br>[0238] a)割晒、堆放和/或收割包含本发明的种子的植物地面部分；
[0239] b)脱粒和/或风选植物部分以将种子与其余植物部分分离；以及
[0240] c)筛选和/或分选步骤b)中分离的种子，将筛选和/或分选出的种子装入到料斗 中，从而产生种子料斗。
[0241] 在一个实施方案中，在相关时，本发明的或适用于本发明的脂质或油（优选 种子油）具有近似于实施例部分的表中所提供的那些的脂肪水平，如表10的种子 CT136-27-18-2 或 CT136-27-18-19 或者表 22 的种子油。
[0242] 除非另外明确陈述，否则本文任何实施方案都应被视为向任何其它实施方案施加 必要的变更。
[0243] 本发明在范围上不受限于本文所述的特定实施方案，所述实施方案仅意图出于例 示目的。功能上等同的产物、组合物以及方法明显在如本文所描述的本发明的范围内。
[0244] 在本说明书中，除非另外具体地说明或上下文另外要求，否则提及单个步骤、物质 的组合物、步骤的组或物质组合物的组应视为涵盖那些步骤、物质组合物、步骤的组或物质 组合物的组中的一个和多个（即一个或多个）。
[0245] 在下文中，本发明是借助于以下非限制性实施例且参照附图加以描述。
【附图说明】
[0246] 图1.需氧DHA生物合成路径。
[0247] 图2.在PJP3416-GA7的左边界与右边界之间的T-DNA插入区域图。RB指示右边 界；LB，左边界；TER，转录终止子/多腺苷酸化区域；PR0,启动子；编码区被指示在箭头上 方，启动子和终止子在箭头下方。Micpu_A6D，细小微胞藻（Micromonas pusilla) Δ6-去饱 和酶；Pyrco-Δ6Ε，心形塔胞藻（Pyramimonas cordata) Δ 6_ 延伸酶；Pavsa-A5D，盐生巴 夫藻（Pavlova salina) Δ 5_去饱和酶；Picpa-ω 3D，毕赤酵母 ω 3_去饱和酶；Pavsa-Δ 4D, 盐生巴夫藻Δ 4_去饱和酶；Lackl-Δ 12D，芽殖酵母（Lachancea kluyveri) Δ 12-去饱 和酶；Pyrco_A5E，心形塔胞藻Δ5-延伸酶。NOS指示根癌土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens)胭脂碱合酶转录终止子/多腺苷酸化区域；FP1，欧洲油菜截短的napin启动 子；FAE1，拟南芥FAEl启动子；凝集素，大豆凝集素转录终止子/多腺苷酸化区域；Cnll和 Cnl2指示亚麻conlininl或conlinin2启动子或终止子。MAR指示来自普通烟草的Rb7基 质结合区。
[0248] 图3.在PJP3404的左边界与右边界之间的T-DNA插入区域图。标签为如图2中。
[0249] 图4.在PJP3367的左边界与右边界之间的插入区域图。标签为如图2中。
[0250] 图5.油含量（w/w)对比DHA含量，作为占来自转基因拟南芥种子的脂质的总脂肪 酸含量的百分比。
[0251] 图6.代表性RT-PCR凝胶显示Λ 6-去饱和酶基因相对于在使用pJP3416-GA7转化 的欧洲油菜胚的T-DNA中的其它转基因的低表达。条带从左显示RT-PCR产物：1，DNA大小 标记物；条带2, Λ 12去饱和酶；条带3, ω 3-去饱和酶；条带4, Λ 6-去饱和酶（低表达）； 条带5, Λ 6-延伸酶；条带6, Λ 5-去饱和酶；条带7, Λ 5-延伸酶；条带8, Λ 4-去饱和酶。
[0252] 图7.通过NMR对Α)金枪鱼油和Β)转基因 DHA拟南芥种子油进行位置分布分析。 标记为"DHA- α "的峰代表存在于TAG的sn-Ι和sn-3位置中的DHA的量（在没有位置偏 好的情况下，这可等于总DHA的66% )，而标记为"DHA-β "的峰代表存在于TAG的sn-2位 置的DHA的量（在没有偏好的情况下，这可等于DHA的33% )。
[0253] 图8.在转基因拟南芥发育（灰色）和成熟（成熟）种子中的主要的含DHA三酰 甘油物质的LC-MS分析。DHA之后的数字指示其它两种脂肪酸中的碳原子总数和双键总数。 因此，DHA/34:1也可以指示为TAG 56:7,等。
[0254] 图9.㈧具有环和侧链编号的碱性植物甾醇结构。⑶一些植物甾醇的化学结构。
[0255] 图10.在从用来自GA7_modB构建体的T-DNA转化的欧洲油菜种子的单种T2种子 中获得的种子油的总脂肪酸含量中的DHA水平。每个点显示单个种子中的DHA水平，其中 每列点代表来自单个Tl植物的T2种子。
