.，2002，78(1): 69-74.】)，食用安全，且具有良好的降血压活性。本发明 制备的油茶柏酶法改性蛋白，其生产成本低，可综合利用油茶加工的副产物，有利于环保， 其经济和社会效益显著。
【具体实施方式】
[0012] 以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。
[0013] 实施例1 本实施例包括以下步骤： (1) 前处理：将油茶柏粉碎，过60目筛，用水浸提法，按照固体质量与液体体积比为 1:8 (g/mL)的比例，进行茶阜素分离，浸提温度为70°C,浸提时间为9h,浸提液pH值为 7. 0,浸提完成后离心，使浸提液和茶柏分离，得到脱除茶皂素的油茶柏；按照固体质量与液 体体积比为1:15 (g/mL)的比例将水加入脱除茶阜素的油茶柏中，浸泡3h; (2) 超声波辅助细胞壁裂解酶水解：往步骤（1)所得混合液中加入相当于油茶柏干 基质量0. 2%(wt/wt)的细胞壁裂解复合酶水解，所述细胞壁裂解复合酶由纤维素酶与果胶 酶组成，其质量比为2:1 (wt/wt)，水解温度为40°C，pH值为4. 5,水解时间为8. 0h，每间隔 15min用超声波处理器处理25min，超声的频率为50KHz，功率为100W; (3) 超声波辅助复合蛋白酶水解油茶柏：往步骤（2)所得混合液中加入相当于步 骤（1)油茶柏浆液中蛋白质量【蛋白质量用凯氏定氮法测定】〇.2%(wt/wt)的复合蛋白 酶水解，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶组成，其组成按质量比为 3:3:2 (wt/wt/wt)，置于温度40°C水浴中水解8h，每间隔20min用超声波处理器处理30min， 超声的频率为50KHz，功率为80W; (4) 将步骤（3)产生的混合物第一次离心分离，收集第一上清液，用0. 8mol/L的盐酸 调节第一上清液的pH值至4. 4-4. 8,第二次离心分离，收集第二上清液及第二次离心沉淀 物； (5) 按照固体质量（湿重）与液体体积比为l:6(g/mL)的比例将水加入步骤（4)离心 分离所得沉淀物中（第二次离心分离沉淀物)，制成混合物浆液，加入相当于混合物浆液中 蛋白质量【蛋白质量用凯氏定氮法测定】〇.2%(wt/wt)的复合蛋白酶水解，所述复合蛋白酶 由中性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，其质量比为4:5(wt/wt)，置于温度40°C水浴中水解8h， 每间隔20min用超声波处理器处理30min，超声的频率为50KHz，功率为80W;再离心分离， 得第三上清液，离心所得第三沉淀物则加入下一批油茶柏混合物中，从步骤（2)开始处理； (6) 将步骤（4)所得第二上清液及步骤（5)所得第三上清液合并，经超滤膜过滤后，用 0. 4mol/LNaOH调pH值至中性，低温真空干燥（温度为38°C、真空度为0. 035MPa)，含水量 < 7wt%时终止)，得油茶柏酶法改性蛋白。
[0014]本实施例所得油茶柏中，蛋白的提出率达97%(wt/wt)，酶法改性蛋白中相对分子 质量低于3000Da的多肽占87%(wt/wt)。
[0015] 本实施例制得的油茶柏酶法改性蛋白质生物效价高，蛋白效率比（PER)为3. 04， 而且对原发性高血压大鼠（SHR)具有显著降血压作用。
[0016] 在油茶柏酶法改性蛋白降血压活性测试中（测定前将SHR在37-39 °C下保温 10min，采用尾套式测定法，用电子血压测定仪进行测定，同一SHR测定5次。实施例2 和3同此。），阴性对照组受试前SHR的血压为（132. 75±1. 88)mmHg，受试6周后SHR的 血压为（133. 46±1. 76)mmHg;阳性对照组受试前SHR的血压为（132. 72±1. 81)mmHg，受 试6周后SHR的血压为（116. 31±1. 57)mmHg;油茶柏酶法改性蛋白受试前SHR的血压为 (132.79±1. 19)mmHg，受试6周后SHR的血压为（110.65±1.55)mmHg。给受试物前，各组之 间血压值均无显著差异〇7>0. 05)。给受试物第6周后，阳性对照组与油茶柏酶法改性蛋白 受试组间存在显著差异0X0. 05)。
[0017]【注：上述结果均用I±SD(n=10)表示；阴性对照组只灌喂生理盐水，阳性对照 组采用100mg/Kg*BW的蚕蛹降血压肽（常州康和生物技术有限公司），大鼠的油茶柏酶法 改性蛋白量饲喂剂量为100mg/Kg?BW】。
