胱氨酸残基组成的肽键。通过上述肽键，聚乙二醇（PEG)与IFNa的C-末端相 结合。上述肽键Y能够由0-10个甘氨酸残基及1-80个半胱氨酸残基组成，更优选地，能够 由0-10个甘氨酸残基及1-60个半胱氨酸残基组成，尤其优选地，能够由1-10个甘氨酸残 基及1-10个半胱氨酸残基组成，进而优选地，能够由1-5个甘氨酸残基及1-5个半胱氨酸 残基组成。并且，上述肽键Y能够由0-10个甘氨酸残基或1-80个半胱氨酸残基组成，更优 选地，能够由1-10个甘氨酸残基或1-60个半胱氨酸残基组成，尤其优选地，能够由1-10个 甘氨酸残基及1-10个半胱氨酸残基组成，进而优选地，能够由1-5个甘氨酸残基及1-5个 半胱氨酸残基组成，最优选地，能够由3-5个甘氨酸残基或3-5个半胱氨酸残基组成。
[0035] 根据本发明的优选实施例，由本发明的干扰素-a (IFNa )融合蛋白内的 "CTP-X-IFNa-Y"表示的肽部分（p印tide moiety)由选自由序列表中序列15至序列表中 序列20所公开的序列组成的组中的氨基酸序列组成的肽，更优选地，是由序列表中序列18 的氨基酸序列组成的肽。
[0036] 在本发明中，由"CTP-X-IFNa -Y"表示的肽部分的氨基酸序列被解释为还包含相 对于上述序列表中序列15至序列表中序列20中的一个氨基酸序列呈现出实质性的同一性 的氨基酸序列。上述实质性的同一性意味着使上述本发明的氨基酸序列与任意的其他序列 最大限度地相对应的方式排比，并利用所属领域普遍使用的算法来对所排比的序列进行分 析的情况下，呈现出最少80%的同一"性，更优选地，呈现出最少90%的同一"性，最优选地， 呈现出最少95%的同一"性的氨基酸序列。
[0037] 在本发明的IFN α融合蛋白的C-末端结合有聚乙二醇（PEG)。
[0038] 在本发明中，PEG与IFNa融合蛋白的N-末端相结合的情况下，会使CTP的细胞 膜渗透性和肝移动性降低，因而并不优选。即，如以下本发明的具体一实施例所证明，若PEG 与IFNa融合蛋白的N-末端相结合，则虽然试管内（in vitro)抗病毒活性及血液内的稳 定性优秀，但肝移动性显著降低。
[0039] PEG具有减少肾清除机制来延长血液内的半衰期，从而减少本发明的融合蛋白的 给药量的效果。
[0040] 根据本发明的优选实施例，上述聚乙二醇（PEG)的分子量可以为20-60kDa，优 选为20-50kDa，更优选为30-45kDa，尤其优选为35-45kDa，最优选为40-45kDa。在使用 40-45kDa的PEG的情况下，肝移动性的增大效果最大。
[0041] 根据本发明的另一优选实施例，上述聚乙二醇（PEG)可以为线性PEG(linear PEG)或分枝型 PEG (branched PEG)。
[0042] 在本说明书中，上述术语"线性PEG"意味着PEG以没有分枝的方式由单一的链 (chain)组成的PEG形态，术语"分枝型PEG"意味着2-10个PEG链从中心核心组（central core group)分支出来的形态。
[0043] 本发明的PEG作为线性PEG，特异性地与干扰素α蛋白质的特定氨基酸残基相结 合，因而使最终生成的PEG-干扰素α融合蛋白的分离及纯化变得容易，且在蛋白质的质量 管理方面也有优点。
[0044] 在本发明的IFNa融合蛋白结合上述PEG的聚乙二醇化反应可通过所属领域公 知的方法执行（M.J. Roberts, M.D. Bentley et al·，Chemistry for peptide and protein PEGylationjAdvanced Drug Delivery Reviews 54:459476(2002) ；Francesco M. , Peptide and protein PEGylation:a review of problems and solutions,Veronese Biomaterials 22:405-417(2001))〇
[0045] 根据本发明的再一实施方式，本发明提供核酸分子，上述核酸分子对由上述本发 明的干扰素-a (IFNa)融合蛋白内的"CTP-X-IFNa-Y"表示的肽部分（p印tide moiety) 进行编码。
[0046] 在本说明书中，术语"核酸分子"具有包含DNA(gDNA及cDNA)及RNA分子的意义， 在核酸分子中作为基本结构单位的核苷酸不仅包含自然的核苷酸，还包含糖或碱基部位发 生变形的类似物（analogue) (Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 及 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990))〇
