一种富多糖胶原蛋白肽及其制备方法和应用与流程

本发明涉及胶原蛋白肽制备，具体涉及一种富多糖胶原蛋白肽及其制备方法和应用。

背景技术：

1、胶原蛋白是细胞外基质中最丰富的成分，能够维持皮肤结构，决定皮肤的生理功能。胶原蛋白肽是胶原蛋白的水解产物，可在人体消化道被进一步分解为活性二肽、三肽，进入血液循环系统，富集到皮肤、软骨等组织中。研究表明通过补充胶原蛋白肽能够缓解年龄增长伴随的胶原蛋白合成减少，增加皮肤弹性，减少面部皱纹。胶原蛋白肽现已经成为口服美容原料中最受欢迎的原料之一。糖胺聚糖是由重复二糖单位构成的无分枝长链多糖。糖胺聚糖能够维持皮肤内水分、调节皮肤细胞的增殖分化、调节炎症、重构细胞外基质，促进皮肤再生，改善皮肤老化。近年来，糖胺聚糖在口服美容原料、化妆品等领域的应用获得了大众的广泛关注。

2、然而，目前应用于口服美容类的胶原蛋白肽原料主要以i型胶原蛋白肽为功效成分，胶原蛋白肽种类相对单一；i型胶原蛋白肽的糖基化程度低，几乎不含有糖胺聚糖类物质，且往往通过和其他类型胶原蛋白肽和低分子糖胺聚糖类原料进行配方搭配应用，使得胶原蛋白肽类原料在亲肤美容领域的开发和应用受到一定限制。

技术实现思路

1、基于上述背景，本发明的目的是提供一种具有高抗氧化性的富多糖胶原蛋白肽及其制备方法和应用。该富多糖胶原蛋白肽具有多条特征性肽段：gsrgepgpngavgpvgps,gangdkgeggsf,argpngysgpvgppgppglpgppgpa,sgspgengspgpmgpr,iqvpdeesngifaa,rneepvlf特征肽段；实现了i型、ii型胶原蛋白肽糖胺聚糖复合物的高效制备，体外实验表明该复合物具有高抗氧化活性，可应用于新型口服亲肤类的健康食品原料。

2、本发明采用以下的技术方案：

3、一种富多糖胶原蛋白肽，包括胶原蛋白肽、糖胺聚糖，具有gsrgepgpngavgpvgps,gangdkgeggsf,argpngysgpvgppgppglpgppgpa,sgspgengspgpmgpr,iqvpdeesngifaa,rneepvlf特征肽段。

4、进一步地，所述富多糖胶原蛋白肽含有i型胶原蛋白肽、ii型胶原蛋白肽和低分子量糖胺聚糖。

5、进一步地，所述富多糖胶原蛋白肽中，胶原蛋白肽85-99％、糖胺聚糖1-15％。

6、进一步地，所述胶原蛋白肽平均分子量低于1500da。

7、本技术中，富多糖胶原蛋白肽的制备利用高压液化、微波耦合法制备胶原蛋白糖胺聚糖复合物，通过分步生物酶解法制备得到糖胺聚糖与胶原蛋白肽复合水解产物；所制备得到的富多糖胶原蛋白肽含有i型胶原蛋白肽、ii型胶原蛋白肽和低分子量糖胺聚糖，具有显著的抗氧化活性，为其在未来应用于口服美容功能食品提供理论依据。

8、一种富多糖胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

9、s1.原料净化处理，所述原料为富含i型胶原蛋白物质a和软骨类物质b；

10、s2.高压液化融合：

11、将处理好的富含i型胶原蛋白物质a和软骨类物质b按照质量比3：1-7：1比例混合，置于磁力高压反应釜中，按照料液比1：5-2：1比例添加去离子水，磁力搅拌充分混合均匀；于10-30mpa，低速搅拌，反应6-8h；

12、在高压条件下有利于原料中所含有的i型胶原蛋白、ii型胶原蛋白纤维松散解链，进一步降解，与糖胺聚糖分子相互作用形成稳定的胶原蛋白-多糖复合物。

13、s3.微波聚合：

14、将高压液化融合的反应产物置于液体微波加热器中，在功率100w-600w，温度范围20-90℃之间，反应时间10-30min，进行微波聚合反应，进一步促进胶原蛋白-多糖复合物的生成；

15、s4.复合酶解；

16、进一步地，步骤s4中，所述复合酶解包括以下步骤：将微波聚合的产物降温至40-60℃，进一步温度控制在50-60℃，先加入碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶中的一种或几种，酶添加量为0.02％-0.2％，酶解0.5-1.0h；随后加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶中的一种或几种，酶添加量为0.02％-0.2％，酶解总时长3-5h，制得含有特定肽片段的富多糖胶原蛋白水解物。

