(c1-c6)烷基、卤代(c1-c6)烷氧基、硝基、氨基、氰基、(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基、(c2-c6)炔基、(c1-c6)烷氧基、任选被羟基、氨基或卤代的(c1-c6)烷基或(c1-c6)烷氧基、被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基、(c1-c6)烷基酰胺基、游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基、(c1-c6)烷基亚磺酰基、(c1-c6)烷基磺酰基、(c1-c6)烷氧基、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷基酰基、(c1-c6)氨基甲酰基、被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基甲酰基、(c1-c3)亚烷基二氧基、烯丙基。
本发明特别优选通式(i)的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或其前药，
其中，
r1选自氢、甲基；
r2为
r6为环丙基，环戊基，苯基，
r7为羟基，卤素，卤代(c1-c3)烷基，卤代(c1-c3)烷氧基，硝基，氨基，氰基，(c1-c3)烷基，(c1-c3)烷氧基，被1-2个(c1-c3)烷基取代的氨基，(c1-c3)烷基酰胺基，游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基，(c1-c3)烷基磺酰基，(c1-c3)烷基酰基，(c1-c3)氨基甲酰基，被1-2个(c1-c6)烷基取代的氨基甲酰基。本发明特别优选下列通式(i)的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或其前药：
n-(4-甲氧基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-三氟甲氧基)苯基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-二乙氨基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-苯基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氟苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-[5-(叔丁基)异恶唑-3-基]-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
4-[4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺基]苯甲酸甲酯；
n-环丙基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-环戊基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-硝基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氰基-3-氟苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-异丙氧基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-甲氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氨基磺酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(3-氰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(3-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(2-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰氨基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-甲基磺酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-[2-({4-[2-(吡咯烷-1-基)乙氧基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-[2-({4-[3-(吡咯烷-1-基)丙氧基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(2-吗啉氧基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(3-吗啉丙氧基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(1-硫代吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-乙酰苯基)-4-(5-甲基-2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氰基苯基)-4-(5-甲基-2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氰基苯基)-4-(6-甲基-2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-苄基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺；
n-(4-氟苄基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。
按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明的通式(i)的化合物可以与酸形成其药学上可接受的盐。优选的酸为盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、硝酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸、三氟乙酸和天冬氨酸；特别优选的酸为盐酸和甲磺酸。
本发明还包括本发明衍生物的前药。本发明衍生物的前药是通式(i)的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
除非另外指出，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯或溴代；“烷基”是指直链或支链的烷基；“环烷基”是指取代或未取代的环烷基；“烷氧基”是指直链或支链的烷氧基；“烯基”是指直链或支链的烯基；“炔基”是指直链或支链的炔基；“芳基”是指无取代基或连有取代基的苯基；“杂芳基”是指含有一个或多个选自n、o、s杂原子的单环或多环的环状体系，环状体系是芳香性的，如咪唑基、吡啶基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基，噻唑基，苯并噻唑基，噁唑基，异噁唑基，萘基，喹啉基，异喹啉基，苯并咪唑基，苯并噁唑基等；“饱和或部分饱和的杂环基”是指含有一个或多个选自n、o、s的杂原子的单环或多环的环状体系，如吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、咪唑烷基和噻唑啉基等。
本发明还包括药物组合物，该组合物包括通式ⅰ化合物及它们药学上可接受的盐和/或溶剂化物作为活性成分以及药学上可接受的载体；本发明的化合物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
用于本发明药物组合物的载体是药学领域中可得到的常见类型，包括：口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
通过对jak2和flt3的酶活性测试发现，本发明化合物具有显著的抑制jak2和flt3激酶活性，对jak2或flt3高表达的血液癌细胞有较强的抑制作用。
