本发明涉及eso多因提取技术领域，具体为一种eso多因的制备方法。
背景技术：
eso多因，又称干细胞外泌体，是在含有大量生长因子及丰富活性物质的干细胞培养液中提取出来的活性物质，其中主要包括了vegf、寡肽-2、寡肽-9、寡肽-5、等多种蛋白质，此外还含有氨基酸等人体所需活性物。它能提高皮肤细胞活力、促进胶原蛋白再生、重建皮肤防御体系等功效，具有优异的抗衰修复作用。
目前eso多因的制备工序繁琐，制备的产物中的杂质较多，纯度低。
技术实现要素：
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种eso多因的制备方法，解决了目前eso多因的制备工序繁琐，制备的产物中的杂质较多，纯度低的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种eso多因的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、从低温储存容器中取出脐带间充质干细胞，并迅速将其至于36.5℃的水槽中晃动，让脐带间充质干细胞迅速解冻；
步骤二、取无菌的10ml培养皿，并在培养皿中配置专属拥有fda的mdf号无血清培养基，并将解冻后的脐带间充质干细胞转移至细胞培养皿中培养3天，并保持培养皿温度在36.5℃；
步骤三、通过接种针将培养皿内的细胞菌落均匀划分成六块，再将接种针至于酒精灯外焰灼烧，直至接种针的针头灼烧10-15s，迅速将接种针插入一块细胞菌落，并迅速取出，每块菌落同上操作三次，直至划分的每块菌落预灼伤完毕；
步骤四、将灼伤完成后的脐带间充质干细胞培养皿，保持温度在36.5℃继续培养30h，执行第二次灼烧感染培养；
步骤五、将第二次培养后的脐带间充质干细胞转移至离心分离器皿中，并使用
步骤六、离心分离器皿中处理后的脐带间充质干细胞及其培养液加入离心机中，依次以300g，2000g，10000g的转速离心处理，最终离心分离器皿的上清液即为eso多因；
步骤七、检测离心得到eso多因中杂质的含量。
优选的，所述步骤一中从低温储存容器每次取出脐带间充质干细胞的量为3-4ml。
优选的，所述步骤一中带间充质干细胞迅速解冻的时间为0.9min-1.2min。
优选的，所述步骤二中脐带间充质干细胞培养期间，每隔1天向培养皿中添加1mlfda的mdf号无血清。
优选的，所述步骤三中接种针在培养皿中均匀画线，并分割成六个区域，人眼能够识别六块区域即可，每块细胞菌落可连接在一起，也可分离开，其中灼烧后针头的温度在260℃-280℃。
优选的，所述步骤六中脐带间充质干细胞离心前现将其快速降温至4℃，并在4℃的环境下离心。
优选的，所述步骤六中300g的转速离心时间为15-20min，去除底部细胞取上清液，待下次离心使用。
优选的，所述步骤六中2000g的转速离心时间为18-25min，去除底部细胞碎片取上清液，待下次离心使用。
优选的，所述步骤六中10000g的转速离心时间为25-30min，去除底部杂质取上清液，得到eso多因。
优选的，所述脐带间充质干细胞采用mir-525-3p高表达的脐带间充质干细胞。
(三)有益效果
本发明提供了一种eso多因的制备方法。具备以下有益效果：
该eso多因的制备方法，通过从低温储存容器中取出脐带间充质干细胞，并迅速将其至于36.5℃的水槽中晃动，让脐带间充质干细胞迅速解冻；在培养皿中配置专属拥有fda的mdf号无血清培养基，并将解冻后的脐带间充质干细胞转移至细胞培养皿中培养3天，并保持培养皿温度在36.5℃；通过接种针将培养皿内的细胞菌落均匀划分成六块，再将接种针至于酒精灯外焰灼烧，直至接种针的针头灼烧10-15s，迅速将接种针插入一块细胞菌落，并迅速取出，每块菌落同上操作三次，直至划分的每块菌落预灼伤完毕；再保持温度在36.5℃继续培养30h，执行第二次灼烧感染培养；将第二次培养后的脐带间充质干细胞转移至离心分离器皿中，并使用
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例
一种eso多因的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、从低温储存容器中取出脐带间充质干细胞，并迅速将其至于36.5℃的水槽中晃动，让脐带间充质干细胞迅速解冻；
步骤二、取无菌的10ml培养皿，并在培养皿中配置专属拥有fda的mdf号无血清培养基，并将解冻后的脐带间充质干细胞转移至细胞培养皿中培养3天，并保持培养皿温度在36.5℃；
步骤三、通过接种针将培养皿内的细胞菌落均匀划分成六块，再将接种针至于酒精灯外焰灼烧，直至接种针的针头灼烧10-15s，迅速将接种针插入一块细胞菌落，并迅速取出，每块菌落同上操作三次，直至划分的每块菌落预灼伤完毕；
步骤四、将灼伤完成后的脐带间充质干细胞培养皿，保持温度在36.5℃继续培养30h，执行第二次灼烧感染培养；
步骤五、将第二次培养后的脐带间充质干细胞转移至离心分离器皿中，并使用
步骤六、离心分离器皿中处理后的脐带间充质干细胞及其培养液加入离心机中，依次以300g，2000g，10000g的转速离心处理，最终离心分离器皿的上清液即为eso多因；
步骤七、检测离心得到eso多因中杂质的含量。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下。由语句“包括一个......限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素”。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。