X、XXxXXXX、XXXxXXX、XXXXxXX、XXXXXxX 以及 XXXXXXx，其中"X" 表示核苷酸类似物，（X)表示任选的核苷酸类似物，并且"X"表示DNA或RNA核苷酸单位。 在一些实施例中，该寡核苷酸的至少一个核苷酸为核苷酸类似物。在一些实施例中，与不具 有至少一个核苷酸类似物的寡核苷酸相比较，该至少一个核苷酸类似物导致该寡核苷酸的 的Tm在1°C至5°C的范围内的升高。
[0025] 在一些实施例中，该寡核苷酸的至少一个核苷酸包括2' 0-甲基。在一些实施例 中，该寡核苷酸的每个核苷酸包括2' 0-甲基。在一些实施例中，该寡核苷酸包括至少一个 核糖核苷酸、至少一个脱氧核糖核苷酸或至少一个桥连核苷酸。在一些实施例中，该桥连核 苷酸为LNA核苷酸、cEt核苷酸或ENA修饰的核苷酸。在一些实施例中，该寡核苷酸的每个 核苷酸为LNA核苷酸。
[0026] 在一些实施例中，该寡核苷酸的核苷酸包括交替的脱氧核糖核苷酸以及 2' -氟-脱氧核糖核苷酸。在一些实施例中，该寡核苷酸的核苷酸包括交替的脱氧核糖核 苷酸以及2' -O-甲基核苷酸。在一些实施例中，该寡核苷酸的核苷酸包括交替的脱氧核糖 核苷酸以及ENA核苷酸类似物。在一些实施例中，该寡核苷酸的核苷酸包括交替的脱氧核 糖核苷酸以及LNA核苷酸。在一些实施例中，该寡核苷酸的5'核苷酸为脱氧核糖核苷酸。 在一些实施例中，该寡核苷酸的核苷酸包括交替的LNA核苷酸和2' -0-甲基核苷酸。在一 些实施例中，该寡核苷酸的5'核苷酸为LNA核苷酸。在一些实施例中，该寡核苷酸的核苷 酸包括通过脱氧核糖核苷酸的5'端和3'端中的每一个上的至少一个LNA核苷酸侧接的脱 氧核糖核苷酸。
[0027] 在一些实施例中，该单链寡核苷酸包括至少两个、至少三个、至少四个、至少五个 或更多个核苷酸之间的修饰的核苷酸间键（例如，硫代磷酸酯核苷酸间键或其他键）。在一 些实施例中，该单链寡核苷酸包括所有核苷酸之间的修饰的核苷酸间键（例如，硫代磷酸 酯核苷酸间键或其他键）。
[0028] 在一些实施例中，该寡核苷酸的3'位置处的核苷酸具有3'羟基。在一些实施例 中，该寡核苷酸的3'位置处的核苷酸具有3'硫代磷酸酯。在一些实施例中，该单链寡核 苷酸具有一个生物素部分或缀合至其5'或3'核苷酸的其他部分。在一些实施例中，该单 链寡核苷酸具有胆固醇、维生素 Α、叶酸、〇受体配体、适体、肽、如CPP、疏水性分子如脂质、 ASGPR或动态多聚缀合物以及其在5'或3'端处的变体。
[0029] 根据本发明的一些方面，提供包含在此披露的任何寡核苷酸以及载体的组合物。 在一些实施例中，提供在缓冲溶液中包含任何寡核苷酸的组合物。在一些实施例中，将寡核 苷酸缀合至载体。在一些实施例中，载体为一种肽。在一些实施例中，载体为一种类固醇。 根据本发明的一些方面，提供包含在此披露的任何寡核苷酸以及药学上可接受的载体的药 物组合物。
[0030] 根据本发明的其他方面，提供包括容纳在此披露的任何组合物的容器的试剂盒。
[0031] 根据本发明的一些方面，提供提高细胞内PTEN的表达的方法。在一些实施例中， 这些方法包括将在此披露的单链寡核苷酸中的任一种或多种递送至细胞。在一些实施例 中，将该单链寡核苷酸递送至细胞导致PTEN的表达水平大于（例如，至少50%大于）不包 括该单链寡核苷酸的对照细胞中的PTEN的表达水平。
[0032] 根据本发明的一些方面，提供提高受试者体内PTEN的水平的方法。根据本发明的 一些方面，提供治疗受试者体内与PTEN的降低的水平相关联的病症（例如，癌症）的方法。 在一些实施例中，这些方法包括向该受试者给予在此披露的单链寡核苷酸中的任一种或多 种。
