1.本发明涉及特殊医学用途配方食品技术领域，尤其涉及一种桦树茸多糖提取物的制备及应用。
背景技术：
[0002][0003]
桦树茸中含有丰富的桦树茸醇、多糖、三萜、黄酮、甾醇、多酚及黑色素等多种有效成分，其中，桦树茸中的三萜类和多糖类化合物对免疫调节方面有明显作用；多酚类和黄酮类化合物有很好的抗氧化作用；桦树茸提取物在降血糖方面有显著作用，对糖尿病有降糖疗效；在抗肿瘤，消炎，增强免疫方面有明显药理作用；在抗细菌及真菌方面也有重要应用。桦树茸多糖应用于特殊医学用途配方食品，具有巨大的市场。
[0004]
桦树茸素有“特殊的天然物质”、“万能药用真菌”之称，中世纪时东欧地区民间即将其制成茶剂，用于防治消化道癌症、糖尿病等疾病，因此桦树茸水提物的生物活性一直是研究热点，尤其是桦树茸多糖调节免疫、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂等方面更是研究焦点。随着对桦树茸生物活性的认知越来越深入，俄罗斯、美国、日本等国家对桦树茸的深加工食品、药品进行了开发，辅助抗癌药、口服液、精粉、代用茶、饼干等产品早已上市销售。虽然我国在桦树茸产品开发方面起步较晚，但是近年来开发热度很高，已有代用茶、多糖粉、压片糖果等产品进行销售。产品的开发需要来源稳定、充足的原材料，所以发酵工程被应用于桦树茸多糖的制备，突破了野生桦树茸资源有限的瓶颈。对桦树茸的综述文献近年来也有多篇，但是内容以桦树茸化学成分的提取分离、发酵条件优化、生物活性等前期基础研究为主，通过市场调研，桦树茸工业方法制备出的多糖含量最高为30%-40%，无法满足市场需求。
[0005]
本发明提供一种桦树茸提取物的制备方法，包括如下步骤：将桦树茸粉碎过筛后，正丁醇提取，提取液浓缩干燥，固体用氯化钠水溶液洗涤，收集固体并干燥，再用层析柱纯化，得到桦树茸多糖提取物，此制备方法工艺简单、技术成熟，具有较高的提取效率，此方法制备的桦树茸提多糖取物中的多糖具有较高的提取率，多糖纯度高，适用于工业化生产。
[0006]
恶性黑素瘤（malignant melanoma，mm），简称恶黑，为一种高度恶性的皮肤肿瘤，拥有很高的死亡率，已经变成人类不可忽视的恶性疾病。据目前研究发现，黑色素瘤的发病率增长非常之快，年增长率3%～5%。经过大量临床研究表明黑色素瘤对化学治疗有较强的耐受性，在转移性黑色素瘤的治疗中化疗药物的效果也不容乐观，单药达卡巴嗪的治疗有效率仅仅只有10%～25%，中位生存期也只有8 个月。通过小鼠实验发现，桦树茸多糖对其具有良好的抑制作用，此结果为黑色素瘤的治疗提供了新的治疗方法，给病患带来曙光。
技术实现要素：
[0007]
本发明公开了一种桦树茸多糖提取物的制备及应用，涉及特殊医学用途配方食品技术领域，其技术方案要点是一种桦树茸提取物的制备方法，包括如下步骤：将桦树茸粉的
制备，正丁醇提取，提取液浓缩干燥，固体用氯化钠水溶液洗涤，收集滤液浓缩并干燥，再用层析柱纯化，得到桦树茸多糖提取物，此制备方法工艺简单、技术成熟，具有较高的提取效率，此方法制备的桦树茸提多糖取物中的多糖具有较高的纯度，适用于工业化生产。
[0008]
优选的，所述的桦树茸粉的制备过程是置于具有制冷夹套的破碎机中，夹套温度设置夹套温度设置-5℃，破碎机转速36000r/min，时间5min，将粉末过300目筛。
[0009]
优选的，所述的正丁醇提取过程，加入正丁醇量为桦树茸粉重量的10倍，加入的水量为桦树茸粉重量的5倍，在25-30℃下搅拌2小时，分层，得到正丁醇提取液，此过程重复3次，合并所有的正丁醇提取液，得到正丁醇提取液a。
[0010]
优选的，所述的浓缩干燥过程，浓缩干燥条件为负压为0.1 mpa，温度为40-50℃。
[0011]
优选的，所述的氯化钠水溶液洗涤过程，采用27%（m/m）氯化钠水溶液为洗涤，过滤，收集滤液，浓缩干燥后得到桦树茸多糖提取物。
[0012]
优选的，所述的层析柱纯化过程桦树茸多糖提取物b 15倍重量的200-300目硅胶粉置于硅胶柱中，加入桦树茸多糖提取物b固体，先用体积比甲醇：乙酸乙酯1:4洗脱液冲洗，再用体积比甲醇：水1:8冲洗，收集甲醇水溶液，浓缩干燥，得到桦树茸多糖。
具体实施方式
[0013]
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此：实施例1（1）桦树茸粉的制备将500g桦树茸洗净晾干，置于具有制冷夹套的破碎机中，夹套温度设置0℃，破碎机转速36000r/min，时间5min，将粉末过300目筛，得到桦树茸粉。
[0014]
（2）正丁醇提取向桦树茸粉中加入其重量8倍的正丁醇和4倍的水溶液，在25-30℃下搅拌1小时，分层，得到正丁醇提取液，此过程重复3次，合并所有的正丁醇提取液，得到正丁醇提取液a；（3）浓缩干燥将正丁醇提取液浓缩，干燥，条件为负压为0.1 mpa，温度为40-50℃，得到桦树茸多糖提取物a。
[0015]
（4）氯化钠水溶液洗涤氯化钠水溶液洗涤：将桦树茸多糖提取物a用23%（m/m）氯化钠水溶液洗涤，过滤，收集滤液，浓缩干燥后得到桦树茸多糖提取物b；（5）层析柱纯化取桦树茸多糖提取物b 15倍重量的200-300目硅胶粉置于硅胶柱中，加入桦树茸多糖提取物b固体，先用体积比甲醇：乙酸乙酯1:2洗脱液冲洗，再用体积比甲醇：水 1:5冲洗，收集甲醇水溶液，浓缩干燥，得到桦树茸多糖395g。
