本发明属药物技术领域，涉及一类新型苯基-1h-吡唑类衍生物，以及所述化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，它们的制备方法及其作为pd-1/pd-l1抑制剂中的应用。
背景技术：
恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的全球性问题。2010年who宣称，到2030年全球大约1320万人将死于癌症，是2008年的2倍。中国的癌症形势十分严峻，每年全球因癌症死亡的总数达九百多万人，其中有24％左右发生在中国，并且中国肿瘤患者的生存患者和治愈患者13％左右。自上世纪70年代以来，我国癌症死亡率一呈持续增长趋势，70年代、90年代和21世纪初每年死于肿瘤的人数分别约为70万、117万和150万，肿瘤已经成为严重威胁我国人民健康的头号杀手。
肿瘤免疫治疗通过激活机体自身的的免疫系统，识别并杀伤肿瘤细胞，具有治疗多种类型肿瘤的潜力。通过阻断t细胞免疫检查点分子pd-1/pd-l1进行肿瘤治疗是临床上最为成熟的免疫检查点策略。以pd-1免疫检查点为靶点的药物研发过去二十年里已经在世界范围内取得了广泛而深入的研究。目前针对pd-1免疫检查点的上市单抗药物有五种。它们分别为：巴文西亚(avelumab)、durvalumab，派姆单抗(pembrolizumab)，纳武单抗(nivolumab)，阿特珠单抗(atezolizumab)。在临床中，小分子抑制剂相对于抗体具有一些优势，如免疫原性副作用小，用药效果好，可靶向胞内、胞外及膜上抗原，成本低等。因此，开发更安全、更有效的靶向免疫检查点的小分子抑制剂是一种有吸引力的治疗方法。然而，中国目前尚未有针对此靶点的小分子药物上市。
综上所述，开发更安全、更有效的靶向免疫检查点的小分子抑制剂是一种有吸引力的治疗方法。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足，提供了一种苯基-1h-吡唑类衍生物，以及所述化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，以及其制备方法和在抗肿瘤药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明提供如通式(i)所示的苯基-1h-吡唑类衍生物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药；
所述r1选自1-3个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基、(c2-c6)炔基、(c1-c6)烷氧基。
所述r2选自1-3个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(c1-c6)烷氧基。
优选的，所述r1选自1-3个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(c1-c6)烷氧基。
优选的，所述r2选自1-3个选自羟基、卤素、硝基、氨基。
本发明通式i化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药优选以下化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
本发明所述的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物在制备pd-1/pd-l1抑制剂中的应用。
本发明所述的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的药用组合物可配制成若干种剂型，其中含有药物领域中一些常用的赋形剂。如上所述的若干种剂型可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、滴丸剂。
本发明可以含有通式i的衍生物可以通过包括化学领域众所周知的方法来合成，尤其按照本发明公开的路线的方法，具体为：相应的起始原料盐酸苯肼与乙酰丙酮酸乙酯关环得到中间体2；中间体2经还原和氯代反应得到中间体3；再与4-羟基苯甲醛在碱性条件下发生取代反应得到中间体4；最后，与2-氰基吡咯烷通过还原氨化反应，得到目标产物。
合成路线如下：
合成路线中试剂和条件:(a)etoh,reflux；(b)(i)nabh4,thf,rt,(ii)socl2,dmf,rt；(c)k2co3,dmf,40℃；(d)nabh(oac)3,clch2ch2cl,rt.
本发明的积极进步效果在于：本发明发明人在借助计算机辅助药物设计手段，设计并合成了一系列新的苯基-1h-吡唑类衍生物。此类化合物具有很好的活性，且骨架新颖，在pd-1/pd-l1抑制剂开发中具有较大的研究价值。
具体实施方式
下面提供的实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。原料一般可以从商业来源获取的或者使用本领域技术人员所熟知的方法来制备，或根据本发明所述的方法制备。未经特殊说明，所用试剂均为分析纯或化学纯。
实施例1。
(1)5-甲基-1-苯基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯的合成
将盐酸苯肼2.0g(13.83mmol)和乙酰丙酮酸乙酯1.47g(9.22mmol)溶于乙醇中，升温至回流反应6h。tlc检测反应完成，减压浓缩蒸除溶剂。然后加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机层，na2so4干燥过夜。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得1.62g白色固体，收率75.3％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.59～7.54(m,5h),6.73(s,1h),4.32(q,j＝7.1hz,2h),2.35(s,3h),1.31(t,j＝7.1hz,3h).