通过体外抑制人红白血病细胞hel和人髓性单核细胞白血病细胞mv4-11活性试验，我们发现本发明化合物具有显著的抗肿瘤活性，因此本发明化合物可以用于制备治疗或预防各种增生性疾病或恶性血液疾病的药物，如骨髓纤维化、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病等。
治疗增生性疾病或恶性血液疾病所需的本发明化合物的精确量将因受治疗者而异，依赖于受治疗者的种类、年龄与一般条件、所治疗疾病的严重性、所用特定化合物和给药方式，例如给药的途径和频率等等。本领域普通技术人员仅仅利用常规实验方法即可确定适当的有效量。
化合物的给药量可以从约0.1～100mg/kg体重每天，优选1～50mg/kg体重/天。可以理解的是，剂量可以因患者的需求，所治疗的增生性疾病或恶性血液疾病的严重性和所使用的特定化合物而异。而且，可以理解的是，所给药的最初剂量可以增加超出上限，目的是迅速达到所需血液水平，或者最初剂量可以小于最佳值，每日剂量可以在治疗期间逐渐增加，这依赖于具体的情况。如果需要的话，每日剂量也可以分为多剂量给药，例如每天2-4次。
哺乳动物表示人或动物。
活性成分，也就是根据本发明的化合物在药物组合物及其单位剂型中的量可以各不相同，依赖于特定应用、特定化合物的效力和所需浓度。一般而言，活性成分的含量将在0.5％～90％之间，按组合物的总重量计。
在联合疗法中，本发明化合物和其它化合物可以被同时或间隔给药，在同时给药时，本发明化合物和其他化合物可以被结合在单一的药物组合物中或者在分开的组合物中。
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实施例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。
下面的合成路线描述了本发明的通式ⅰ衍生物的制备，所有的原料都是通过这些合成路线中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终化合物都是通过这些合成路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些合成路线中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。
按照本发明的通式ⅰ衍生物，在本合成路线中，以如下化合物为例：r1为氢。取代基r2和r6的定义同权利要求书。
本合成路线中，r2取代的苯胺c与中间体e发生取代反应得到中间体f，中间体f脱去boc保护基得到中间体g，继而与r6取代的氨基甲酸苯酯h发生取代发应制得通式i的化合物。
具体实施方式：
在以下的实施例中，描绘了制备部分所述化合物的方法。应了解，以下方法及所属领域的普通技术人员已知的其他方法均可以适用于本发明所述的所有化合物的制备。实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。化合物的核磁共振氢谱用brukerarx-400或brukerarx-600测定，质谱用agilent1100lc/msd测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。按照实施例1的方法，以中间体g为原料与各种取代的氨基甲酸苯酯h反应制得实施例1-36的化合物(见表1)。
实施例1.n-(4-甲氧基苯基)-4-(2-{[4-(4-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
1.1.4-(4-硝基苯基)吗啉的合成(b)
室温下，将20.0g(142mmol)对氟硝基苯溶于200ml乙腈中，向反应液中加入17.2g(170mmol)三乙胺和18.5g(212mmol)吗啉，加毕，升温至80℃反应3h。反应完毕，将反应液冷却至室温，减压浓缩溶剂，向残余物中加入200ml水，室温搅拌20min，抽滤，100ml水洗滤饼,干燥后得到黄色固体26.9g，收率91％。
1.2.4-(4-吗啉基)苯胺的合成(c)
将26.9g(129mmol)中间体b和1.34g(5％m/m)10％钯碳加入500ml90％乙醇溶液中，通入氢气，室温反应5h。反应完毕，抽滤，100ml90％乙醇洗涤滤饼，减压浓缩滤液得到紫红色固体22.0g，收率96％。
1.3.4-(2-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成(e)
室温下，将20.0g(134mmol)2,4-二氯嘧啶溶于200mln,n-二甲基甲酰胺(dmf)中，加入22.0g(161mmol)碳酸钾，冰浴下分批加入26.0g(140mmol)n-boc-哌嗪，加毕，室温反应2h。反应完毕，向反应液中加入1l水，搅拌，抽滤，100ml水洗滤饼，干燥得到中间体e粗品。柱层析纯化得到白色固体30.0g，收率75％。
1.4.4-{2-[(4-吗啉代苯基)氨基]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(f)
将5.0g(16.8mmol)中间体e与3.6g(20.2mmol)中间体c加入50ml正丁醇中，室温缓慢滴加5.7g(50.4mmol)三氟乙酸，加毕，升温至120℃反应2h。反应完毕，减压浓缩溶剂，向残余物中加入50ml水，用饱和碳酸氢钠溶液调节ph至8，抽滤，滤饼用水(20ml)洗，干燥后得到蓝白色固体6.9g，收率93％。
1.5.n-(4-吗啉代)-4-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-胺(g)
室温下，将6.9g(15.6mmol)中间体g加入70ml二氯甲烷中，缓慢滴加70ml三氟乙酸，滴毕，室温反应4h。反应完毕，减压浓缩溶液，向残余物中加入50ml水，用饱和碳酸氢钠溶液调节ph至8，抽滤，滤饼用水(20ml)洗，干燥后得到灰色固体4.1g，收率77％。
1.6.n-(4-甲氧基苯基)氨基甲酸苯酯的合成(h)
室温下，将1.4g(11.2mmol)4-甲氧基苯胺和0.7g(6.7mmol)碳酸钠加入10ml乙酸乙酯-四氢呋喃-水(3:1:1)混合溶液中，冰浴下，滴加1.9g(12.3mmol)氯甲酸苯酯的乙酸乙酯(3ml)溶液，滴毕，室温反应2h。反应完毕，减压浓缩反应液，向残余物中加入10ml水，用1m盐酸溶液调节ph至5，抽滤，滤饼用水(10ml)洗，干燥后得到白色固体2.5g，收率91％。
1.7.n-(4-甲氧基苯基)-4-(2-{[4-(4-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的合成(i)
室温下，将0.20g(0.6mmol)中间体g和0.17g(0.7mmol)中间体h加入4ml二氧六环中，向反应液中滴加0.30g(2.3mmol)n,n-二异丙基乙胺(dipea)，滴毕，升温至80℃反应3h。反应完毕，冷却至室温，减压浓缩溶剂，向残余物中加入10ml水，2.5％naoh溶液调节ph至10，抽滤，干燥得到粗产品。粗产品经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化后得到白色固体0.15g，收率62％。
实施例2.n-(4-三氟甲氧基)苯基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-三氟甲氧基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-三氟甲氧基)苯基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率65％。
实施例3.n-(4-乙基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-乙基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率57％。
实施例4.n-(4-二乙氨基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-二乙氨基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-二乙氨基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率73％。
实施例5.n-苯基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-苯基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率64％。