[0033] 附图简要说明
[0034] 图1是描绘了在用寡核苷酸处理的H印G2细胞中相对于未接受寡核苷酸的细胞中 的PTEN表达水平的图。该PTEN表达是通过pRTPCR针对如在表4中给出的称为ΡΤΕΝ-41 至PTEN-70的寡核苷酸测量的。该寡核苷酸浓度是30nM，并且实验的时间是48小时。用于 该qRTPCR对照的管家基因是PPIB。
[0035] 图2是描绘了在用寡核苷酸处理的H印G2细胞中相对于未接受寡核苷酸的细胞中 的PTEN表达水平的图。该PTEN表达是通过pRTPCR针对如在表4中给出的称为PTEN-71 至PTEN-100的寡核苷酸测量的。该寡核苷酸浓度是30nM，并且实验的时间是48小时。用 于该qRTPCR对照的管家基因是PPIB。
[0036] 表格简述
[0037] 表1 :非为人miRNA的种子序列的六聚物
[0038] 表2 :为实验室测试制备的寡核苷酸序列。RQ(第3列）和RQ SE (第4列）显示 了寡核苷酸相对于一个对照孔（通常为单独的载体）的活性以及标准误差或实验的三次重 复（triplicate replicates)。已示出[寡核苷酸]在体外实验中以纳摩尔计并且在体内 实验中以微克/千克体重计。表4中示出了每个寡核苷酸（包括任何修饰的核苷酸）的序 列。
[0039] 表3 :寡核苷酸修饰列表
[0040] 表4 :显示核苷酸修饰的为测试制备的格式化寡核苷酸序列。表格示出修饰的核 苷酸序列，其中InaX表示具有3'硫代磷酸酯键的LNA核苷酸，omeX为2' -O-甲基核苷酸， dX为脱氧核苷酸。核苷酸码末端处的s指示该核苷酸具有3'硫代磷酸酯键。序列末端处 的"-Sup"标记以下事实：3'末端的3'键上缺少磷酸酯或硫代磷酸酯。针对表2中所测试 的寡核苷酸，格式化序列列示出了包括修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。
[0041] 表5:细胞系
[0042] 本发明的某@实施方案的详细说明
[0043] 在此提供的本发明的方面涉及发现多梳阻抑复合物2(PRC2)_相互作用RNA。多 梳阻抑复合物2(PRC2)为组蛋白甲基转移酶以及使基因组区通过组蛋白H3的甲基化沉默 中涉及的已知的表观遗传调控剂（epigenetic regulator)。在其他功能中，PRC2与长的非 编码RNA(IncRNA)如R印A、Xist以及Tsix相互作用以便催化组蛋白H3-赖氨酸27的三甲 基化。PRC2含有四个亚单位 ：Eed、SuZ12、RbAp48以及EZh2。本发明的方面涉及单链寡核 苷酸可以诱导或增强PTEN的表达的认识，这些单链寡核苷酸结合至在基因组区内表达的 RNA(例如，IncRNA)的PRC2相关区，该基因组区涵盖或功能性接近PTEN基因。在一些实施 例中，认为这个上调源于PRC2介导的PTEN的阻抑的抑制作用。
[0044] 如在此所使用，术语"PRC2相关区"是指包括或编码与PRC2的组分直接或间接相 互作用的核苷酸序列的核酸的区域。PRC2相关区可以存在于与PRC2相互作用的RNA(例 如，长的非编码RNA(IncRNA))中。PRC2相关区可以存在于编码与PRC2相互作用的RNA的 DNA中。在一些情况下，该PRC2相关区等效地称为PRC2相互作用区。
