min。
[0047] (4)漂洗 向离心柱的第一腔体21中加入500ulwashbufferA，盖好管盖，12000g离心lmin，将 离心柱转移到新的收集管中，加入500ulwashbufferB，盖好管盖，再次12000g离心lmin， 将离心柱转移到新的收集管中，20000g离心2min。
[0048] (5)离心柱转移至新的离心管中，从离心柱的第二腔中往核酸吸附膜上加入50ul Elutionbuffer，室温放置5min，20000g离心lmin，丢弃离心柱，离心管中的DNA溶液用于 检测或-20°C储存。
[0049] 实施例4: 常规离心柱法提取血斑检材中的DNA，包括以下步骤： (1)准备模拟血斑检材 切下0. 5cm2牛仔织物，向牛仔织物上加入50ul新鲜EDTA抗凝小鼠全血，室温放置1 小时，使其自然干燥，作为模拟血斑检材。然后将模拟血斑检材剪成小块，放入1. 5ml离心 管中。
[0050] (2)裂解 向模拟血斑上加入200ulLysisbuffer和20ul蛋白酶K，盖上管盖，65°C裂解20min。
[0051] (3)结合 向模拟血斑上加入200ulbindingbuffer，混勾后，12000g离心lmin，将上清液转移至 常规离心柱中，12000g离心lmin，将离心柱转移到新的收集管中。
[0052] (4)漂洗 向离心柱中加入500ulwashbufferA，盖好管盖，12000g离心lmin，将离心柱转移到 新的收集管中，加入500ulwashbufferB，盖好管盖，再次12000g离心lmin，将离心柱转 移到新的收集管中，20000g离心2min。
[0053] (5)离心柱转移至新的离心管中，向离心柱正中央加入50ulElutionbuffer，室 温放置5min，20000g离心lmin，丢弃离心柱，离心管中的DNA溶液用于检测或-20°C储存。
[0054] 上述实施例1-4中所用的试剂成分如下： 裂解液中含有如下含量的成分：异硫氰酸酸胍〇. 2M，十二烷基磺酸钠1%;Tris10mM;CaCl22mM;TritonX-100 1. 5% ;裂解液pH值 7. 5。
[0055] 结合液中含有如下含量的成分：盐酸胍4M，聚合度为8000的聚乙二醇30% ;无水 乙醇 50% (v/v)，Tris10mM;结合液pH7.0。
[0056] 漂洗液A中含有如下含量的成分：异硫氰酸酸胍1M，EDTA2mM;无水乙醇50%(v/ v)，TrislOmM;漂洗液ApH7.0。
[0057]漂洗液B:NaCl0?5M，Tris10mM，无水乙醇 50% (v/v)，漂洗液B的pH值 7. 0。
[0058] 洗脱液为去离子水。
[0059]实施 5 电泳检测实施1-4中提取的DNA 图1拭子检材中提取的DNA琼脂糖凝胶电泳图。10ulDNA样品与2ul6Xloading buffer混合液于1%琼脂糖凝胶，1xTAEbuffer，4V/cm条件下电泳，然后使用4 <SYBR GreenI染色20min，于凝胶成像系统检测。1 :本发明离心柱法提取的拭子全血DNA;2 :常规 离心柱法提取的拭子全血DNA;M:DL2000DNAmarker。
[0060] 图2血斑检材中提取的DNA琼脂糖凝胶电泳图。10ulDNA样品与2ul6xloading buffer混合液于1%琼脂糖凝胶，1XTAEbuffer，4V/cm条件下电泳，然后使用4XSYBR GreenI染色20min，于凝胶成像系统检测。M:DL2000DNAmarker;1 :本发明离心柱法提取 的血斑DNA;2 :常规离心柱法提取的血斑DNA。
[0061 ] 从本实施例的实验结果可以看出，采用本发明的核酸快速提取装置及方法，能够 显著地提高核酸提取效率，因而本发明的装置和方法核酸提取过程中，尤其针对痕量(如法 医鉴定）样品的核酸提取过程中，能够有效避免因拭子、棉签、精斑、血斑、烟蒂等检材的吸 附和离心管壁的吸附而造成微量核酸物证的损失，提高核酸提取效率，同时减少交叉污染。
[0062] 以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种核酸快速提取装置，包括离心柱，其特征在于：所述离心柱包括两个被分隔形 成的独立腔体，所述独立腔体包括第一腔体和第二腔体，所述第一腔体与第二腔体之间设 置有将二者分隔成独立腔体的竖直分隔体和水平分隔体；离心柱管壁的局部与竖直分隔 体、水平分隔体包围形成第一腔体，而离心柱管壁的剩余部分与竖直分隔体、水平分隔体及 离心柱的底部包围形成第二腔体，所述水平分隔体设置有连通第一腔体与第二腔体的出液 孔；所述离心柱中还设置有微孔过滤膜和位于微孔过滤膜下方的核酸吸附膜，所述离心柱 顶部设置有分别与所述第一腔体和第二腔体连接的开口，所述离心柱底部的内侧设置有该 核酸吸附膜；所述离心柱底部设置有具有通孔的装载封盖，该核酸吸附膜离心时承托于装 载封盖并卡嵌在所述离心柱子的下端部内侧，所述核酸吸附膜位于所述第二腔体内并介于 水平分隔体下方与所述离心柱底部的内侧。