实施例6.n-(4-氟苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氟苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氟苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率77％。
实施例7.n-[5-(叔丁基)异恶唑-3-基]-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以5-叔丁基异噁唑-3-胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-[5-(叔丁基)异恶唑-3-基]-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率68％。
实施例8.4-[4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰氨基]苯甲酸甲酯的制备
以4-氨基苯甲酸甲酯为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成4-[4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺基]苯甲酸甲酯。收率64％。
实施例9.n-环丙基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺
以环丙胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-环丙基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率70％。
实施例10.n-环戊基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以环戊胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-环戊基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率57％。
实施例11.n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率62％。
实施例12.n-(4-硝基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-硝基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-硝基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率45％。
实施例13.n-(4-氰基-3-氟苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以3-氟4-氰基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氰基-3-氟苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率71％。
实施例14.n-(4-异丙氧基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-异丙氧基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-异丙氧基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率70％。
实施例15.n-(4-氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氨基苯甲酰胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率52％。
实施例16.n-(4-甲氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氨基-n-甲基苯甲酰胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-甲氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率61％。
实施例17.n-(4-氨基磺酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氨基苯磺酰胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氨基磺酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率47％。
实施例18.n-(4-氰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氰基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率63％。
实施例19.n-(3-氰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以3-氰基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(3-氰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率60％。
实施例20.n-(4-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-三氟甲基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率64％。
实施例21.n-(3-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以3-三氟甲基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(3-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率71％。
实施例22.n-(2-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以2-三氟甲基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(2-三氟甲基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率54％。
实施例23.n-(4-乙酰氨基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氨基乙酰苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰氨基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率53％。ms(esi)m/z:517.3[m+h]+。
实施例24.n-(4-甲基磺酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-甲磺酰基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-甲基磺酰基苯基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率68％。
实施例25.n-(4-氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以n-甲基哌嗪为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯甲酰胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氨基甲酰基苯基)-4-(2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率56％。
实施例26.n-(4-乙酰苯基)-4-[2-({4-[2-(吡咯烷-1-基)乙氧基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酰胺的制备
