在原核细胞中增殖功能性马铃薯Y病毒的方法与流程

文档序号:21198429发布日期:2020-06-23 19:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经修饰马铃薯y病毒cdna,其特征在于,在马铃薯y病毒cdna内一或多个类原核启动子区中含有一或多个内含子;

该内含子用于降低或消除类原核启动子区的启动子活性,所述经修饰马铃薯y病毒cdna编码的氨基酸序列与马铃薯y病毒编码cdna的氨基酸序列相同。

2.根据权利要求1所述的经修饰马铃薯y病毒cdna,其特征在于,所述马铃薯y病毒为pvyntn-nw株系,优选为jl-w1;

优选地,所述类原核启动子区的序列如seqidno.1所示。

3.根据权利要求1所述的经修饰马铃薯y病毒cdna,其特征在于,内含子为马铃薯内含子,优选为序列如seqidno.2的内含子。

4.根据权利要求1-3任一项所述的经修饰马铃薯y病毒cdna,其特征在于,内含子插入位点的两端的任意端均至少有一个碱基与内含子在马铃薯基因组的位点相同;

优选地,含有内含子的类原核启动子区序列如seqidno.3所示。

5.权利要求1所述的经修饰马铃薯y病毒cdna的互补核苷酸序列。

6.权利要求1所述的经修饰马铃薯y病毒cdna的rna转录物。

7.一种载体,其特征在于,含有权利要求1-4任一项所述的经修饰马铃薯y病毒cdna或权利要求5所述的互补核苷酸序列。

8.一种原核细胞,其特征在于,含有权利要求7所述的载体;

优选地,原核细胞包括大肠杆菌。

9.一种在原核细胞中增殖功能性马铃薯y病毒的方法,其特征在于,将权利要求1-4任一项所述的经修饰马铃薯y病毒cdna引入原核细胞,通过在原核细胞内复制经修饰马铃薯y病毒cdna来增殖功能性马铃薯y病毒。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述原核细胞包括大肠杆菌。


技术总结
本发明涉及生物技术领域,具体而言,提供了一种在原核细胞中增殖功能性马铃薯Y病毒的方法。本发明通过在马铃薯Y病毒cDNA的类原核启动子区插入内含子,用于降低或消除类原核启动子区的启动子活性,经修饰马铃薯Y病毒cDNA编码的氨基酸序列与马铃薯Y病毒编码cDNA的氨基酸序列相同。该方案改善了现有技术中马铃薯Y病毒cDNA对原核细胞的固有毒性,避免马铃薯Y病毒对原核细胞生长产生影响,提高马铃薯Y病毒cDNA的产率,同时不改变马铃薯Y病毒RNA转录物的感染性。

技术研发人员:王永志;苏颖;李小宇;张春雨;马俊丰
受保护的技术使用者:吉林省农业科学院
技术研发日:2020.03.24
技术公布日:2020.06.23
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