2. 如权利要求1所述的核酸快速提取装置，其特征在于：该微孔过滤膜设置于所述第 一腔体的底部内侧或者设置于所述水平分隔体与所述离心柱底部之间。
3. 如权利要求1所述的核酸快速提取装置，其特征在于：所述微孔过滤膜为聚醚砜膜； 所述核酸吸附膜为玻璃纤维膜或者硅胶膜。
4. 如权利要求1所述的核酸快速提取装置，其特征在于：所述离心柱的水平横截面为 圆形，所述竖直分隔体分割离心柱水平横截面圆形直径的3/4至4/5 ;所述水平分隔体距离 心柱底部内侧的核酸吸附膜2-5mm。
5. 如权利要求1所述的核酸快速提取装置，其特征在于：所述核酸快速提取装置还包 括套于所述离心柱外侧并与所述离心柱相匹配的离心管，以及盖合离心柱顶部设置的开口 的管盖，所述管盖衔接设置于所述离心管的顶部边缘或者衔接设置于所述离心柱的顶部边 缘。
6. -种基于如权利要求1-5中任意一项所述的核酸快速提取装置实现的核酸快速提 取方法，其特征在于，依次包括如下步骤： (1) 裂解：将待测样品或者附着有待测样品的检测材料放入离心柱第一腔体中，加入 150-300ul裂解液，于 56-65°C加热裂解 10_30min; (2) 结合：静置冷却至室温，向离心柱第一腔体中加入结合液150-300ul，混匀， 6000-20000g离心l_2min; (3) 漂洗：向离心柱第一腔体加入300-500ul漂洗液A，6000-20000g离心l-2min;然 后再向离心柱第一腔体加入300-500ul漂洗液B，6000-20000g离心l-2min;空管20000g 离心 2_5min; (4) 洗脱：向离心柱第二腔体中加入20-lOOul洗脱液至核酸吸附膜上，室温静置 5-lOmin，20000g离心 2min。
7. 如权利要求6所述的核酸快速提取方法，其特征在于，所述裂解液中含有如下含 量的成分：胍盐0.1-1M，十二烷基磺酸钠或十二烷基硫酸钠0.1- 4%，TrisImM- 20mM， CaC12 1-lOmM，TritonX-100 0? 1-3% ;裂解液pH值 7. 2-8. 0。
8. 如权利要求6所述的核酸快速提取方法，其特征在于，所述结合液中含有如下含量 的成分：胍盐1-6M，聚合度为6000-20000的聚乙二醇10-40%，无水乙醇体积百分比浓度 30-80%，TrisImM- 20mM;结合液pH值 6-7.5。
9. 如权利要求6所述的核酸快速提取方法，其特征在于： 所述漂洗液A中含有如下含量的成分：胍盐0. 1-2M，EDTA1-lOmM，无水乙醇体积百分 比浓度 30-80%，TrisImM- 20mM;漂洗液A的pH值为 6-7. 5 ; 所述漂洗液B:NaC10.l-2M，TrisImM- 20mM，无水乙醇体积百分比浓度30-80%，漂洗 液B的pH值为6-7. 5。
10.如权利要求6所述的核酸快速提取方法，其特征在于，所述洗脱液为去离子水或pH8. 0 的IOmMTris-HCl。
【专利摘要】本发明提供了一种核酸快速提取装置，包括离心柱，所述离心柱包括两个被分隔形成的独立腔体，所述独立腔体包括第一腔体和第二腔体，第一腔体与第二腔体之间设置有将二者分隔成独立腔体的竖直分隔体和水平分隔体；离心柱中还设置有微孔过滤膜和核酸吸附膜，所述离心柱顶部设置有分别与所述第一腔体和第二腔体连接的开口，所述离心柱底部的内侧设置有该核酸吸附膜。本发明还提供了一种基于该核酸快速提取装置实现的核酸快速提取方法。本发明的技术方案，在针对痕量（如法医鉴定）样品的核酸提取过程中，能够有效避免因拭子、棉签、精斑、血斑、烟蒂等检材的吸附和离心管壁的吸附而造成微量核酸物证的损失，提高核酸提取效率，同时减少交叉污染。
【IPC分类】C12M1-12, C12M1-24, C12N15-10
【公开号】CN104694382
【申请号】CN201510101883
【发明人】余家昌, 杜正平, 熊槐
【申请人】余家昌, 埃捷思生物科技有限公司, 奥健生物科技（广州）有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月9日