一种人参皂苷Rd的提取工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种人参皂苷Rd的提取工艺，属于人参皂苷提取技术领域。
【背景技术】
[0002] 人参阜苷（Ginsenoside)是一种固醇类化合物，三猫阜苷，主要存在于人参属药 材中。人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研宄的目标，目前已分离鉴定出40 余种人参皂苷单体。因为人参皂苷影响了多重的代谢通路，所以其效能也是复杂的，并且各 种人参皂苷的效能是难以分离出来的。而对单体进行生物活性研宄易于阐明其确切的药理 作用，故对于人参皂苷单体化合物的研宄越来越多。人参皂苷单体化合物中RgnRbpRc等 量较高，而RcURg3、肋2等属于稀有皂苷，但药理活性却优于主要人参皂苷。其中，人参皂苷 Rd是主要皂苷代谢后在肠道中吸收利用的主要形式之一，对神经系统、心脑血管以及肾功 能都具有良好的药理作用。
[0003] 现有分离提取人参皂苷Rd的工艺主要采用如图2和图3所示方法，洗脱剂采用氯 仿-甲醇-水系统，提取过程引入有毒试剂氯仿，并且采用梯度洗脱，使得分离纯度不高，操 作烦琐，生产过程不易控制，不适宜工业化生产。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于，提供一种人参皂苷Rd的提取工艺，能提高人参皂苷Rd的分离 纯化效果，避免毒性有机试剂的使用，操作简便，生产过程易于控制，适宜工业化生产。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：一种人参皂苷Rd的提取工 艺，包括以下步骤：
[0006] Sl，将含有人参皂苷Rd成分的药材粉碎成药粉，采用70 %?95 %乙醇回流提取， 过滤，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1. 15?1. 26的浸膏，得总提取物；
[0007] S2,取总提取物，加2倍量纯化水，搅匀，上DlOl大孔吸附树脂柱，先用纯化水 洗脱，继用40 %?80%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度为 1. 10?1. 20的清膏，得总皂苷；
[0008] S3,取总皂苷，吸附于2倍量硅胶上，挥发至干，过筛，将其加入硅胶层析柱中，用 正丁醇-乙酸乙酯-水=2 : 3 : 5等度洗脱，分段收集，经薄层色谱检查合并人参皂苷Rd 流份，减压回收溶剂至干，得人参皂苷Rd粗品；
[0009] S4,取人参皂苷Rd粗品，用甲醇溶解并加入纯化水，搅匀，上Rp-C18反相层析硅胶 柱，用甲醇-水=75 : 25等度洗脱，分段收集，经薄层色谱检查后合并所需组分，减压回收 溶剂，静置，析出沉淀，上层液返回反相层析硅胶柱分离，沉淀干燥得人参皂苷Rd。
[0010] 前述的人参皂苷Rd的提取工艺中，所述步骤SI具体为：将含有人参皂苷Rd成分 的药材粉碎成40?60目的药粉，加2倍量85 %乙醇，冷浸15?18h，滤过，药渣加1. 8倍 量85%乙醇，回流提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为 1. 24?1. 26的浸膏，得总提取物。
[0011] 前述的人参皂苷Rd的提取工艺中，所述步骤S2包括：
[0012] S21，装柱：用乙醇充分湿润预先处理过的DlOl大孔吸附树脂，搅拌排除气泡，装 柱，浸泡12h，用95%乙醇冲洗至流出液加水混合后不呈浑浊为止，继用纯化水置换其中的 乙醇至无醇味，备用；
[0013] S22,上样：取总提取物，加2倍量纯化水，搅匀，缓缓加入预先处理过的DlOl大孔 吸附树脂柱中，使全部进入柱床，静置吸附12h;
[0014] S23,洗脱：先用5L/kgajR纯化水洗脱，水洗脱液弃去；继用不少于纯化水用量的 60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度为1. 10?1. 20的清 膏，得总皂苷。
[0015] 前述的人参皂苷Rd的提取工艺中，所述步骤S3包括：
[0016] S31，上柱样品制备：取总皂苷，吸附于2倍量的硅胶上，挥发至干，过60目筛，备 用；
[0017] S32,装柱：取总皂苷10倍量的柱层析硅胶，用正丁醇-乙酸乙酯-水=2 : 3 : 5的上层溶液湿法装柱，反复用洗脱剂洗脱，使硅胶充分下沉紧密；
[0018] S33,上样及洗脱：硅胶层析柱中预留一定洗脱液使其淹没硅胶，将上柱样品慢慢 加入层析柱中，用正丁醇-乙酸乙酯-水=2 : 3 : 5的上层溶液等度洗脱，分段收集，每 流份收集量为I. 5L/kgajR，经薄层色谱检查后合并人参皂苷Rd流份，65?70°C减压回收溶 剂至干，得人参皂苷Rd粗品。
[0019] 前述的人参皂苷Rd的提取工艺中，所述步骤S4包括：
[0020] S41，上柱样品制备：取人参皂苷Rd粗品，按2. 5mL甲醇/g人参皂苷Rd粗品的比 例用甲醇溶解后，加入甲醇体积1/3的纯化水，搅匀，备用；
[0021] S42,装柱：按Ikg硅胶/30g人参皂苷Rd粗品的比例称取反相层析硅胶Rp-C18， 用甲醇湿法装柱；
[0022] S43,上样及洗脱：将上柱样品湿法上柱，用甲醇-水=75 : 25等度洗脱，分段收 集，每流份收集量为〇. 5L/kgajR，经薄层色谱检查后合并所需组分，75?80°C减压回收溶剂 至上柱样品体积的1. 5?2倍，静置15?18h，析出沉淀，上层液返回反相层析硅胶柱分离， 沉淀于40°C真空干燥，得人参皂苷RcL
[0023] 前述的人参皂苷Rd的提取工艺中，所述薄层色谱检查具体为：每流份分别取 10mL，蒸干，残渣加ImL甲醇溶解，作为供试品溶液；另取适量人参皂苷Rd对照品，加甲醇制 成每ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VIB的薄层色 谱法试验，吸取所述供试品溶液5?10yL和对照品溶液5yL，分别点于同一硅胶GF254板 上，以正丁醇-乙酸乙酯-水=4 : 3 : 5的上层溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以10%浓硫酸-乙醇溶液，于105°C加热至斑点显色清晰。
[0024] 前述的人参皂苷Rd的提取工艺中，所述含有人参皂苷Rd成分的药材为三七、人参 或西洋参。
[0025] 为解决现有技术所存在的问题，申请人对人参皂苷Rd提取工艺进行了完善研宄， 具体如