本发明属于生防菌保存技术领域，具体涉及一种使用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的办法。
背景技术：
植物病害的防治一直是农业生产工作中的重中之重。在农业生中，在同一地中，随着作物种植时间的增长，引起作物根结线虫病，近年来，由于植物根结线虫引发的枯萎病、根腐病等多种植物病害造成作物的大量减产，一般能造成减产10%-30%，严重的减产50%-70%以上，甚至绝收，据不完全统计，中国每年因根结线虫病危害的造成损失在700亿元以上。
淡紫拟青霉是土壤多种植物根系的习居菌，是植物寄生线虫的重要天敌，目前已知淡紫拟青霉对于防治植物根结线虫具有良好效果，同时对于多种土传尖孢镰刀菌引起的枯萎病等病害也具有防治作用。淡紫拟青霉因其具有高效、广谱、长效、安全、无污染、无残留等特点，不会对环境造成伤害；另外淡紫拟青霉在生长过程中还会分泌植物类激素，对植物的生长具有显著的促进调控作用，因而被广泛应用于开发成为高效稳定安全的生物杀虫剂。
淡紫拟青霉对于植物病菌的防控作用主要是通过孢子作用而实现的。淡紫拟青霉通常是以孢子的形态存在，在合适温度、适度、营养条件中孢子萌发形成菌丝入侵寄主来实现抗病作用，淡紫拟青霉菌丝包围整个卵，菌丝末端变粗，由于外源性代谢物和真菌几丁质酶的活动使卵壳表层破裂，随后真菌侵入并取而代之。因此淡紫拟青霉的孢子成活率决定产品的使用效果。但由于淡紫拟青霉孢子的抗逆性较差，容易死亡，严重影响淡紫拟青霉菌剂的使用效果。
目前淡紫拟青霉孢子普遍的保存方法以下几种：1、冻干保存，成本高；2、海藻酸钙包埋，成本高，不易于使用；3、孢子直接干燥或吸附到河沙等载体中干燥低温保存，不易于运输及使用；4、活性炭混合常温保存，淡紫拟青霉孢子直接暴露在不确定因素的土壤环境中，容易造成孢子的成活率不高，亟需一种延长淡紫拟青霉保质期的办法。
技术实现要素：
为解决淡紫拟青霉的保存存在保质期短、孢子存活率不高、保存成本高、不便于运输和大面积推广使用等问题，本发明目的提供一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法。
本发明所述一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下原料：淡紫拟青霉；水溶性高分子材料、紫外线保护剂、交联剂、沸石、水；所述紫外线保剂为核黄素、荧光素、抗坏血酸中的一种或多。
优选的，所述一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，具体包括以下步骤：
步骤一：水溶性高分子材料与水按质量比1:1～50混合，加热搅拌15～30分钟，冷却至室温，得胶体溶液；
步骤二：所述胶体溶液与交联剂按质量比5～15：1-5搅拌均匀，得到包埋液；
步骤三：淡紫拟青霉发酵液、紫外线保护剂按质量比1～5:0.1～1搅拌均匀混合后，以30-60滴/分钟均匀滴入包埋液体中，边滴边搅拌，反应5-12h得到包埋颗粒；
步骤四：取沸石与所述包埋颗粒混合均匀，静置10-20小时，得到外层包埋颗粒，置于通风、阴凉环境中暴露4-10d阴干。
优选的，所述一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，其特征在于，所述淡紫拟青霉菌体浓度为2.0-50.0亿/ml。
优选的，所述的一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，其特征在于，所述水溶性高分子材料为改性淀粉、壳聚糖、海藻酸钠琼脂中的任意一种或多种，所述交联剂为聚丙烯酰胺、钙盐中的任意一种。
优选的，所述的一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，其特征在于，所属钙盐为碳酸钙、氯化钙、硫酸钙中的任意一种，添加葡萄糖酸内酯形成缓释钙源。
