核酸分析试剂盒及核酸分析方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种核酸分析试剂盒及核酸分析方法。
【背景技术】
[0002]以往，在核酸分析中，从提取待检体到供于分析该待检体中所含有的核酸期间，在进行从待检体提取核酸等前处理中进行多次容器的交换。通常，在以手工操作进行前处理的情况下，通过每进行一次容器交换时对交换前后的容器进行对应，从而防止样品取错。在待检体数目很多的情况下，进行容器的对应操作是很繁琐的，且发生样品取错的概率变高。
[0003]作为防止该样品取错的方案，已知有将识别子探针混合于待检体中，将识别子探针与待检体一起进行扩增的方法(例如，参照专利文献I。)。该识别子探针在通过与待检体相同的引物而被扩增的区域具有可对于附于各待检体中的个别编码进行解码的碱基序列。因此，在扩增待检体后，通过对扩增产物中所含有的识别子探针的个别编码进行解码，从而可特定扩增产物源自于哪个待检体。
[0004]另一方面，作为对于生物组织的切片中所含有的特定的分子的量或活性的空间分布进行解析的方法，已知有将识别靶分子的探针导入至切片上的多个位置，并将识别各探针的切片上的位置的标记物(Tag)附于该探针的方法(例如，参照专利文献2。)。从切片中回收与分子反应的探针，并分析附于探针的标记物，从而可知切片的各位置中的靶分子的量或活性。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1:日本特开2007-74967号公报
[0008]专利文献2:美国专利申请公开第2011/0245111号说明书
【发明内容】
[0009]发明要解决的问题
[0010]然而，专利文献I及2中记载的方法中，对于每个待检体需要准备具有不同碱基序列的识别子探针或标记物。即，在分析对象的待检体数目很多的情况下，有对于不得不准备很多种的识别子探针或标记物的不便。
[0011]本发明是鉴于上述问题而完成的，其目的在于提供一种利用很少种类的核酸就能很准确地鉴定供于分析的多个样品的各自的来源的核酸分析试剂盒及核酸分析方法。
_2] 用于解决问题的方案
[0013]为了实现上述发明目的，本发明提供以下的方法。
[0014]本发明的第I方式是一种核酸分析试剂盒，其具备多个支撑体，所述多个支撑体保持含有核酸的识别探针且支撑待检体，前述识别探针含有具有已知的碱基序列的至少I种核酸且每个前述支撑体中前述核酸的种类和量中的至少一者不同并以能够混合于前述待检体的方式保持在前述支撑体。
[0015]根据本发明的第I方式，在使待检体分别支撑于多个支撑体待检体时，保持在支撑体的识别探针中所含有的检测用的核酸混合于待检体中。此时在混合于各待检体中的识别用的核酸的种类和量中至少一者，在每个待检体中相互不同。因此，在对由支撑于支撑体的各待检体所制备的样品进行核酸分析时，通过对每个样品中所含有的识别用的核酸也进行解析，且对该核酸的种类和/或量也进行鉴定，从而可以基于该检测用的核酸的种类和/或量很准确地鉴定各样品源自于哪个待检体。
[0016]如此，通过使混合于各待检体中的识别用的核酸的种类和量中的至少一者不同，从而可以进行多个待检体相互间的识别，因此识别探针只要含有很少种类的核酸即可，从而能够利用很少种类的核酸来准确地鉴定多个样品的各自的来源。
[0017]上述第I方式中，可以具备对应表，所述对应表将前述多个支撑体与分别被该多个支撑体保持的前述识别探针的组成即前述核酸的种类和量的组合相对应。
[0018]以此方式，可以很容易地把握在哪个支撑体上保持有哪个组成的识别探针。
[0019]上述第I方式中，前述支撑体为收容前述待检体的容器，前述识别探针也可以被封入至前述容器内。
[0020]以此方式，仅向容器内投入待检体就可以很容易地将识别探针混合于待检体中。
[0021]上述第I方式中具备基板，所述基板能够沿着规定的分割线分割成多个芯片且粘贴有作为前述待检体的生物组织的切片，前述识别探针可分别被前述多个芯片保持。
[0022]以此方式，在对作为待检体的生物组织的切片的一部分进行分析的情况下，通过将切片粘贴于基板后并沿着分割线将基板和切片同时分割，从而可制备混合了一种识别探针的切片的片段。
[0023]上述第I方式中，前述核酸可以为DNA (脱氧核糖核酸)。
[0024]以此方式，可制成为适合于待检体中所含有的DNA的分析的构成。
[0025]上述第I方式中，前述核酸可以为RNA(核糖核酸)。