[0016]
实施例2（1）桦树茸粉的制备将500g桦树茸洗净晾干，置于具有制冷夹套的破碎机中，夹套温度设置-5℃，破碎机转速36000r/min，时间5min，将粉末过300目筛，得到桦树茸粉。
[0017]
（2）正丁醇提取
向桦树茸粉中加入其重量10倍的正丁醇和5倍的水溶液，在25-30℃下搅拌2小时，分层，得到正丁醇提取液，此过程重复3次，合并所有的正丁醇提取液，得到正丁醇提取液a；（3）浓缩干燥将正丁醇提取液浓缩，干燥，条件为负压为0.1 mpa，温度为40-50℃，得到桦树茸多糖提取物a。
[0018]
（4）氯化钠水溶液洗涤氯化钠水溶液洗涤：将桦树茸多糖提取物a用27%（m/m）氯化钠水溶液洗涤，过滤，收集滤液，浓缩干燥后得到桦树茸多糖提取物b；（5）层析柱纯化取桦树茸多糖提取物b 15倍重量的200-300目硅胶粉置于硅胶柱中，加入桦树茸多糖提取物b固体，先用体积比甲醇：乙酸乙酯1:4洗脱液冲洗，再用体积比甲醇：水1:8冲洗，收集甲醇水溶液，浓缩干燥，得到桦树茸多糖417g。
[0019]
实施例3（1）桦树茸粉的制备将500g桦树茸洗净晾干，置于具有制冷夹套的破碎机中，夹套温度设置-2℃，破碎机转速36000r/min，时间5min，将粉末过300目筛，得到桦树茸粉。
[0020]
（2）正丁醇提取向桦树茸粉中加入其重量9倍的正丁醇和4.5倍的水溶液，在25-30℃下搅拌2小时，分层，得到正丁醇提取液，此过程重复3次，合并所有的正丁醇提取液，得到正丁醇提取液a；（3）浓缩干燥将正丁醇提取液浓缩，干燥，条件为负压为0.1 mpa，温度为40-50℃，得到桦树茸多糖提取物a。
[0021]
（4）氯化钠水溶液洗涤氯化钠水溶液洗涤：将桦树茸多糖提取物a用25%（m/m）氯化钠水溶液洗涤，过滤，收集滤液，浓缩干燥后得到桦树茸多糖提取物b；（5）层析柱纯化取桦树茸多糖提取物b 15倍重量的200-300目硅胶粉置于硅胶柱中，加入桦树茸多糖提取物b固体，先用体积比甲醇：乙酸乙酯1:3洗脱液冲洗，再用体积比甲醇：水 1:7冲洗，收集甲醇水溶液，浓缩干燥，得到桦树茸多糖408g。
[0022]
此方法制备的桦树茸多糖色泽为金黄色，其多糖含量按照ny/t 1676-2008标准中的检测方法进行检测，即多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生产糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收，与标准系列比较定量。
[0023]
发明专利cn 111057163a提供了一种桦树茸提取物的制备方法及应用，本发明与专利里所得到的粗多糖提取率（%）、桦树茸多糖的纯度（%）进行对比，本发明提供的制备方法所得到的桦树茸多糖提取率高，纯度高，且工艺简单，成本低，适合工业化生产。
[0024]
其中，粗多糖提取率（%）=[粗多糖提取物干重（g）/桦树茸干重（g）]
×
100%桦树茸多糖纯度（%）=[桦树茸提取物中多糖的量（g）/桦树茸提取物的量（g）]
×
100%
表1实施例1、2、3粗多糖提取率（%）和桦树茸多糖纯度（%）数据表项目实施例1实施例2实施例3粗多糖提取率（%）7983.481.6桦树茸多糖纯度（%）73.674.874.2对上述结果进行分析，实施例2为最佳实施例。
[0025]
实施例4桦树茸多糖，20mg/ml（100mg/kg），10mg/ml（50mg/kg）并对小鼠进行黑色素瘤的抑瘤实验，每组4只c57，腋下注射一定量b16细胞后，分为以下几组：对照组腹腔生理盐水，腹腔组50mg/kg给药，灌胃组100mg/kg，每天一次给药。结果见下表：表2 对照组、腹腔组、灌胃组给药天数与肿瘤体积mm3变化结果
时间/天7911131517对照/肿瘤体积mm3183.75183.75295.245688.17641.87687.808178.85494.95051280.664171.088314.9281221.00837.6156.325670.68腹腔/肿瘤体积mm3368.55572.22750.21166.1215.6207.36382.925892.687530.118113.715208.088843.988518.25952.9176.4689.09874.0625.72584.564229.147灌胃/肿瘤体积mm337.92644.1154.2125344.3895763.9021184.10912.09631.487115.351343.1875630917.16327.216110.466219.2835566.1555841.873577.5215.136483.84814.4955
结果表明，桦树茸多糖对黑色素瘤有良好的治疗效果。
[0026]
上述实施例为本发明优选的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明所做的改变均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。