[0045] 在一些实施例中，PRC2相关区为响应于对表达RNA的细胞的原位紫外线辐射而交 联至PRC2的组分的RNA的区域，或编码所述RNA区域的基因组DNA的区域。在一些实施例 中，PRC2相关区为与靶向PRC2的组分的抗体一起免疫沉淀的RNA的区域，或编码所述RNA 区域的基因组DNA的区域。在一些实施例中，PRC2相关区为与特异性结合至SUZ12、EED、 EZH2或RBBP4(如上所述为PRC2的组分）的抗体一起免疫沉淀的RNA的区域，或编码所述 RNA区域的基因组DNA的区域。
[0046] 在一些实施例中，PRC2相关区为在采用靶向PRC2的组分的抗体的RNA免疫沉淀 测定中被保护免于核酸酶（例如，RNase)破坏的RNA的区域，或编码所述受保护的RNA区 域的基因组DNA的区域。在一些实施例中，PRC2相关区为在采用靶向SUZ12、EED、EZH2或 RBBP4的抗体的RNA免疫沉淀测定中被保护免于核酸酶（例如，RNase)破坏的RNA的区域， 或编码所述受保护的RNA区域的基因组DNA的区域。
[0047] 在一些实施例中，PRC2相关区为RNA的区域，其中在采用靶向PRC2的组分的抗体 的RNA免疫沉淀测定的产物的测序反应中出现相对高频率的序列读取，或编码所述RNA区 域的基因组DNA的区域。在一些实施例中，PRC2相关区为RNA的区域，其中在采用特异性 结合至SUZ12、EED、EZH2或RBBP4的抗体的RNA免疫沉淀测定的产物的测序反应中出现相 对高频率的序列读取，或编码所述受保护的RNA区域的基因组DNA的区域。在这类实施例 中，该PRC2相关区可以称为"峰"。
[0048] 在一些实施例中，PRC2相关区包括与PRC2复合物相互作用的、具有40至60个核 苷酸的序列。在一些实施例中，PRC2相关区包括编码与PRC2相互作用的RNA的、具有40至 60个核苷酸的序列。在一些实施例中，PRC2相关区包括长度高达5kb、包括与PRC2相互作 用的序列（例如，具有40至60个核苷酸）的序列。在一些实施例中，PRC2相关区包括长度 高达5kb的序列，其中编码具有已知与PRC2相互作用的序列（例如，具有40至60个核苷 酸）的RNA。在一些实施例中，PRC2相关区包括长度约4kb、包括与PRC2相互作用的序列 (例如，具有40至60个核苷酸）的序列。在一些实施例中，PRC2相关区包括长度约4kb的 序列，其中编码包括已知与PRC2相互作用的序列（例如，具有40至60个核苷酸）的RNA。 在一些实施例中，PRC2相关区具有如SEQ ID NO :5至148中任一个中给出的序列。
[0049] 在一些实施例中，提供单链寡核苷酸，其特异性结合至涵盖或接近PTEN基因的基 因组区内的PRC2相关区或与其互补。在一些实施例中，提供单链寡核苷酸，其特异性结合 至具有如SEQ ID NO :5至148中任一个中给出的序列的PRC2相关区或与其互补。在一些 实施例中，提供单链寡核苷酸，其特异性结合至PRC2相关区或与其互补，该PRC2相关区具 有如SEQ ID NO :5至148中任一个中给出的序列，该序列连同来自这些SEQ ID所定位的相 应基因组区（例如，在人基因组中）的2kb、高达5kb或高达IOkb侧接序列相结合。在一些 实施例中，单链寡核苷酸具有如SEQ ID NO :149至89025中任一个中给出的序列。在一些 实施例中，单链寡核苷酸具有如表4中给出的序列。
[0050] 无意受限于本发明的理论，这些寡核苷酸能够通过防止将PRC2募集至特定染色 体基因座来干扰PRC2的结合和功能。例如，设计成特异性结合PRC2相关区IncRNA的单 链寡核苷酸的单一给药通过结合染色质不仅可以稳定地替换IncRNA，而且可以替换结合至 IncRNA的PRC2。在替换之后，