[0026]作为待检体的分析对象的核酸为RNA时，识别探针中所含有的核酸优选为RNA。在识别探针含有RNA时，为了不被RNA核糖核酸酶分解，也可使用被修饰的RNA例如寡核苷酸的2’位置取代为甲基的RNA等。
[0027]上述第I方式中，前述核酸可以为核酸类似物质。作为核酸类似物质，可以举出:如DNA或RNA这样的天然型核苷酸(天然存在的核苷酸)的侧链等被氨基等官能团修饰的物质、或者被蛋白质或低分子化合物等标识的物质。更具体地，例如可举出:桥联的核酸(Bridged nucleic acid:BNA)、2，-O, 4，-C-乙稀桥联核酸(2，-O, 4，-C-Ethylene-bridgedNucleic Acids:ENA)、天然型核苷酸的4’位氧原子被硫原子取代的核苷酸、天然型核糖核苷酸的2’位轻基被甲氧基取代的核苷酸、己糖醇核酸(Hexitol Nucleic Acid:HNA)、肽核酸(PNA)等。
[0028]上述第I方式中，前述DNA的碱基长度可为20个碱基以上且500个碱基以下。
[0029]以此方式，可使识别探针的制备及在核酸分析或前处理过程中的DNA操作更加容易O
[0030]上述第I方式中，保持在各前述支撑体的前述DNA的分子数可为100分子以上且100000分子以下。
[0031]以此方式，识别探针不会对于待检体中所含有的核酸的分析带来影响，从而能够确保识别探针的DNA的定量精度。
[0032]本发明的第2实施方式为核酸分析方法，其包括:探针添加工序:将包含具有已知的碱基序列的至少I种核酸的识别探针分别添加至多个待检体中；和核酸分析工序:对于各前述待检体中所含有的核酸进行分析。在前述探针添加工序中，将前述核酸的种类和量中的至少一者相互不同的前述识别探针添加至前述多个待检体中，在前述核酸分析工序中，对于添加至各前述待检体中的前述识别探针中所含有的前述核酸也进行解析。
[0033]根据本发明的第2实施方式，探针添加工序中将识别探针添加至待检体之后，核酸分析工序中，在对由该待检体制备的样品进行核酸分析时，通过对于各样品中所含有的检测用的核酸也进行解析，且对于该核酸的种类和/或量也进行鉴定，从而能够很准确地基于该检测用的核酸的种类和/或量来鉴定各样品源自于哪个待检体。
[0034]如此，通过使添加至各待检体的识别用的核酸的种类和量中的至少一者不同，从而可使多个待检体相互地识别，因此，识别探针只要含有很少种类的核酸即可，就能利用很少种类的核酸很准确地鉴定多个样品的各自的来源。
[0035]上述第2实施方式中，前述探针添加工序中，可以将前述待检体投入至收容前述识别探针的容器内。
[0036]以此方式，仅将待检体投入至容器就可很容易地将识别探针添加至待检体。
[0037]上述第2实施方式中，前述探针添加工序中进而包括切断工序:在散在并粘贴有如述识别探针的基板上粘贴生物组织的切片，且将粘贴有如述切片的基板与如述切片一起切断成含有一个识别探针的多个芯片，在前述核酸分析工序中，可对于附着于在前述切断工序中得到的前述芯片上的前述切片的一部分进行分析。
[0038]以此方式，可以很容易地对存在于切片的各位置上的核酸进行分析。
[0039]上述第2实施方式中，前述探针添加工序中进而包括切断工序:在生物组织的切片上散在并粘贴前述识别探针，并将粘贴有前述识别探针的前述切片切断成含有一个识别探针的多个片段，前述核酸分析工序中，也可对在前述切断工序中切断的前述切片的片段进行分析。
[0040]以此方式，可以很容易地对存在于切片的各位置的核酸进行分析。
[0041]上述第2实施方式中，可以在前述切断工序之前进而包括杂交工序:使用具有与靶核酸互补的已知的碱基序列的核酸探针对前述切片进行原位杂交(in situhybridizat1n)。
[0042]以此方式，在核酸分析工序中可以基于核酸探针检测出靶核酸，并可以提高靶核酸的检测灵敏度。
[0043]上述第2实施方式中，前述核酸分析工序中，可使用定量核酸扩增法或能够进行核酸定量的碱基序列读取装置对前述待检体及前述识别探针中所含有的核酸进行分析。
[0044]以此方式，能够更准确地定量源自各待检体的样品中所含有的核酸。
[0045]上述第2实施方式中，前述识别探针中所含有的前述核酸也可以为DNA。前述DNA的碱基长度优选为20个碱基以上且500个碱基以下，各前述识别探针中所含有的前述DNA的分子数优选为100分子以上且100000分子以下。
[0046]上述第2实施方式中，前述核酸分析工序中，使用定量核酸扩增法对添加至各前述待检体中的前述DNA进行分析，前述定量核酸扩增法中的前述DNA的扩增率可大致相同。更优选的是，前述定量核酸扩增法为PCR(聚合酶链式反应)法，各前