一种蛹虫草中虫草素的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，尤其是涉及一种蛹虫草中虫草素的提取方法。
【背景技术】
[0002]冬虫夏草，又名中华虫草，也称为夏草冬虫，简称虫草。是中国传统的名贵中药材，它是由肉座菌目麦角菌科虫草属的冬虫夏草菌寄生于高山草甸土中的蝠蛾幼虫，使幼虫僵化，在适宜条件下，夏季由僵虫头端抽生出长棒状的子座而形成(即冬虫夏草菌的子实体与僵虫菌核(幼虫尸体)构成的复合体)。然而，世界性冬虫夏草分布天然资源数量很少，在我国，冬虫夏草种类虽然很多，达数百种，但是入药的就只有两种:冬虫夏草菌，北冬虫夏草菌。虫草素是一种天然来源的药物，具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用外，有良好的临床应用前景。由于受原料、纯化过程等因素的影响，其价格一直居高不下，高昂的价格已经成为制约虫草素开发利用的瓶颈。因此研宄虫草素的提取工艺和提高其得率具有重要的经济价值和广阔的市场应用潜力。
【发明内容】
[0003]为解决上述技术问题，本发明提供一种蛹虫草中虫草素的提取方法。
[0004]本发明采用的技术方案是:一种蛹虫草中虫草素的提取方法，包括以下步骤:
[0005]步骤一，将蛹虫草培养基或菌体样品充分粉碎，加水混合，真空条件下超声提取，将混合液过滤后得到粗提液。
[0006]步骤二，将粗提液进行沉降处理，收集上清液，经过微孔滤膜进行精滤，得滤液。
[0007]步骤三，将滤液经反相ODS填料柱吸附，而后依次用水、甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生，对洗脱液进行HPLC检测，收集检测有虫草素的洗脱液，得提纯液。
[0008]步骤四，对提纯液进行真空旋转蒸发，得蒸发浓缩液，将蒸发浓缩液置于I?5°C下结晶，抽滤后将得到的晶体溶于纯化水中，进行重结晶，得虫草素晶体，最后将虫草素晶体经低温冷冻干燥后即可。
[0009]优选的，步骤一中水的pH值为4-5，蛹虫草培养基或菌体样品与水的体积比为I: 8-30 ο
[0010]优选的，步骤一超声次数为2-5次，每次超声间隔10-15分钟。
[0011]优选的，步骤二中微孔滤膜的孔径为3-5 μπι。
[0012]优选的，步骤三滤液经反相ODS填料柱吸附，每升滤液添加20_60g的填料，而后依次用5-15个柱体积的水、5-15个柱体积的甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生；DS填料粒径小于等于150 μπι。
[0013]本发明具有的优点和积极效果是:由于采用上述技术方案，提高虫草素提取效率，减少提取时间；对虫草素的提取和纯化工艺进行了优化，工艺步骤与选用的设备简单，可操作性强，能耗低。
【具体实施方式】
[0014]下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行进一步说明。
[0015]实施例1:
[0016]步骤一，将蛹虫草培养基或菌体样品充分粉碎，加pH值为4-5的水混合，蛹虫草培养基或菌体样品与水的体积比为1: 8，真空条件下超声提取，超声提取2次，间隔10分钟，将混合液过滤后得到粗提液。
[0017]步骤二，将粗提液进行沉降处理，收集上清液，经过孔径为3-5 μ m微孔滤膜进行精滤，得滤液。
[0018]步骤三，将滤液经反相ODS填料柱吸附，DS填料粒径小于等于150 μ m，每升滤液添加20g的填料，而后依次用5个柱体积的水、5个柱体积的甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生，对洗脱液进行HPLC检测，收集检测有虫草素的洗脱液，得提纯液。
[0019]步骤四，对提纯液进行真空旋转蒸发，得蒸发浓缩液，将蒸发浓缩液置于4°C下结晶，抽滤后将得到的晶体溶于纯化水中，进行重结晶，得虫草素晶体，最后将虫草素晶体经低温冷冻干燥后即可。
[0020]实施例2:
[0021 ] 步骤一，将蛹虫草培养基或菌体样品充分粉碎，加pH值为4-5的水混合，蛹虫草培养基或菌体样品与水的体积比为1: 30，真空条件下超声提取，超声提取5次，间隔15分钟，将混合液过滤后得到粗提液。
[0022]步骤二，将粗提液进行沉降处理，收集上清液，经过孔径为3-5 μ m微孔滤膜进行精滤，得滤液。
[0023]步骤三，将滤液经反相ODS填料柱吸附，DS填料粒径小于等于150 μ m，每升滤液添加60g的填料，而后依次用15个柱体积的水、15个柱体积的甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生，对洗脱液进行HPLC检测，收集检测有虫草素的洗脱液，得提纯液。
[0024]步骤四，对提纯液进行真空旋转蒸发，得蒸发浓缩液，将蒸发浓缩液置于4°C下结晶，抽滤后将得到的晶体溶于纯化水中，进行重结晶，得虫草素晶体，最后将虫草素晶体经低温冷冻干燥后即可。
[0025]以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种蛹虫草中虫草素的提取方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤一，将蛹虫草培养基或菌体样品充分粉碎，加水混合，真空条件下超声提取，将混合液过滤后得到粗提液； 步骤二，将所述粗提液进行沉降处理，收集上清液，经过微孔滤膜进行精滤，得滤液； 步骤三，将所述滤液经反相ODS填料柱吸附，而后依次用水、甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生，对洗脱液进行HPLC检测，收集检测有虫草素的洗脱液，得提纯液； 步骤四，对所述提纯液进行真空旋转蒸发，得蒸发浓缩液，将蒸发浓缩液置于I?5°C下结晶，抽滤后将得到的晶体溶于纯化水中，进行重结晶，得虫草素晶体，最后将所述虫草素晶体经低温冷冻干燥后即可。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草中虫草素的提取方法，其特征在于:所述步骤一中水的PH值为4-5，所述蛹虫草培养基或所述菌体样品与水的体积比为1: 8-30。
3.根据权利要求1所述的蛹虫草中虫草素的提取方法，其特征在于:所述步骤一超声次数为2-5次，每次超声间隔10-15分钟。
4.根据权利要求1所述的蛹虫草中虫草素的提取方法，其特征在于:所述步骤二中微孔滤膜的孔径为3-5 μ m。
5.根据权利要求1所述的蛹虫草中虫草素的提取方法，其特征在于:所述步骤三滤液经反相ODS填料柱吸附，每升所述滤液添加20-60g的填料，而后依次用5-15个柱体积的水、5-15个柱体积的甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生，所述甲醇水溶液为体积百分比5-30%的甲醇水溶液，DS填料粒径小于等于150 μ m。
【专利摘要】本发明提供一种蛹虫草中虫草素的提取方法，虫草素是一种天然来源的药物，具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用外，有良好的临床应用前景，但总是受原料、纯化过程等因素影响，本发明通过将蛹虫草培养基或菌体样品充分粉碎，水溶后超声以提高虫草素溶出量，过滤得粗滤液，再通过对滤液的富集、提纯，滤液经反相ODS填料柱吸附，洗脱，浓缩后可得到纯净的虫草素晶体。本发明具有的有益效果是：这种方法能够提高虫草素提取效率，减少提取时间；对虫草素的提取和纯化工艺进行了优化，工艺步骤与选用的设备简单，可操作性强，能耗低。
【IPC分类】C07H1-08, C07H19-16
【公开号】CN104592336
【申请号】CN201410842829
【发明人】季延滨, 李涛
【申请人】芝圣（天津）生物科技有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月30日