[0256] 序列表说明
[0257] SEQ ID NO :l-pJP3416-GA7 核苷酸序列。
[0258] SEQ ID NO :2-pGA7-mod_B 核苷酸序列。
[0259] SEQ ID NO :3-pGA7-mod_C 核苷酸序列。
[0260] SEQ ID NO :4-pGA7-mod_D 核苷酸序列。
[0261] SEQ ID NO :5-pGA7-mod_E 核苷酸序列。
[0262] SEQ ID NO :6-pGA7-mod_F 核苷酸序列。
[0263] SEQ ID NO :7-pGA7-mod_G 核苷酸序列。
[0264] SEQ ID NO :8-p0RE04+llABGBEC_Cowpea_EPA_ 插入核苷酸序列。
[0265] SEQ ID NO :9_用于在植物中表达芽殖酵母Λ 12去饱和酶的密码子优化的开放阅 读框。
[0266] SEQ ID NO :10_芽殖酵母Λ 12-去饱和酶。
[0267] SEQ ID NO :11_用于在植物中表达毕赤酵母ω3去饱和酶的密码子优化的开放阅 读框。
[0268] SEQ ID NO :12_毕赤酵母ω 3去饱和酶。
[0269] SEQ ID NO :13_编码细小微胞藻（Micromonas pusilla) Δ 6-去饱和酶的开放阅 读框。
[0270] SEQ ID NO :14_用于在植物中表达细小微胞藻Λ 6-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框（版本1)。
[0271] SEQ ID NO :15_用于在植物中表达细小微胞藻Λ 6-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框（版本2)。
[0272] SEQ ID NO :16_细小微胞藻Λ 6去饱和酶。
[0273] SEQ ID NO :17_ 编码绿色鞭毛藻（Ostreococcus Iucimarinus) Δ 6_ 去饱和酶的 开放阅读框。
[0274] SEQ ID NO :18_用于在植物中表达绿色鞭毛藻Λ 6-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框。
[0275] SEQ ID NO :19_绿色鞭毛藻Λ 6-去饱和酶。
[0276] SEQ ID NO :20_ 海洋微藻（Ostreococcus tauri) Δ 6_ 去饱和酶。
[0277] SEQ ID NO :21_编码心形塔胞藻Λ 6-延伸酶的开放阅读框。
[0278] SEQ ID NO :22_用于在植物中表达心形塔胞藻Λ 6-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框（在3'端截短并且编码功能化延伸酶）（版本1)。
[0279] SEQ ID NO :23_用于在植物中表达心形塔胞藻Λ 6-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框（在3'端截短并且编码功能化延伸酶）（版本2)。
[0280] SEQ ID NO :24_用于在植物中表达心形塔胞藻Λ 6-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框（在3'端截短并且编码功能化延伸酶）（版本3)。
[0281] SEQ ID NO :25_心形塔胞藻Λ 6-延伸酶。
[0282] SEQ ID NO :26_截短的心形塔胞藻Λ 6-延伸酶。
[0283] SEQ ID NO :27-编码盐生巴夫藻Λ 5-去饱和酶的开放阅读框。
[0284] SEQ ID NO :28_用于在植物中表达盐生巴夫藻Λ 5-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框（版本1)。
[0285] SEQ ID NO :29_用于在植物中表达盐生巴夫藻Λ 5-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框（版本2)。
[0286] SEQ ID NO :30_盐生巴夫藻Λ 5-去饱和酶。
[0287] SEQ ID NO :31_编码心形塔胞藻Λ 5-去饱和酶的开放阅读框。