(2)3-氯甲基-5-甲基-1-苯基-1h-吡唑的合成
将中间体5-甲基-1-苯基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(1.5g,6.51mmol)溶于四氢呋喃中，加入硼氢化钠(0.74g,19.54mmol)，室温下搅拌2h后，反应液缓慢倾入水中(40ml)中。乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机相，水(20ml×3)洗涤有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩。冰浴下，残余物溶于n,n-二甲基甲酰胺，加入二氯亚砜(1.9ml,26.1mmol)，升至室温反应1h后，反应液缓慢倾入水中(40ml)中。乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得无色油状物1.10g，收率81.7％。
(3)3-氟-4-[(5-甲基-1-苯基--1h-吡唑-3-基)甲氧基]-苯甲醛
将3-氯甲基-5-甲基-1-苯基-1h-吡唑1.5g(7.26mmol)、3-氟-4-羟基苯甲醛1.0g(7.26mmol)和无水碳酸钾2.0g(14.52mmol)溶于dmf中，升温至60℃反应4h，tlc检测反应完成，反应液缓慢倾入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得白色固体1.68g，收率74.59％。
(4)将3-氟-4-[(5-甲基-1-苯基--1h-吡唑-3-基)甲氧基]-苯甲醛1.0g(3.22mmol)和2-氰基吡咯烷0.31g(3.22mmol)溶于30ml二氯乙烷中，然后加入醋酸硼氢化钠2.1g(9.67mmol)，室温下继续搅拌24h，tlc检测反应完成，然后加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得白色固体0.62g，收率49.28％。
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ7.58–7.55(m,4h),7.52–7.48(m,1h),7.01–6.84(m,3h),6.71(d,j＝0.6hz,1h),5.20(s,2h),3.62(s,2h),3.35(t,j＝7.0hz,1h),2.45–2.35(m,2h),2.33(s,3h),1.64–1.93(m,4h).
按照实施例1的方法，分别使用苯肼盐酸盐和乙酰丙酮酸乙酯为原料，经关环、还原、氯代、烷基化和还原氨化五步反应制备得到实施例2-5。
实施例2。
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ7.58(d,j＝7.5hz,2h),7.36(d,j＝7.4hz,2h),7.01–6.84(m,3h),6.64(s,1h),5.21(s,2h),3.61(s,2h),3.32(t,j＝7.1hz,1h),2.44–2.34(m,2h),2.32(s,3h),1.96–1.63(m,4h).
实施例3。
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ7.52(d,j＝7.4hz,2h),7.26(d,j＝7.4hz,2h),6.97–6.84(m,3h),6.66(s,1h),5.22(s,2h),3.62(s,2h),3.36(t,j＝7.1hz,1h),2.48(s,3h),2.45–2.34(m,2h),2.32(s,3h),1.98–1.61(m,4h).
实施例4。
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ7.61(d,j＝7.4hz,2h),7.20(d,j＝7.4hz,2h),7.02–6.86(m,3h),6.67(s,1h),5.19(s,2h),3.60(s,2h),3.38(t,j＝7.1hz,1h),2.42–2.36(m,2h),2.31(s,3h),1.99–1.54(m,4h).
实施例5。
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ7.60(d,j＝7.4hz,2h),7.46(d,j＝1.5hz,1h),7.20(d,j＝7.4hz,2h),7.02–6.96(m,2h),6.68(s,1h),5.21(s,2h),3.61(s,2h),3.35(t,j＝7.0hz,1h),2.44–2.38(m,2h),2.26(s,3h),1.97–1.55(m,4h).
本发明部分产物的药理研究。
htrf均相时间分辨荧光技术：利用cisbio公司开发的htrfpd-1/pd-l1bindingassaykit试剂盒，按照说明书操作，对本发明所述的一种苯基-1h-吡唑类衍生物测试对pd-1/pd-l1的抑制效果。
实验过程：向96孔板中每孔加入2μl的化合物稀释液和4μl(2.5x)pd-1混合液再向每孔加入4μl(2.5x)pd-l1混合液。室温孵育15min后向每孔加入10μl(2x)测试混合液,室温孵育120min,使用tecan酶标仪读取荧光值(ex:320nm；em:620和665nm).然后计算抑制率及拟合ic50。
表1.实施例化合物对pd-1/pd-l1的抑制活性。
采用htrf(均相时间分辨荧光)技术标准操作程序测定本发明所述的一种苯基-1h-吡唑类衍生物对pd-1/pd-l1的抑制效果，结果显示该化合物对pd-1/pd-l1具有明显的抑制作用。
本发明中通式i的化合物可单独施用，但通常是和药用载体混合物给予，所述药用载体的选择要根据所需用药途径和标准药物实践，下面分别用该类化合物的各种药物剂型，例如片剂、胶囊剂、注射剂、滴丸剂的制备方法，说明其在制药领域中的新应用。
实施例6：片剂。
用含有权利要求1中化合物的化合物(以实施例1化合物为例)10g，按照药剂学一般压片法加辅料20g混匀后，压制成100片，每片重300mg。
实施例7：胶囊剂。
用含有权利要求1中化合物的化合物(以实施例1化合物为例)10g，按照药剂学胶囊剂的要求将辅料20g混匀后，装入空心胶囊，每个胶囊重300mg。
实施例8：注射剂。
用含有权利要求1中化合物的化合物(以实施例1化合物为例)10g，按照药剂学常规方法，进行活性炭吸附，经0.65μm微孔滤膜过滤后，填入氮气罐制成水针制剂，每只装2ml，共灌装100瓶。
实施例9：滴丸剂。
用含有权利要求1中化合物的化合物(以实施例1化合物为例)10g，与明胶等基质50g加热熔化混匀后，滴入低温液体石蜡中，共制得滴丸1000丸。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围。