:1 :2)混合均匀，即得到冷水可凝的培养基凝固剂。
[0040] 制备例3 :将粉碎后的黄原胶、卡拉胶和瓜尔胶分别过160目筛，取黄原胶、卡拉胶 和瓜尔胶各8g、8g、8g (质量比为1 :1 :1)混合均匀，即得到冷水可凝的培养基凝固剂。
[0041] 实施例2不同培养基凝固剂的保水性能对比试验
[0042] 试验方法：
[0043] 分别取粉碎后的黄原胶、卡拉胶、瓜尔胶，过160目筛，作为试验组（1)~（3)的培 养基凝固剂；
[0044] 取实施例1中制备例1~3的冷水可凝的培养基凝固剂，作为试验组（4)~（6)的 培养基凝固剂；
[0045] 根据【背景技术】部分中公开号为CN101570730A的专利公开的内容，取5g黄原胶和 5g瓜尔胶(质量比为1:1)混合，将Ig聚丙烯酸和8g刺槐豆胶(质量比为1:8)混合，然后将 上述前后两种混合物以8:1的质量比混合均匀，得到另外一种冷水可凝的培养基凝固剂， 作为试验组（7)的培养基凝固剂；
[0046] 称量上述试验组（1)~（7)中的培养基凝固剂Ig分别放于直径7cm的平皿中，加 入25ml (25g)去离子水，混匀，则其质量百分比为4%，待充分溶胀后，测量重量（ml)，放入 37°C恒温箱中培养并打开平皿盖，分别于^^!!、"!!。(^测定一次重量化^:按下公式计算 不同时间点的保水率：保水率=Hl 2Al1。每个试验组取5个样本，求平均保水率。
[0047] 同时以空白水样作为对照，考察凝胶的保水性能。空白水样Oh时，测量重量（ml)， 放入37°C恒温箱中培养并打开平皿盖，分别于4h、8h、16h、20h测定一次重量（m2)，按下公 式计算不同时间点的保水率：保水率=m2/ml。即为空白水样对照组的保水率。
[0048] 试验结果：
[0049] 试验结果见图2。可见，试验组（4)的培养基凝固剂在同一时间段的保水率均高于 其它培养基凝固剂，因此试验组（4)的培养基凝固剂具有良好的保水性能。
[0050] 实施例3 :冷水可凝的培养基凝固剂的吸水量和凝胶强度对比试验
[0051] 试验方法：分别取实施例1制备例1和实施例2中试验组（7)所得的冷水可凝 的培养基凝固剂粉末各〇.5g，加入100mL去离子水，于三角烧瓶中121 °C灭菌15min;吸 取l〇ml，滴加于直径7cm平板，pH值为7. 2-7. 4, 50 °C干燥7h，测其凝胶的吸水量。用 BR00KFIELDLFRA-4500凝胶强度测定仪测定凝胶强度。使用测定仪参数设置：触发点3. 0g、 距离0.2!11111、速度0.1111111/8、圆柱形探头面积1.266(^ 2。强度公式为：凝胶强度&/(^2)=测 定读数//1.266。
[0052] 试验结果：
[0053] 实施例1中制备例1所得冷水可凝的培养基凝固剂吸水量为140g/g，pH值为7. 2， 凝胶强度为450.0 g/cm2 ;
[0054] 实施例2中试验组（7)所得的冷水可凝的培养基凝固剂吸水量为107g/g，pH值为 7. 4,凝胶强度为376. Og/cm2。
[0055] 对比可见，本发明实施例1制备例1中冷水可凝的培养基凝固剂的吸水性能和凝 胶强度均优于公开号为CN101570730A的专利公开的冷水可凝的培养基凝固剂。
[0056] 实施例4 :菌落测试片的制备和性能试验
[0057] 利用本发明的冷水可凝的培养基凝固剂制备菌落测试片，具体步骤如下：
[0058] 1.取按照实施例1中制备例1的方法所得的冷水可凝的培养基凝固剂35g、营养 肉汤培养基16. 47g，氯化三苯四氮唑（TTC) 68. 6mg，混合均匀得混合物（I);
[0059] 2.按照2:1:1:5比例分别称量脱氢酶辅酶（NAD+) 0. 25g和酸水解酪蛋白I. 25g， 混合均匀得混合物（2);
[0060] 3.按照9:1比例分别称量脱氧胆酸钠（DOC)O. 45g和甲基葡萄糖醛酸钠0. 05g，混 合均匀得混合物（3);
[0061] 4.取上述混合物（1) 51. 54g、混合物（2) Ig和混合物（3) 0· 5g，混合均匀；
[0062] 5.将适当尺寸的涂覆一层压力敏感胶的底板1和上层盖2的底部利用双面胶3进 行粘结，底板顶部贴上双面胶；
[0063] 6.将上述最终得到的混合物均匀涂布在底板1和上层盖2之间；
[0064] 7.揭开底板1顶部的双面胶，将底板1和上层盖2的顶部粘合；
[0065] 8.分装，密封，环氧乙烷灭菌，4°C避光保存备用。
[0066] 菌落测试片的性能试验方法：
[0067] 菌落测试片吸水量和凝胶强度的试验方法同实施例3。
[0068] 试验结果：