[0018] 实施例2 本实施例包括以下步骤： (1) 前处理：将油茶柏粉碎，过60目筛，用水浸提法，按照固体质量与液体体积比为 1:10 (g/mL)的比例，进行茶阜素分离，浸提温度为75°C,浸提时间为8h,浸提液pH值为 7. 0,浸提完成后离心，使浸提液和茶柏分离，得到脱除茶皂素的油茶柏；按照固体质量与液 体体积比为1:20 (g/mL)的比例将水加入脱除茶阜素的油茶柏中，浸泡3. 5h; (2) 超声波辅助细胞壁裂解酶水解：往步骤（1)所得混合液中加入相当于油茶柏干 基质量0. 3%(wt/wt)的细胞壁裂解复合酶水解，所述细胞壁裂解复合酶由纤维素酶与果胶 酶组成，其质量比为1:1 (wt/wt)，水解温度为45°C，pH值为5. 0,水解时间为9. 0h，每间隔 30min用超声波处理器处理40min，超声的频率为55KHz，功率为140W; (3) 超声波辅助复合蛋白酶水解油茶柏：往步骤（2)所得混合液中加入相当于步骤 (1)油茶柏浆液中蛋白质量【蛋白质量用凯氏定氮法测定】〇.3%(wt/wt)的复合蛋白酶水 解，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶组成，其组成按质量比为4:4:3， 置于温度45°C水浴中水解10h，每间隔25min用超声波处理器处理35min，超声的频率为 55KHz，功率为 120W; (4) 将步骤（3)产生的混合物第一次离心分离，收集第一上清液，用0. 9mol/L的盐酸 调节第一上清液的pH值至4. 4-4. 8,第二次离心分离，收集第二上清液及第二次离心沉淀 物； (5) 按照固体质量（湿重）与液体体积比为1:8 (g/mL)的比例将水加入步骤（4)离 心分离所得沉淀物(第二次离心分离所得固体）中，制成混合物浆液，加入相当于混合物浆 液中蛋白【蛋白质量用凯氏定氮法测定】质量0. 〇25%(wt/wt)的复合蛋白酶水解，所述复合 蛋白酶由中性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，其质量比为3:4 (wt/wt)，置于温度45°C水浴中水 解10h，每间隔25min用超声波处理器处理35min，超声的频率为55KHz，功率为120W;再离 心分离，得第三上清液，离心所得第三沉淀物则加入下一批油茶柏混合物中，从步骤（2)开 始处理； (6) 将步骤（4)所得第二上清液及步骤（5)所得第三上清液合并，经超滤膜过滤后，用 0? 5mol/LNaOH调pH值至中性，低温真空干燥（温度为40°C、真空度为0? 030MPa)，干燥至 含水量< 7wt%时终止)，得油茶柏酶法改性蛋白。
[0019] 本实施例中，油茶柏中蛋白的提取率达97. 5%(wt/wt)，酶法改性蛋白中相对分子 质量低于3000Da的多肽占88%(wt/wt)。
[0020] 本实施例制得的油茶柏酶法改性蛋白质生物效价高，蛋白效率比（PER)为3. 04， 且对原发性高血压大鼠（SHR)具有显著降血压作用。
[0021] 在油茶柏酶法改性蛋白降血压活性测试中(测定前将SHR在37-39 °C下保温10 min，采用尾套式测定法，用电子血压测定仪进行测定，同一SHR测定5次)，阴性对照组受试 前的血压为（132. 74±1. 87)mmHg，受试6周后血压为（133. 51 ±1. 69)mmHg;阳性对照组受 试前的血压为（132.82±1.75)mmHg，受试6周后血压为（115.65±L43)mmHg;油茶柏酶法 改性蛋白受试前大鼠的血压为（132.72±1.56)mmHg，受试6周后血压为（110.45±1.23) mmHg。给受试物前，各组之间血压值均无显著差异〇7>0. 05)。给受试物第6周后，阳性对照 组与油茶柏酶法改性蛋白受试组间存在显著差异（/X0. 05)。
[0022] 【注：上述结果均用I±SD(n=10)表示；阴性对照组只灌喂生理盐水，阳性对照组 采用100mg/Kg*BW的蚕蛹降血压肽（常州康和生物技术有限公司），大鼠的油茶柏酶法改 性蛋白量饲喂剂量为100mg/Kg?BW】。
[0023] 实施例3 本实施例包括以下步骤： (1) 前处理：将油茶柏粉碎，过60目筛，用水浸提法，按照固体质量与液体体积比为 1:12 (g/mL)的比例，进行茶阜素分离，浸提温度为80°C,浸提时间为7h,浸提液pH值为 7. 0,浸提完成后离心，使浸提液和茶柏分离，得到脱除茶皂素的油茶柏；按照固体质量与液 体体积比为1:25 (g/mL)的比例将水加入脱除茶阜素的油茶柏中，浸泡4h; (2) 超声波辅助细胞壁裂解酶水解：往步骤（1)所得混合液中加入相当于油茶柏干基 质量0. 4%(wt/wt)的细胞壁裂解复合酶水解，所述细胞壁裂解复合酶由纤维素酶与果胶酶 组成，其质量比为l:2(wt/wt)，水解温度为50°C，pH值为5.5,水解时间为lO.Oh，每间隔 35min用超声波处理器处理45min，超声的频率为60KHz，功率为180W; (3) 超声波辅助复合蛋白酶水解油茶柏：往步骤（2)所得混合液中加入相当于步骤 (1)油茶柏浆液中蛋白质量(蛋白质量用凯氏定氮法进行测定）〇.4%(wt/wt)的复合蛋白 酶水解，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