[0288] SEQ ID NO :32_心形塔胞藻Λ 5-去饱和酶。
[0289] SEQ ID NO :33_编码心形塔胞藻Λ 5-延伸酶的开放阅读框。
[0290] SEQ ID NO :34_用于在植物中表达心形塔胞藻Λ 5-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框（版本1)。
[0291] SEQ ID NO :35_用于在植物中表达心形塔胞藻Λ 5-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框（版本2)。
[0292] SEQ ID NO :36_用于在植物中表达心形塔胞藻Λ 5-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框（版本3)。
[0293] SEQ ID NO :37_心形塔胞藻Λ 5-延伸酶。
[0294] SEQ ID NO :38_编码盐生巴夫藻Λ 4-去饱和酶的开放阅读框。
[0295] SEQ ID NO :39_用于在植物中表达盐生巴夫藻Λ 4-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框（版本1)。
[0296] SEQ ID NO :40_用于在植物中表达盐生巴夫藻Λ 4-去饱和酶的密码子优化的开 放阅读框（版本2)。
[0297] SEQ ID NO :41_盐生巴夫藻Λ 4-去饱和酶。
[0298] SEQ ID NO :42_编码球等鞭金藻Λ 9-延伸酶的开放阅读框。
[0299] SEQ ID NO :43_球等鞭金藻Λ 9-延伸酶。
[0300] SEQ ID NO :44-编码赫氏圆石藻（Emiliania huxleyi)CCMP1516A9-延伸酶的开 放阅读框。
[0301] SEQ ID NO :45_用于在植物中表达赫氏圆石藻Δ 9-延伸酶的密码子优化的开放 阅读框。
[0302] SEQ ID NO :46_ 赫氏圆石藻 CCMP1516A9-延伸酶。
[0303] SEQ ID NO :47_ 编码 Pavlova pinguis Δ 9_ 延伸酶的开放阅读框。
[0304] SEQ ID NO :48_Pavlovapinguis Δ 9_ 延伸酶。
[0305] SEQ ID NO :49_编码盐生巴夫藻Λ 9-延伸酶的开放阅读框。
[0306] SEQ ID NO :50_盐生巴夫藻Λ 9-延伸酶。
[0307] SEQ ID NO :51_编码盐生巴夫藻Λ 8-去饱和酶的开放阅读框。
[0308] SEQ ID NO :52_盐生巴夫藻Λ 8-去饱和酶。
[0309] SEQ ID NO :53至61-寡核苷酸引物/探针。
【具体实施方式】
[0310] 一般件技术和!足义
[0311] 除非另外明确定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都应视为具有与由本领 域（例如在细胞培养、分子遗传学、脂肪酸合成、转基因植物、蛋白质化学以及生物化学中） 普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。
[0312] 除非另外指示，否则本发明中利用的重组蛋白、细胞培养和免疫技术是为本领 域技术人员所熟知的标准程序。此类技术在如以下之资源的文献中加以描述并且说明： J.Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons(1984)； J.Sambrook 等，Molecular Cloning ：A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989) ;T.A.B;rown(编辑者），Essential Molecular Biology :A Practical Approach，第 I 卷和第 2 卷，IRL Press (1991) ;D.M· Glover 和 B.D. Hames (编 辑者），DNA Cloning :A Practical Approach，第 1-4 卷，IRL Press (1995 年和 1996 年）； F.M. Ausubel 等（编辑者），Current Protocols in Molecular Biology，Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988,包括迄今为止所有更新版本）；Ed Harlow 和 David Lane (编辑者），Antibodies :A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory，（1988);以及 J.E. Coligan等（编辑者），Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (包括迄今为止所有更新版本）。