[0069] 菌落测试片的吸水量为124g/g，pH为7. 3,凝胶强度为300g/cm2。
[0070] 实施例5 :利用实施例4制备的菌落测试片和平板倾注法测定菌落总数的对比试 验
[0071] 试验方法：
[0072] 选用大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌6538、链球菌556、多杀性巴氏杆菌C48-3、 沙门氏菌1789等几种有代表性的菌种，每种菌种取8个样品，分别接种到实施例4制备的 菌落测试片中，稀释菌液，调节菌液浓度为30〈X〈300,接种菌量均为lml。于37°C恒温箱 中培养48h，计算红色菌落总数。同时用国标平板倾注法检测相应菌种，调节菌液浓度为 30〈X〈300,接种菌量均为lml。然后将溶化并冷却至45°C的适宜琼脂培养基倾注入平板中， 轻轻摇动平板，使稀释的菌液与培养基混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，于37°C恒温箱 中培养48h，计算菌落总数。试验结果：
[0073] 各菌种对比试验结果见表1~5。可见，实施例4制备的菌落测试片和平板倾注法 相比较，对于5种菌种的测定结果差异均不显著（P>0. 05)。
[0074] 表1大肠杆菌菌落总数
[0075]
【主权项】
1. 一种冷水可凝的培养基凝固剂，其特征在于，由以下重量份的原料组成：黄原胶、卡 拉胶和瓜尔胶，其中， 所述黄原胶和卡拉胶的质量比为1-2:1 ; 所述黄原胶和卡拉胶的混合物与瓜尔胶的质量比为1:0. 5-2. 5。
2. 根据权利要求书1所述的冷水可凝的培养基凝固剂，其特征在于，所述黄原胶和卡 拉胶的质量比为1:1 ;所述黄原胶和卡拉胶的混合物与瓜尔胶的质量比为1:1. 5。
3. -种冷水可凝的培养基凝固剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 分别粉碎黄原胶、卡拉胶和瓜尔胶，过筛； (2) 将粉碎过筛的黄原胶和卡拉胶以1-2:1的质量比混合均匀； (3) 将步骤（2)得到的混合物与瓜尔胶以1:0. 5-2. 5的质量比混合均匀。
4. 一种菌落测试片，其特征在于，包括从下至上的底板、凝胶层和上层盖，其中所述凝 胶层由权利要求1或2所述的冷水可凝的培养基凝固剂、营养肉汤培养基、显色剂和生长因 子按照一定比例均匀混合而成。
5. 根据权利要求4所述的菌落测试片，其特征在于，所述凝胶层中冷水可凝的培养基 凝固剂和营养肉汤培养基的质量比为16-20 :8。
6. 根据权利要求4所述的菌落测试片，其特征在于，所述由冷水可凝的培养基凝固剂 和营养肉汤培养基组成的混合物与显色剂的质量比为750:1。
7. 根据权利要求4所述的菌落测试片，其特征在于，所述显色剂为氯化三苯四氮唑。
8. 根据权利要求4所述的菌落测试片，其特征在于，所述生长因子包括由NAD+ (辅酶 I)和酸水解酪蛋白组成的生长因子1以及由脱氧胆酸钠（DOC)和甲基葡萄糖醛酸钠组成 的生长因子2 ;所述生长因子1中NAD+ (辅酶I)和酸水解酪蛋白的质量比为1:5,所述生长 因子2中脱氧胆酸钠（DOC)和甲基葡萄糖醛酸钠的质量比为9:1。
9. 根据权利要求8所述的菌落测试片，其特征在于，所述凝胶层中由冷水可凝培养 基凝固剂、营养肉汤培养基与显色剂组成的混合物与生长因子1、生长因子2的质量比为 50:1:0. 5〇
10. -种菌落测试片的制备方法，具体包括如下步骤： (1) 将适当尺寸的底板和上层盖的底部利用双面胶进行粘结，底板顶部贴上双面胶； (2) 将冷水可凝的培养基凝固剂、营养肉汤培养基、显色剂和生长因子按照一定的比例 均匀混合； (3) 将步骤（2)配制好的混合物均匀涂布到底板和上层盖之间； (4) 揭开底板顶部的双面胶，将底板和上层盖顶部粘合，气体消毒灭菌，装袋密封。
【专利摘要】本发明公开了一种冷水可凝的培养基凝固剂及其制备方法和应用。该培养基凝固剂由以下重量份的原料组成：黄原胶、卡拉胶和瓜尔胶，其中黄原胶和卡拉胶的质量比为1-2:1；所述黄原胶和卡拉胶的混合物与瓜尔胶的质量比为1:0.5-2.5。该冷水可凝的培养基凝固剂具有无毒、透明、稳定、不易被分解、中性、凝胶强度高、保水性能和吸水性能良好等优点。
【IPC分类】C12Q1-06
【公开号】CN104726533
【申请号】CN201310706508
【发明人】张许科, 刘兴金, 张晓会
【申请人】洛阳惠中兽药有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年12月18日