[0047] 根据本发明的优选实施例，对由上述本发明的IFN- α融合蛋白内的 "CTP-X-IFNa -Y"表示的肽部分进行编码的核酸分子为对由序列表中序列15至序列表中 序列20中的一个氨基酸序列组成的肽进行编码的核酸分子，更优选为对由序列表中序列 18的氨基酸序列组成的肽进行编码的核酸分子，最优选为具有序列表中序列22的DNA碱基 序列的核酸分子。
[0048] 根据本发明的另一实施方式，本发明提供载体，上述载体包含对由IFN-α融合蛋 白内的"CTP-X-IFN α -Y"表示的肽部分进行编码的核酸分子。
[0049] 本发明的载体系统可通过所属领域公知的多种方法构建，与此相关的具体方法已 公开于 Sambrook et al. , Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)，上述文献插入于本说明书作为参照。
[0050] 典型地，本发明的载体能够作为用于克隆的载体或用于表达的载体构建。并且，本 发明的载体能够将原核细胞或真核细胞作为宿主构建。本发明的核苷酸序列来源于原核细 胞，且考虑到培养的便利性等，优选地，将原核细胞作为宿主。
[0051] 在本发明的载体为表达载体，且将原核细胞作为宿主的情况下，通常包含能够 进行转录的强有力的启动子（例如，tac启动子、Iac启动子、lacUV5启动子、Ipp启动 子、pL λ启动子、pR λ启动子、rac5启动子、amp启动子、recA启动子、SP6启动子、trp 启动子及T7启动子等）、用于开始解读的核糖体结合位置及转录/解读终止序列。在使 用E. coli作为宿主细胞的情况下，E. coli色氨酸生物合成途径的启动子、操纵基因部位 (Yanofsky，C.，J. Bacteriol. ,158:1018-1024(1984))及噬菌体 λ 的左向启动子（pL λ 启 动子，Herskowitz, I. and Hagen, D.，Ann. Rev. Genet.，14:399-445 (1980))可利用为调节部 位。
[0052] 另一方面，能够利用于本发明的载体可通过对所属领域中常常使用的质粒（例： pSC101、ColEl、pBR322、pUC8/9、pHC79、pUC19、pET 等）、噬菌体（例：λ gt4 λ Β、λ-Charon、 λ Λ zl及Μ13等）或病毒（例：SV40等）进行操作来制备。
[0053] 另一方面，在本发明的载体为表达载体，且将真核细胞作为宿主的情况下，可以利 用来源于哺乳动物细胞的基因组（genome)的启动子（例：金属硫蛋白启动子）或来源于哺 乳动物病毒的启动子（例：腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7. 5K启动子、SV40启动子、巨细胞 病毒启动子及HSV的tk启动子），并且作为转录终止序列，通常具有聚腺苷酸化序列。
[0054] 在本发明的载体中，为了使从载体中表达的由本发明的IFN-α融合蛋白的 "CTP-X-IFNa-Y"表示的肽的纯化变得容易，可根据需要与其他序列相融合，而作为相融合 的序列，例如可利用谷胱甘肽S-转移酶（美国法玛西亚（Pharmacia)公司）、麦芽糖结合蛋 白（美国纽英伦（NEB)公司）、FLAG (美国IBI公司）及6x His (六组氨酸（hexahistidine)， 美国凯杰（Quiagen)公司）等，但并不局限于此。
[0055] 根据本发明的优选实施例，由借助本发明的载体表达的"CTP-X-IFN α -Y"表示的 肽可通过阳离子交换色谱法及凝胶过滤色谱法来实现纯化。
[0056] 另一方面，本发明的表达载体可包含所属领域通常使用的抗生素抗性基因作为选 择标记，例如，具有对氨苄西林、艮他霉素、羧苄青霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素、遗传霉 素、新霉素及四环素的抗性基因。
[0057] 根据本发明的还一实施方式，本发明提供包含上述本发明的载体的转化子。
[0058] 既能使本发明的载体得到稳定，又能连续地进行克隆及表达的宿主细胞也可利用 所属领域公知的任何宿主细胞，例如，可利用Ε. coli JM109、Ε. coli BL21(DE3)、Ε. coli RR1、E. coli LE392、E. coli B、E. coli X 1776、E. coli W3110、枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌 之类的芽孢杆菌属菌株以及鼠伤寒沙门氏菌