17、s5.离心分离；

18、进一步地，所述离心分离包括以下步骤：将酶解液于5000rpm-7000rpm低速离心机离心20-30min分离酶解残渣，取上层清液。

19、s6.纯化过滤；

20、进一步地，所述纯化过滤包括以下步骤：圆盘过滤机进一步澄清过滤，除去细微颗粒，起到进一步纯化的作用；

21、s7.脱色净味；

22、进一步地，所述脱色净味包括以下步骤：将纯化过滤所得澄清滤液，加入0.5-2％脱色活性炭以及0.5-2％脱嗅活性炭，于50-60℃搅拌吸附0.5-2.5h。

23、s8.炭分离；

24、进一步地，所述炭分离包括以下步骤：将活性炭吸附液离心分离，7000rpm，30min；离心液再经圆盘过滤机、纸板过滤机进一步脱炭纯化处理。

25、s9.纯化；

26、进一步地，所述纯化包括以下步骤：取上述澄清滤液经纳滤膜分离除去低价阳离子，脱除灰分提升口感；进一步用0.22μm孔径滤膜过滤净化除杂。

27、s10.灭菌、浓缩喷雾干燥。

28、上述经多级过滤、纯化处理后的料液经灭菌、浓缩、喷雾干燥得到类白色颗粒状粉体，即得富多糖胶原蛋白肽。

29、进一步地，所述富含i型胶原蛋白物质a为鱼皮和/或鱼鳞；所述软骨类物质b为可食用动物骨和/或结缔组织。

30、进一步地，鱼皮净化处理包括以下步骤：冰冻鲜鱼皮原料，采用去离子水解冻、浸洗10-20h，过程隔2-3h换水一次，采用0.01％-0.02％naoh溶液，固液比1-2：10，室温条件下浸泡10-20h，充分净化、脱脂处理，后采用流水充分浸洗至漂洗液ph 7-8；沥干水分，将鱼皮原料粉碎剪切至0.1cm-0.5cm的鱼皮碎片备用。

31、所述鱼皮原料可用预先脱灰处理的冰冻鱼鳞原料替换。

32、进一步地，鱼鳞净化处理包括以下步骤：取预先脱灰处理的冰冻鱼鳞原料，采用去离子水解冻、浸洗，沥干备用。

33、进一步地，所述软骨类物质b为禽畜软骨和/或鱼类软骨。

34、进一步地，禽畜软骨净化处理包括以下步骤：取禽畜软骨原料，充分清洗后，加入适量去离子水，固液比为1-2：10，室温浸洗6-10h；将上述经充分水合作用后的软骨粉碎至直径为0.1-0.5cm范围的软骨颗粒备用。

35、进一步地，鱼类软骨处理包括以下步骤：取冰冻鲜鱼类软骨，采用去离子水解冻、浸洗10-20h，过程隔2-3h换水一次，采用0.01％-0.02％naoh溶液，固液比1-2：10，室温条件下浸泡10-20h，充分净化、脱脂处理，后采用流水充分浸洗至漂洗液ph 7-8；沥干水分，将软骨粉碎至0.1cm-0.5cm的颗粒备用。

36、本发明提出的富多糖胶原蛋白肽，具有高抗氧化活性，为胶原蛋白肽-多糖复合物，其胶原蛋白肽-多糖复合物含有i型胶原蛋白肽、ii型胶原蛋白肽以及低分子量糖胺聚糖成分，包括i型胶原蛋白肽、ii型胶原蛋白肽、硫酸软骨素、氨基葡萄糖。糖肽复合物所含蛋白含量85-99％，糖胺聚糖含量1-15％，产品收率高，灰分含量低，多糖组分分子量分布均匀，胶原蛋白肽平均分子量低于1500da，更加利于机体吸收摄取。经鉴定含多条特征性肽段，该工艺条件所制备的胶原蛋白肽多糖复合物均具有高抗氧化活性，可作为健康食品原料应用于美容护肤、关节养护等领域，为其在未来应用于口服美容功能食品提供理论依据。

37、本发明还提供了一种具有高抗氧化活性的功能原料，所述功能原料以上述胶原蛋白肽-多糖复合物为有效成分。

38、本发明具有的有益效果是：

39、(1)提供一种具有高抗氧化活性的富多糖胶原蛋白肽的制备方法，通过将富含i型胶原蛋白物质a和软骨类物质b，例如鱼皮或鱼鳞及禽畜类或鱼类软骨分别进行高压液化反应结合微波加热处理，有效促进胶原蛋白糖胺聚糖复合物的生成，通过分步酶解技术制备分子量低且分布集中的胶原蛋白肽-多糖复合物，提高了生产原料的附加值，适用于企业规模化生产；

40、(2)所制备得到的富多糖胶原蛋白肽，包含多种i型、ii型胶原蛋白肽和低分子量糖胺聚糖成分，多种成分协同作用，具有高抗氧化活性；

41、(3)经对比分析实施例与不同工艺路线、不同酶解所制备样品具有显著的结构差异以及特征性肽片段组成差异，体外抗氧化实验证明本技术具有显著的自由基清除活性，证明该富多糖胶原蛋白肽具有良好的开发为口服美容功能食品原料的应用潜力。