本发明至少包括以下有益效果：本发明提供一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，内层结构中含有紫外线保护剂核黄素、荧光素、抗坏血酸中的一种或多种，增强对淡紫拟青霉孢子的保护作用，延长其保质期；另外内层结构包裹淡紫拟青霉孢子既可以为其提供营养物质，又避免其直接暴露在土壤中影响其成活率；外层结构增加机械强度，能够更有效的保护微生物，便于运输和大面积推广使用。
具体实施方式
实施例1
一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下原料：淡紫拟青霉；水溶性高分子材料、紫外线保护剂、交联剂、沸石、水；所述紫外线保剂为核黄素、所述水溶性高分子材料为改性淀粉，所述交联剂为钙盐，主要是碳酸钙和葡萄糖酸内酯混合物。
优选的，所述一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下步骤：
步骤一：改性淀粉与水按质量比1:10混合，加热搅拌15分钟，冷却至室温，得胶体溶液；
步骤二：所述胶体溶液与钙盐按质量比5：1搅拌均匀，得到包埋液；
步骤三：取菌体浓度为2.0亿/ml淡紫拟青霉发酵液、紫外线保护剂核黄素按质量比1:0.3搅拌均匀混合后，以60滴/分钟均匀滴入包埋液体中，边滴边搅拌，反应5h得到包埋颗粒；
步骤四：取沸石与所述包埋颗粒混合均匀，静置10小时，得到外层包埋颗粒，置于通风、阴凉环境中暴露4d阴干。
实施例2
一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下原料：淡紫拟青霉；水溶性高分子材料、紫外线保护剂、交联剂、沸石、水；所述紫外线保剂为抗坏血酸、所述水溶性高分子材料为海藻酸钠，所述交联剂为钙盐，主要是氯化钙和葡萄糖酸内酯混合物。
优选的，所述一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下步骤：
步骤一：海藻酸钠与水按质量比1:5混合，加热搅拌20分钟，冷却至室温，得胶体溶液；
步骤二：所述胶体溶液与交联剂按质量比10：3搅拌均匀，得到包埋液；
步骤三：菌体浓度为10.0亿/ml的淡紫拟青霉发酵液、紫外线保护剂按质量比5:1搅拌均匀混合后，以45滴/分钟均匀滴入包埋液体中，边滴边搅拌，反应12h得到包埋颗粒；
步骤四：取沸石与所述包埋颗粒混合均匀，静置20小时，得到外层包埋颗粒，置于通风、阴凉环境中暴露5d阴干。
实施例3
一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下原料：淡紫拟青霉；水溶性高分子材料、紫外线保护剂、交联剂、沸石、水；所述紫外线保剂为抗坏血酸和核黄素混合物、所述水溶性高分子材料为海藻酸钠和改性淀粉混合物，所述交联剂为钙盐，主要是硫酸钙。
优选的，所述一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉保质期的方法，包括以下步骤：
步骤一：水溶性高分子材料与水按质量比1:50混合，加热搅拌30分钟，冷却至室温，得胶体溶液；
步骤二：所述胶体溶液与交联剂按质量比15：3搅拌均匀，得到包埋液；
步骤三：菌体浓度为50.0亿/ml淡紫拟青霉发酵液、紫外线保护剂按质量比3:0.3搅拌均匀混合后，以30滴/分钟均匀滴入包埋液体中，边滴边搅拌，反应10h得到包埋颗粒；
步骤四：取沸石与所述包埋颗粒混合均匀，静置15小时，得到外层包埋颗粒，置于通风、阴凉环境中暴露10d阴干。
实施例4
取步骤1-3制备得到的淡紫拟青霉包埋颗粒按照在0-30℃条件下保存，测定其萌发率。结果如下表。
表1：步骤1制备颗粒在0-30℃条件下保存12个月孢子萌发率。
结果表明，本发明一种利用双层包埋技术延长淡紫拟青霉的保质期的方法，在不同的温度下保存，孢子萌发率大于85%。
尽管本发明实施方案已公布如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列应用，他完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同领域所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。