以n-(2-羟乙基)-吡咯烷为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-[2-({4-[2-(吡咯烷-1-基)乙氧基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酰胺。收率42％。
实施例27.n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-甲基哌啶为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率51％。
实施例28.n-(4-乙酰苯基)-4-[2-({4-[3-(吡咯烷-1-基)丙氧基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酰胺的制备
以3-(1-吡咯烷基)-1-丙醇为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-[2-({4-[3-(吡咯烷-1-基)丙氧基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酰胺。收率47％。
实施例29.n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(2-吗啉氧基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以2-吗啉乙醇为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(2-吗啉氧基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率52％。
实施例30.n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(3-吗啉丙氧基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以3-(4-吗啉)-1-丙醇为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(3-吗啉丙氧基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率41％。
实施例31.n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(1-硫代吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以硫代吗啉为原料，按照实施例1中的1.1～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-(2-{[4-(1-硫代吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率67％。
实施例32.n-(4-乙酰苯基)-4-(5-甲基-2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以5-甲基-2,4-二氯嘧啶为原料，按照实施例1中的1.3～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氨基苯乙酮为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-乙酰苯基)-4-(5-甲基-2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率70％。
实施例33.n-(4-氰基苯基)-4-(5-甲基-2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以5-甲基-2,4-二氯嘧啶为原料，按照实施例1中的1.3～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氰基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氰基苯基)-4-(5-甲基-2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率66％。
实施例34.n-(4-氰基苯基)-4-(6-甲基-2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以6-甲基-2,4-二氯嘧啶为原料，按照实施例1中的1.3～1.5的合成方法合成关键中间体g；以4-氰基苯胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氰基苯基)-4-(6-甲基-2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率51％。
实施例35.n-苄基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以苄胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-苄基-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率58％。
实施例36.n-(4-氟苄基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
以4-氟苄胺为原料，按照实施例1中的1.6的合成方法合成关键中间体h，再按照实施例1中的1.7的合成方法合成n-(4-氟苄基)-4-(2-{[4-(1-吗啉基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺。收率48％。
表1实施例化合物的结构及1h-nmr、ms数据见下表。
对本发明的化合物进行了体外酶活性与细胞抗增殖活性的研究，结果如下
对按照本发明的上式ⅰ的2-氨基嘧啶骨架的化合物(浓度0.1μm)用mobilityshiftassay进行了体外jak2和flt3激酶活性测试。
激酶缓冲液由50mm的hepes(ph7.5)，0.0015％的brij-35组成。停止缓冲液含有100mmhepes(ph7.5)、0.015％brij-35、0.2％涂层试剂#3和50mmedta的混合物。将待测化合物用100％dmso稀释至反应中所需最高浓度的50倍。将被测化合物稀释液(100μl)转移到96孔板的孔中。然后，通过向两个孔中添加100mldmso作为对照组，标记为源板。将10μl化合物从源板转移到新的96孔板上制备中间板。在中间板中，每孔额外添加90μl激酶缓冲液。将中间板摇动10分钟，然后将96孔中间板上的每孔的5μl作为分析板复制到384孔板上。向384孔板中的每孔加入制备好的酶溶液，然后在室温下培养10分钟，然后添加10μl制备的肽溶液(fam标记的肽和激酶基缓冲液中的atp)。将样品在28℃孵育1h，然后加入25μl的缓冲液。从caliper程序中复制转换数据，并将其转换为抑制率。
抑制率(％)＝(max-conversion)/(max-min)×100。
部分化合物的jak2和flt3的体外激酶试验结果见表2。
表2
对按照本发明的上式i的2-氨基嘧啶骨架的化合物进行了体外抑制人红白血病细胞hel和人髓性单核细胞白血病细胞mv4-11活性的试验。
细胞复苏并传代2-3次稳定后，吸取10μl细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为10×104个/ml。96孔板中最外围不加细胞液，其余皆加入100μl细胞混悬液，b2-b7孔加入100μl培养基作为对照组，其它孔加入不同浓度的待测试化合物。在培养箱中孵育72h后，向最a1孔加入200μl新鲜培养基作为空白组，然后每孔中加入10μlcck-8溶液，继续孵育4h。96孔板在室温下震荡3min，然后用酶标仪测定在450nm波长下的吸光度，根据以下公式计算细胞生长的抑制率：
抑制率(％)＝[(a对照-a加药)/(a对照-a空白)]×100
ic50为抑制一半细胞生长时所需要的药物浓度，根据药物浓度和抑制率结果，采用graphpadprism5软件通过量效曲线计算出ic50。
部分化合物的人红白血病细胞hel和人髓性单核细胞白血病细胞mv4-11的试验结果见表3。
表3
初步的体外激酶和细胞活性测试结果表明，本发明所要保护的通式i的化合物，具有良好的jak2和flt3的抑制活性，部分化合物相当或优于阳性对照药momelotinib和tandutinib。