[0313] 术语"和/或"，例如"X和/或Y"应理解为是指"X和Y"或"X或Y"，且将用以对 于两种含义或对于任一含义提供明确的支持。
[0314] 除非相反陈述，否则如本文所用的术语"约"是指指定值的+/-10 %、更优选 +/-5 %、甚至更优选+/-1 %。
[0315] 在整篇本说明书中，用词"包含（comprise)"或变化形式（如"comprises"或 "comprising"）应理解为暗示包括所述要素、整数或步骤、或成组要素、整数或步骤，而非排 除任何其它要素、整数或步骤、或成组要素、整数或步骤。
[0316] 所诜择的定义
[0317] 如本文所用的术语"提取的植物脂质"和"分离的植物脂质"是指已例如通过压碎 从植物或其部分（如种子）中提取的脂质组合物。所述提取的脂质可为通过例如压碎植物 种子获得的相对粗的组合物或者其中已去除大部分（如果不是全部的话）源于植物材料 的水、核酸、蛋白质和碳水化合物中的一种或多种或每一种的更纯组合物。纯化方法的实例 描述如下。在一个实施方案中，提取的或分离的植物脂质包含按组合物重量计至少约60 %、 至少约70%、至少约80%、至少约90%或至少约95% (w/w)脂质。所述脂质在室温下可为 固体或液体，当为液体时它被视为油。在一个实施方案中，本发明的提取的脂质未与由另一 种来源产生的另一种脂质如DHA(例如，来自鱼油的DHA)共混。在一个实施方案中，在提取 之后，油酸与DHA、棕榈酸与DHA、亚油酸与DHA以及总ω6脂肪酸：总ω3脂肪酸中的一 种或多种或所有的比率在与完整种子或细胞内的比率相比时没有显著改变（例如，不大于 10 %或5 %改变）。在另一个实施方案中，未将提取的植物脂质暴露于如氢化或分馏的程 序，当与完整种子或细胞内的比率相比时，所述程序可改变油酸与DHA、棕榈酸与DHA、亚油 酸与DHA以及总ω6脂肪酸：总ω3脂肪酸中的一种或多种或所有的比率。当油中包含本 发明的提取的植物脂质时，所述油可另外包含非脂肪酸分子如甾醇。
[0318] 如本文所用的术语"提取的植物油"和"分离的植物油"是指包含提取的植物脂质 或分离的植物脂质并且在室温下为液体的物质或组合物。所述油从植物或其部分（如种 子）中获得。所述提取或分离的油可为通过例如压碎植物种子获得的相对粗的组合物或者 其中已去除大部分（如果不是全部的话）源于植物材料的水、核酸、蛋白质和碳水化合物中 的一种或多种或每一种的更纯组合物。所述组合物可包含为脂质或非脂质的其它组分。在 一个实施方案中，油组合物包含至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%或至少 约95% (w/w)提取的植物脂质。在一个实施方案中，本发明的提取的油未与由另一种来源 产生的另一种油如DHA(例如，来自鱼油的DHA)共混。在一个实施方案中，在提取之后，油 酸与DHA、棕榈酸与DHA、亚油酸与DHA和/或DPA以及总ω6脂肪酸：总ω3脂肪酸中的 一种或多种或所有的比率在与完整种子或细胞内的比率相比时没有显著改变（例如，不大 于10%或5%的改变）。在另一个实施方案中，未将提取的植物油暴露于如氢化或分馏的 程序，当与完整种子或细胞内的比率相比时，所述程序可改变油酸与DHA和/或DPA、棕榈酸 与DHA和/或DPA、亚油酸与DHA和/或DPA以及总ω6脂肪酸：总ω3脂肪酸中的一种或 多种或所有的比率。本发明的提取的植物油可包含非脂肪酸分子如甾醇。
[0319] 如本文所用的"油"为主要包含脂质并且在室温下为液体的组合物。例如，本发明 的油优选包含按重量计至少75%、至少80%、至少85%或至少90%脂质。通常，纯化的油 包含按油中的脂质重量计至少90%三酰甘油（TAG)。油的少量组分如二酰甘油（DAG)、游离 脂肪酸（FFA)、磷脂和留醇可如本文